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婴儿肠源加氏乳杆菌的分离筛选及对高脂模型小鼠降脂机制研究

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婴儿肠源加氏乳杆菌的分离筛选及对高脂模型小鼠降脂机制研究

作者：李国花陕西科技大学

学位级别：硕士

乳酸菌属是一类广泛存在于自然界中的微生物,包括乳杆菌属、双歧杆菌属、链球菌属等;在食品、生物技术以及医疗卫生等领域具有重要价值。尤其是作为益生菌,具有调节肠道微生态平衡、调节免疫反应、缓解肠道疾病、降低血清胆固醇等重要... 详细信息

乳酸菌属是一类广泛存在于自然界中的微生物,包括乳杆菌属、双歧杆菌属、链球菌属等;在食品、生物技术以及医疗卫生等领域具有重要价值。尤其是作为益生菌,具有调节肠道微生态平衡、调节免疫反应、缓解肠道疾病、降低血清胆固醇等重要生理功能。其中高脂血症是由于长期高脂饮食引起的或脂质代谢异常引起的疾病,是中老年人的常见疾病,是心血管疾病及动脉粥样硬化的重要风险因素。目前的治疗手段主要是使用他汀类药物并且调整饮食结构、改变饮食方式。但是药物治疗也伴随一系列副作用的产生,比如血清转氨酶水平异常升高、肌酸激酶水平升高、脂溶性维生素吸收受损等。很多研究报道了用天然手段代替药物治疗,比如洋蓟、苜蓿、大豆等植物,但是这些物质对过敏人群和孕妇并不适用。也有大量研究发现某些益生菌能够通过改变菌群结构或产生特定代谢物的方式起到调节脂质代谢的作用。因此对于开发新型功能益生菌作为药物替代品依然是研究热点。本研究从健康婴儿粪便样本中分离、鉴定出加氏乳杆菌,并对其生化特性、安全性、功能特性进行评估,最终筛选出一株综合性能较优的菌株进行高脂饮食小鼠动物实验,评价其降脂性能。主要研究结果如下:(1)我们以125份健康婴儿粪便样本为研究对象,最终分离鉴定出加氏乳杆菌15株,这15株菌株的革兰氏染色均为阳性,LGI 6-5、6-9、6-15为短杆菌,其余菌株为长杆菌状;16S rRNA序列长度均在1500bp左右,序列信息与加氏乳杆菌高度同源;生化特性结果显示,有6株菌株可发酵棉子糖;7株菌株可以发酵山梨糖醇;接触酶试验、明胶液化试验结果均为阴性;均能发酵葡萄糖产酸,但不产气;淀粉水解实验结果均为阳性;硫化氢的产生情况,结果显示有10株为阳性,其余为阴性;发酵葡萄糖产生乙酰甲基甲醇实验结果9株为阳性,其余不变色为阴性;需氧型测定结果9株为兼性厌氧型,其余为微好氧型;石蕊牛奶实验结果显示3株呈中性,其余12株使得石蕊呈粉红色,说明在发酵过程中产酸,并且酸度值较高,能使牛奶凝固。经过以上一系列分离鉴定生化分析手段,对15株加氏乳杆菌的形态,生理生化特性有一个清晰的了解。(2)本研究以15株加氏乳杆菌为研究对象,对其安全性和功能特性进行评价,我们发现除了 LGI 6-9在血平板上出现小面积的溶血圈外,其他菌株均表现为无溶血性。抗生素实验中发现对四环素、万古霉素、利奈唑胺、利福平和亚胺培南的敏感率分别为86.7%、86.7%、80%、80%和100%,对甲氧苄啶表现出固有耐药。因此,通过安全性评价,我们排除LGI 6-9菌株,对其余14株菌株进行功能性评价。在抑菌实验中我们发现有1 1株菌株具有抑制大肠杆菌生长的能力,有7株对金黄色葡萄球菌具有抑制能力,其中LGI 6-1、LGI 6-2、LGI 6-3、LGI 6-4、LGI 6-6 和 LGI 6-14 菌株对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌同时表现出不同程度的抑制作用。耐酸耐胆盐实验中,发现LGI 6-1、LGI 6-6菌株具有良好的耐酸耐胆盐特性,在pH=2条件下2 h后达到90%以上存活率,在4 h后依然能够达到20%存活率。黏附实验发现,LGI 6-1、LGI 6-2、LGI 6-4、LGI 6-8菌株同时具有一定的自聚集、共聚集、疏水能力。体外降胆固醇实验结果显示,LGI 6-1、6-3的降解率分别为43.03%和40.83%。体外降甘油三酯实验结果显示LGI 6-10、6-11的降解率分别为42.62%和39.31%,LGI 6-1的降解率为27.3%。综合以上安全性实验及功能特性实验,我们最终筛选出LGI 6-1作为体内实验供试菌株。(3)本研究以3周龄小鼠为实验对象,经过8周建立高脂小鼠模型并分五组设计实验:空白组(Ctrl)、高脂损伤组(HFD)、加氏乳杆菌LGI 6-1治疗组(HFLR)、嗜酸乳杆菌ATCC 43121治疗组(HFLA)及两菌联用治疗组(HFM)进行动物实验。结果显示,与HFD组相比,HFM组的Lee’s指数显著降低;脂肪组织重量显著降低;在HE染色结果中,对肝脏细胞,脂肪细胞状态的改变也较明显;肝脏T-CHO(总胆固醇)、血清HDL-C(高密度脂蛋白胆固醇)的含量显著增加;肝脏中游离脂肪酸含量显著降低;GSH(谷胱甘肽)含量显著增加,丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)含量显著降低;TNF-α、IL-1β(炎症因子)水平显著降低;PPARγ、FAT/CD36(相关成脂基因)表达量显著降低。综合以上结果,本研究从125份婴儿粪便样本中分离鉴定出乳杆菌、肠球菌等223株,为益生菌开发提供更多菌种资源;通过对其中15株加氏乳杆菌进行体外安全性评价和功能性评价后,选择LGI 6-1探究体内降脂机制研究,我们发现将LGI 6-1与嗜酸乳杆菌ATCC 43121的菌株进行联用,对高脂饮食小鼠的机体各项指标均有显著的缓解作用。

关键词：加氏乳杆菌分离鉴定安全性评价功能评价高脂降胆固醇

健康婴儿粪便样本中加氏乳杆菌的分离鉴定及安全性评价

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食品工业科技 2023年第3期44卷 1-10页

作者：李国花赵馨张明新马雨哲张歆怡钱卫生鲁曦陕西科技大学食品与生物工程学院陕西西安710021 空军军医大学唐都医院陕西西安710032

目的:本研究从125例健康婴儿粪便样本中分离鉴定出加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)并对其安全性和抑菌性能进行评价。方法:本研究以1月龄健康婴儿粪便样本为对象,经过MRS培养基分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定和16S rRNA测序技术进... 详细信息

目的:本研究从125例健康婴儿粪便样本中分离鉴定出加氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)并对其安全性和抑菌性能进行评价。方法:本研究以1月龄健康婴儿粪便样本为对象,经过MRS培养基分离纯化、革兰氏染色、生化鉴定和16S rRNA测序技术进行菌种鉴定;随后,对分离得到的加氏乳杆菌利用血琼脂平板进行溶血性评价;利用微量肉汤稀释法对常见抗生素的药物敏性进行测定,并对加氏乳杆菌的安全性进行评价;最后,采用牛津杯法检测对大肠杆菌ATCC 25922和金黄色葡萄球菌ATCC 25923的抑制作用。结果:从125例健康婴儿粪便样本中成功分离并鉴定出15株加氏乳杆菌。溶血性检测结果显示,14株均无溶血性;待测菌株对四环素、万古霉素、利奈唑胺、利福平敏感性较高,对亚胺培南完全敏感,对甲氧苄啶完全耐药;抑菌实验结果显示,有6株菌同时对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有抑菌效果。结论:本研究从健康婴儿粪便样本中成功分离筛选出3株安全性较高且对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌同时具有一定抑制作用的加氏乳杆菌,编号分别为:LGI 6-1、LGI 6-2、LGI 6-3,作为潜在的益生菌资源,为后续深入探究加氏乳杆菌功能提供研究对象。

关键词：加氏乳杆菌婴儿粪便分离鉴定安全性抑菌性耐药性

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自媒体融入高中思想政治课程教学的路径研究

中国科技期刊数据库科研 2022年第4期 127-129页

作者：李国花拉萨阿里河北完全中学西藏拉萨850000

在信息时代中,教师需要通过自媒体不断的开拓新的教学思路。高中思政课的学习对于学生的发展轨迹有很大的影响,是素质教学的重要教学途径。高中思政教师学习需要结合自媒体创新教学活动设计,强化学生对思政知识框架的整体理解能力和应... 详细信息

在信息时代中,教师需要通过自媒体不断的开拓新的教学思路。高中思政课的学习对于学生的发展轨迹有很大的影响,是素质教学的重要教学途径。高中思政教师学习需要结合自媒体创新教学活动设计,强化学生对思政知识框架的整体理解能力和应用能力,让学生愿意进行一些知识探索,达到提升核心素养的教学目标。思政教学的创新优化是当下教学改革的热点,教师需结合网络资源,提供更多教学路径,使学生在思想学习和分析过程中,能够根据实际内容充分理解和应用教材知识点。本文就自媒体融入高中思政课程和思政课堂的路径研究作出简要分析。

关键词：高中思政教育实践分析创新策略

基于非靶向代谢组学技术探究喂养方式对剖宫产婴儿粪便中代谢物的影响

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中华实用儿科临床杂志 2023年第7期38卷 515-520页

作者：鲁曦赵馨张明新李国花周宁宁卫飞鹏赵燕妮陕西科技大学食品科学与工程学院西安710021 空军军医大学唐都医院介入疼痛科西安710032

目的探讨母乳和混合喂养对剖宫产婴儿粪便代谢物的影响。方法横断面研究。2021年秋季与2022年冬季分别在西安市南、北两家母婴护理机构收集了23例1月龄健康剖宫产婴儿粪便样本, 将样品分为母乳喂养组(11例)和混合喂养组(12例)。基于非... 详细信息

目的探讨母乳和混合喂养对剖宫产婴儿粪便代谢物的影响。方法横断面研究。2021年秋季与2022年冬季分别在西安市南、北两家母婴护理机构收集了23例1月龄健康剖宫产婴儿粪便样本, 将样品分为母乳喂养组(11例)和混合喂养组(12例)。基于非靶向代谢组学方法, 借助气相色谱-质谱联用技术, 探索不同喂养方式下剖宫产婴儿粪便代谢产物的变化情况, 利用非参数Mann-Whitney U检验方法筛选差异代谢物, 并对差异代谢产物进行代谢通路分析。结果共定性出155种代谢物, 包括糖及糖类衍生物57种, 脂肪酸34种, 有机酸25种, 氨基酸22种, 酯类8种, 核苷4种, 维生素3种以及2种其他物质。通过对差异代谢物的相对含量进行分析, 发现母乳喂养组中部分糖及糖的衍生物含量较高, 而混合喂养组中氨基酸、有机酸及脂肪酸含量较高。通过对差异代谢物的代谢通路进行分析, 共获得28条代谢通路, 其中丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢, 缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸代谢, 精氨酸代谢及柠檬酸循环(TCA循环)等代谢通路对婴儿健康有一定的影响。结论喂养方式对剖宫产婴儿粪便中的代谢物存在影响, 且混合喂养可能在一定程度上促进剖宫产婴儿肠道中TCA循环和氨基酸代谢的过程。

关键词：非靶向代谢组学喂养方式剖宫产婴儿粪便差异代谢物

基于16S rRNA测序分析罗伊氏乳杆菌酸乳对健康小鼠肠道菌群的影响

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食品科技 2023年第1期48卷 8-15页

作者：张明新马雨哲赵馨李国花任珂王宁鲁曦陕西科技大学食品科学与工程学院陕西西安710021 空军军医大学唐都医院消化内科陕西西安710032

目的:通过16S rRNA测序,探讨新型罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)发酵酸乳对健康小鼠肠道菌群的影响。方法:将24只KM小鼠分为4组,空白组(Ctr组,灌胃无菌水),对照组(BS组,灌胃传统酸乳,即保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)... 详细信息

目的:通过16S rRNA测序,探讨新型罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)发酵酸乳对健康小鼠肠道菌群的影响。方法:将24只KM小鼠分为4组,空白组(Ctr组,灌胃无菌水),对照组(BS组,灌胃传统酸乳,即保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)和嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus)发酵酸乳),混合发酵酸乳组(LBS组,灌胃L. reuteri、L. bulgaricus和S. thermophilus 3菌混合发酵酸乳),以及L. reuteri单独发酵酸乳组(L组,灌胃L. reuteri发酵酸乳)。连续灌胃10 d后收集各组小鼠粪便,通过16S rRNA测序分析各组小鼠肠道中菌群丰度、多样性及菌落组成结构。结果:与BS组相比,LBS组和L组小鼠体重增加百分比显著降低(P<0.0001);PCA与门水平菌群聚类分析表明,L组与Ctr组PCA空间距离以及2组菌群比例最为接近;属水平菌群分析表明,LBS和L组中另枝菌属(Alistipes)和副拟杆菌属(Parabacteroides)两类潜在益生菌的丰度相比Ctr组显著提高(P<0.05)。结论:实验中罗伊氏乳杆菌发酵酸乳灌胃对控制小鼠体重增长以及维持健康小鼠肠道微生物群落结构显示出了积极影响。该结果为探究罗伊氏乳杆菌酸乳的益生功能提供理论依据。

关键词：罗伊氏乳杆菌酸乳 16S rRNA 肠道菌群益生菌

基于Dtopsis法综合评价宁夏日光温室50个粉果番茄杂交组合

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华北农学报 2022年第S1期37卷 35-43页

作者：李国花王晓敏胡新华付金军高艳明李建设宁夏大学农学院宁夏银川750021 宁夏优势特色作物现代分子育种重点实验室宁夏银川750021 宁夏现代设施园艺工程技术研究中心宁夏银川750021 宁夏设施园艺(宁夏大学)技术创新中心宁夏银川750021 宁夏巨丰种苗有限责任公司宁夏银川750021

为了在宁夏地区筛选高产抗病的优良组合。连续2 a(2020,2021年)对种植于日光温室的50个粉果番茄初配制的杂交组合和2个对照(丰收128和美粉869)利用Dtopsis法进行了组合综合评价,并分别对植物学性状、果实性状、产量性状和抗病性等性状... 详细信息

为了在宁夏地区筛选高产抗病的优良组合。连续2 a(2020,2021年)对种植于日光温室的50个粉果番茄初配制的杂交组合和2个对照(丰收128和美粉869)利用Dtopsis法进行了组合综合评价,并分别对植物学性状、果实性状、产量性状和抗病性等性状进行描述统计分析。52个杂交组合各果实性状在杂交组合间的差异较大,但熟性较为一致。最优组合为33,该组合的理论产量相比于2个对照2 a都增产20%以上;它对3种病害达中抗等级及其以上,它的硬度达5.0 kg/cm 2以上,果肉厚达8.0 cm以上,是1个耐储运的组合。其次为组合47和1,这2个组合的理论产量较大,且47理论产量2 a的增幅达45%以上。组合1为商品性较优的组合,可溶性固形物含量较高硬度较大,且外观品质较好。通过2 a的综合评价最终筛选出组合33、47和1这3个组合适合在宁夏日光温室种植。

关键词：粉果番茄 Dtopsis法宁夏日光温室杂交组合综合评价

动力型支具康复训练在手部伸肌腱修复术后的护理

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广东医学 2011年第24期32卷 3294-3295页

作者：李国花南华大学附属南华医院手外科中心湖南衡阳421002

目的探讨利用动力型支具配合早期锻炼的方法在手部伸肌腱损伤修复术后功能恢复中的作用。方法选取54例手部伸肌腱损伤修复的患者,根据经济状况与意愿分成观察组与对照组,观察组采用动力型支具进行早期有计划、有系统的功能锻炼,而对照... 详细信息

目的探讨利用动力型支具配合早期锻炼的方法在手部伸肌腱损伤修复术后功能恢复中的作用。方法选取54例手部伸肌腱损伤修复的患者,根据经济状况与意愿分成观察组与对照组,观察组采用动力型支具进行早期有计划、有系统的功能锻炼,而对照组早期除临床常规治疗外,不进行程序化康复治疗。按国际手外科肌腱疗效评定法(TAM)评定疗效和术后3个月恢复原工作的情况。结果术后功能恢复优良率及恢复原工作情况,观察组明显优于对照组(P<0.05)。结论动力型支具能有效促进患指功能恢复,提高术后功能恢复优良率。

关键词：手伸肌腱损伤动力型支具康复训练