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未吸收冗余、环境扫描、探索式创新——基于企业内外部因素调节作用的研究

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科学学与科学技术管理 2017年第1期38卷 108-119页

作者：李宁娟高山行西安交通大学管理学院西安710049

基于我国303家制造类企业的调研数据,首先研究了环境扫描在未吸收冗余和探索式创新之间起到的中介作用,继而探讨了企业家导向和产业竞争强度对未吸收冗余和环境扫描之间关系的调节作用。结果表明:环境扫描在未吸收冗余和探索式创新之间... 详细信息

基于我国303家制造类企业的调研数据,首先研究了环境扫描在未吸收冗余和探索式创新之间起到的中介作用,继而探讨了企业家导向和产业竞争强度对未吸收冗余和环境扫描之间关系的调节作用。结果表明:环境扫描在未吸收冗余和探索式创新之间起到了完全中介作用;单独而言,产业竞争强度负向调节未吸收冗余和环境扫描之间的关系,而企业家导向对这一关系的正向调节作用并不显著;同时考虑产业竞争强度和企业家导向时,两者的交互项正向调节了未吸收冗余和环境扫描之间关系。

关键词：未吸收冗余环境扫描探索式创新企业家导向产业竞争强度

采用蛋白质组学结合高通量测序技术分离和鉴定抗CD47纳米抗体

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采用蛋白质组学结合高通量测序技术分离和鉴定抗CD47纳米抗体

作者：李宁娟新疆大学

学位级别：硕士

CD47属于免疫球蛋白超家族成员之一,在多种肿瘤细胞表面高表达,CD47通过结合巨噬细胞表面的SIRPα并发出“别吃我”信号从而促使肿瘤细胞逃避巨噬细胞吞噬作用。同时,CD47在活化T淋巴细胞中高表达,其能与血小板反应蛋白1(TEP 1)结合,抑... 详细信息

CD47属于免疫球蛋白超家族成员之一,在多种肿瘤细胞表面高表达,CD47通过结合巨噬细胞表面的SIRPα并发出“别吃我”信号从而促使肿瘤细胞逃避巨噬细胞吞噬作用。同时,CD47在活化T淋巴细胞中高表达,其能与血小板反应蛋白1(TEP 1)结合,抑制T淋巴细胞的增殖与活化,进而影响T淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。因此抗CD47单克隆抗体可以作为肿瘤免疫治疗中的一种新疗法。而纳米抗体是一种源于骆驼可变区的单域抗体,它是目前分子量最小且具有完全抗原结合功能的单域抗体,因此其在药物开发中具有巨大的潜力同时可以作为研究症断的高亲和试剂。本实验利用高通量测序技术和质谱技术联用获得抗CD47骆驼纳米抗体并检测抗体的亲和力,探索蛋白组学技术和基因组学技术在发现和鉴定过程中的价值。本研究内容主要包括以下三个方面:1骆驼免疫抗体库的高通量测序分析以及纳米抗体数据库的建立首先诱导表达以及纯化BL21-pET30a-CD47的原核重组蛋白CD47并免疫新疆双峰驼六次,通过间接ELISA方法测定第五次和第六次免疫血清中抗CD47抗体的滴度,分离全血中外周淋巴细胞,提取总RNA,反转录成cDNA,通过巢式PCR扩增骆驼VHH基因,并将扩增的VHH基因进行高通量测序,使用AbMining ToolBox分析高通量测序数据,利用Python去除数据库中的终止密码子并建立抗CD47纳米抗体氨基酸数据库。间接ELISA测定第六次免疫血清抗CD47抗体滴度为1:384 000,说明抗原CD47在骆驼体内激起了免疫反应,以cDNA为模板通过巢式PCR成功扩增VHH基因,利用高通量测序平台Illumina HiSeq共获得1 054 550条原始基因序列,去除接头序列和低质量序列后共获得序列945 061条,其中有效读长的核苷酸序列主要分布在300-350 nt,碱基质量大于20占总序列的97.67%,碱基质量大于30占总序列的95.58%。获得抗CD47纳米抗体氨基酸数据库为9.19×10。经AbMining ToolBox分析高通量测序数据,得到160 485条特异性的CDR3序列,其氨基酸长度主要分布8-35,分析CDR3肽段等电点的主要分布,其中pI 8-9和4-5分别占22.72%和20.1%。2骆驼免疫血清中抗CD47特异性抗体的制备和鉴定首先利用ProteinA对骆驼血清中IgG进行亲和纯化,并通过间接ELISA和Western Blot测定IgG与原核重组蛋白CD47的结合活性,之后将CD47蛋白与CNBr琼脂糖树脂偶联来捕获抗CD47特异性抗体,并测定CD47-CNBr偶联效率,最后通过ELISA和Western Blot检测抗CD47特异性抗体与原核CD47抗原的结合活性,除此之外分别验证血清,IgG和抗CD47特异性抗体与真核CD47和EC9706细胞的结合活性,从而为后续质谱鉴定获得一株能用于治疗的抗体提供实验基础。实验结果显示,利用ProteinA从血清中纯化的IgG经间接ELISA和Western Blot测定表明,当IgG稀释1:256 000仍然与原核表达的CD47蛋白仍具有良好的结合活性。经15%SDS-PAGE显示CD47蛋白成功偶联于CNBr琼脂糖树脂并测定偶联效率为67.8%,间接ELISA筛选纯化抗CD47特异性抗体的洗脱液为pH 2.4的Gly-HCl,利用该洗脱液成功从CD47-CNBr琼脂糖树脂免疫亲和纯化出抗CD47特异性抗体。经间接ELISA和Western Blot验证抗CD47特异性抗体与原核CD47具有高结合活性和特异性。通过ELISA验证血清,IgG和抗CD47特异性抗体与真核CD47的结合情况显示,血清、Ig G与真核CD47蛋白和EC9706细胞有结合活性,相反,抗CD47特异性抗体与真核CD47和细胞无结合。3重链抗体的质谱分析以及抗CD47纳米抗体制备和鉴定首先对ProteinA免疫亲和层析分离的IgG经15%SDS-PAGE分离并切下其亚型重链抗体IgG2和IgG3再进行LC MS/MS鉴定,利用Mascot检索软件将质谱数据与骆驼纳米抗体氨基酸数据库匹配,并将匹配得分最高的3条序列克隆表达,利用间接ELISA测序其与原核CD47蛋白结合,从中挑选结合活性最高的抗CD47纳米抗体并验证该纳米抗体与真核CD47的结合,同时将噬菌体展示技术筛选获得的高亲和力抗体序列分别与质谱数据和高通量数据进行匹配。实验结果显示,3个重组质粒经诱导表达,其中除VHH-410994蛋白不表达外,其余2个蛋白VHH-437310、VHH-737446均表达,其大小在20 kD左右。经间接ELISA表明VHH-737446与原核CD47具有结合活性但与真核CD47不结合。噬菌体展示技术筛选获得的抗体序列仅能与高通量数据库成功

关键词：免疫亲和层析高通量测序技术质谱技术

玉米谷氨酰胺转胺酶异源表达系统构建及酶学性质的研究

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玉米谷氨酰胺转胺酶异源表达系统构建及酶学性质的研究

作者：李宁娟哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

谷氨酰胺转胺酶(Transgfutaminase,TGase)是一类催化酰基发生转移的蛋白酶,主要催化蛋白质或多肽分子中谷酰胺残基的γ-酰胺基发生转移反应,当酰基受体为赖氨酸的ε-氨基时,TGase催化蛋白分子之间或之内形成ε-(γ-谷胺酰)赖氨酸键,使... 详细信息

谷氨酰胺转胺酶(Transgfutaminase,TGase)是一类催化酰基发生转移的蛋白酶,主要催化蛋白质或多肽分子中谷酰胺残基的γ-酰胺基发生转移反应,当酰基受体为赖氨酸的ε-氨基时,TGase催化蛋白分子之间或之内形成ε-(γ-谷胺酰)赖氨酸键,使得蛋白发生交联,从而改变其结构和理化性质,甚至带来新的功能,因此,TGase在工农业、食品、化妆品和医药领域中有着极为广泛的应用。本实验根据GeneBank公布的玉米TGase基因的cDNA序列,利用分子生物学手段将玉米谷氨酰胺转胺酶(TGase)基因克隆到两种不同的异源表达系统中进行异源表达,并对玉米TGase的酶学性质进行了初步研究。首先采用Trizol法从玉米幼苗叶片中提取玉米叶片的总RNA,RT-PCR扩增得到了玉米TGase,将其克隆到PMD-18T载体上,经过PCR、酶切和测序鉴定,克隆得到的玉米TGase基因与GeneBank上公布的TGZ15(AJ421525)的同源性为100%,完全一致。利用生物信息学软件对玉米TGase进行了序列分析,通过ChloroP 1.1、DNAStar和Oimga 2.0对该序列编码的蛋白的亲疏水性、二级结构和Motif进行了预测。TGase氨基酸序列的1-47个氨基酸编码一个叶绿体转运肽,TGase整个分子为亲水性分子,空间结构中散布着较多的α螺旋和少量的β折叠,属于典型的α+β类型结构。在成功克隆得到玉米谷氨酰胺转胺酶基因的基础上将其构建到原核表达载体pLLP-OmpA上,并转化大肠杆菌Top10F’。重组菌株经IPTG诱导表达,SDS-PAGE分析没有检测到目的蛋白带的表达,在发酵液中也没有检测到TGase活性,说明对于玉米TGase原核表达的方案并不是很成功。为了找到更加合适的玉米谷氨酰胺转胺酶异源表达系统,本研究将玉米TGase基因克隆到了真核表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母GS115,筛选得到高拷贝的转化子。转化子经甲醇诱导96h时,表达上清酶活为0.3U/ml, SDS-PAGE分析在61kDa处检测到了目的蛋白的表达,对酪蛋白的交联反应进一步确定了玉米谷氨酰胺转胺酶基因在毕赤酵母中进行了有效表达。接着本实验从暗光培养的玉米幼苗中提取了天然的玉米TGase,并对初步测定了其酶学性质,经过40%-70%的硫酸铵沉淀,玉米TGase被提纯了2.01倍回收率为34.6%,通过天然TGase对酪蛋白的交联初步确定了其最适作用pH值为8.5,最适反应温度为45℃。本研究在成功克隆得到玉米TGase基因的基础上,利用生物信息学软件进行了序列分析,之后将克隆的基因克隆到了大肠杆菌和毕赤酵母两个异源表达系统中,经诱导、活性测定和SDS-PAGE分析证明该基因在毕赤酵母中进行了有效表达。本实验为进一步利用基因工程方法获得食品用的谷氨酰胺转胺酶奠定了理论和实践基础,也为利用基因工程技术生产植物源性酶制剂进行了有益的探索。

关键词：谷氨酰胺转胺酶基因克隆序列分析异源表达

制度性歧视与抗争政治——以“反乙肝歧视运动”个案为例

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制度性歧视与抗争政治——以“反乙肝歧视运动”个案为例

作者：李宁娟上海师范大学

学位级别：硕士

“反乙肝歧视运动”是我国近年来抗争政治的一个标本事件。本文运用社会运动等理论工具对其进行长时段、全景式研究。本文视20世纪90年代以来逐渐强化的乙肝歧视为一种制度性歧视，即政府、学校、企业等多个主体使用法规、政策等将乙肝... 详细信息

“反乙肝歧视运动”是我国近年来抗争政治的一个标本事件。本文运用社会运动等理论工具对其进行长时段、全景式研究。本文视20世纪90年代以来逐渐强化的乙肝歧视为一种制度性歧视，即政府、学校、企业等多个主体使用法规、政策等将乙肝病毒携带者排斥在公务员录用、入学、就业等机会之外。在排斥建构过程中，先是出现了个体化反乙肝歧视抗争，抗争者往往采取较为隐蔽的方式，本文称为“弱者的武器”。随着网络社会发展，建立了“肝胆相照”论坛，反乙肝歧视运动进入组织化建构阶段。一方面，“肝胆相照”论坛积聚了会员及资源等，基于认同营造了家园氛围，并初步开展了有组织的集体行动。另一方面，论坛催生了公益组织—北京益仁平中心，该中心推动反乙肝歧视运动步入纵深阶段。以2004年公务员体检办法修改为标志，反乙肝歧视运动取得成效，制度性歧视渐次消退。本文发现,在反乙肝歧视运动的组织化建构阶段，精英、资源动员、策略选择等极为重要，是运动取得成果的核心因素。本文由此提出反乙肝歧视运动的机制—过程图。

关键词：制度性歧视抗争政治反乙肝歧视运动

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企业如何从绿色管理中获利:战略更新视角

科技进步与对策 2022年第17期39卷 83-92页

作者：李宁娟来爽西北工业大学公共政策与管理学院陕西西安710129

绿色管理已经成为企业应对政府和公众环境关切的重要战略选择。企业如何以及在何种情况下能依靠绿色管理提高绩效成为重要研究问题。整合资源基础观和战略更新研究,构建一个被调节的中介模型,以阐明绿色管理如何通过战略更新的中介作用... 详细信息

绿色管理已经成为企业应对政府和公众环境关切的重要战略选择。企业如何以及在何种情况下能依靠绿色管理提高绩效成为重要研究问题。整合资源基础观和战略更新研究,构建一个被调节的中介模型,以阐明绿色管理如何通过战略更新的中介作用影响绩效,同时分析竞争强度的调节作用。基于288家企业的实证结果表明,绿色管理与企业战略更新、战略更新与企业绩效显著正相关,战略更新对绿色管理与绩效之间的关系具有完全中介作用,竞争强度正向调节战略更新对企业绩效的影响,也正向调节战略更新在绿色管理与企业绩效之间的中介作用。研究有助于从战略更新视角深化对绿色管理影响企业绩效路径机制的理解,对企业成功实施绿色转型有重要实践启示。

关键词：绿色管理战略更新企业绩效竞争强度

印度仿制药发展的制度因素分析及对我国的借鉴

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科技进步与对策 2016年第19期33卷 47-53页

作者：李宁娟高山行西安交通大学管理学院陕西西安710049

借鉴其它国家经验可推动我国仿制药的发展。印度仿制药业依靠强有力的制度支持获得了飞速发展,建立了全球范围的竞争优势。分析了印度医药产业制度变迁与产业发展之间的关系:印度医药制度变迁大致经历了3个阶段,其中专利法规、外国投资... 详细信息

借鉴其它国家经验可推动我国仿制药的发展。印度仿制药业依靠强有力的制度支持获得了飞速发展,建立了全球范围的竞争优势。分析了印度医药产业制度变迁与产业发展之间的关系:印度医药制度变迁大致经历了3个阶段,其中专利法规、外国投资管制政策、价格管制制度是3个最重要的制度因素。同时,通过对比分析,明晰了我国与印度医药制度之间的差异。最后,借鉴印度仿制药发展的经验,为推动我国仿制药高质量发展提出了建议。

关键词：仿制药医药产业制度变迁产业发展对比分析

环境扫描对探索式创新和新产品绩效影响的研究:被调节的中介效应

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管理学报 2017年第2期14卷 213-220页

作者：李宁娟高山行西安交通大学管理学院

基于303家中国制造业企业调研数据,首先研究了探索式创新在环境扫描和新产品绩效之间关系中起到的中介作用,继而探讨了企业创新独占能力对这一机制的调节作用。研究表明:环境扫描与企业新产品绩效正相关,其中探索式创新起到部分中介作用... 详细信息

基于303家中国制造业企业调研数据,首先研究了探索式创新在环境扫描和新产品绩效之间关系中起到的中介作用,继而探讨了企业创新独占能力对这一机制的调节作用。研究表明:环境扫描与企业新产品绩效正相关,其中探索式创新起到部分中介作用;创新独占能力不但正向调节了探索式创新和新产品绩效之间的关系,而且增强了探索式创新的中介作用,存在被调节的中介效应。

关键词：环境扫描探索式创新新产品绩效创新独占能力

人体试验伦理审查全流程、多方位监督模型——基于程序公平理论的研究

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科技管理研究 2017年第5期37卷 242-249页

作者：李宁娟高山行西安交通大学管理学院陕西西安710049

近年来我国不道德人体试验频发,严重影响了受试者、公众对人体试验的程序公平感知。究其原因,看似是现有人体试验伦理审查制度没有得到有效执行,但更深层次的原因在于完善的监督机制的缺位。为解决这一问题,提出人体试验全流程、多方位... 详细信息

近年来我国不道德人体试验频发,严重影响了受试者、公众对人体试验的程序公平感知。究其原因,看似是现有人体试验伦理审查制度没有得到有效执行,但更深层次的原因在于完善的监督机制的缺位。为解决这一问题,提出人体试验全流程、多方位监督模型。该模型认为,人体试验相关的整个过程包括:项目申请——试验进行——结果使用,都要受到多个监督主体多种形式的监督。分析指出这一监督机制的建立有助于降低不道德人体试验的发生几率,并进一步分析这一模型如何影响公众的程序公平感知和行为。

关键词：人体试验伦理审查制度程序公平感知监督模型

制度信任如何驱动企业创新?——基于医药企业的实证研究

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技术经济 2024年第6期43卷 31-43页

作者：李宁娟高山行西北工业大学公共政策与管理学院西安710072 西安交通大学管理学院西安710049

企业创新是推动产业结构转型升级,促进经济高质量发展的微观基础。整合制度理论和企业创新管理研究,提出并检验了制度信任影响突破性创新、渐进性创新和新产品绩效的理论框架。基于165家医药企业的实证结果表明,制度信任对突破性创新的... 详细信息

企业创新是推动产业结构转型升级,促进经济高质量发展的微观基础。整合制度理论和企业创新管理研究,提出并检验了制度信任影响突破性创新、渐进性创新和新产品绩效的理论框架。基于165家医药企业的实证结果表明,制度信任对突破性创新的正向影响大于其对渐进性创新的正向影响;突破性创新正向影响新产品绩效,渐进性创新与新产品绩效呈U形关系;制度信任显著调节了渐进性创新与新产品绩效之间的关系,但对突破性创新与新产品绩效之间关系的调节作用不显著。通过揭示制度信任在企业创新中的重要作用,研究对从认知视角理解外部正式制度影响创新的深层机制有一定理论贡献。研究结论对企业创新战略制定有重要启示,也对政府进一步完善与医药创新相关的正式制度安排,提升企业创新积极性有指导意义。

关键词：突破性创新渐进性创新制度信任新产品绩效