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江山乌猪肠道黏膜菌群组成及其功能的性别差异

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微生物学报 2024年第4期64卷 1249-1262页

作者：吴娴毕海洋武永淑李向臣张亚南浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

肠道黏膜微生物在调控宿主生理功能方面发挥重要作用,其结构组成受到多种因素影响。性别被认为是塑造肠道微生物的因素之一。然而,性别对肠道黏膜菌群的差异影响还不清楚。【目的】以江山乌猪为研究对象,探究性别差异对其肠道黏膜微生... 详细信息

肠道黏膜微生物在调控宿主生理功能方面发挥重要作用,其结构组成受到多种因素影响。性别被认为是塑造肠道微生物的因素之一。然而,性别对肠道黏膜菌群的差异影响还不清楚。【目的】以江山乌猪为研究对象,探究性别差异对其肠道黏膜微生物组成及功能的影响。【方法】选取性成熟的雌性和雄性江山乌猪各8头,利用16S rRNA基因高通量测序技术分析回肠和结肠黏膜菌群。【结果】在回肠黏膜中,雄性江山乌猪菌群的Chao1指数和Shannon指数显著高于雌性(P0.05)。菌群差异分析显示,回肠黏膜中,沙雷氏菌属(Serratia)和埃希氏志贺菌属(Escherichia_Shigella)在雌性组中的相对丰度显著高于雄性组(P<0.05),雄性组中Oscillospiraceae UCG-005、拟普雷沃氏菌属(Alloprevotella)、布劳特氏菌属(Blautia)和Prevotellaceae_NK3B31_group相对丰度显著高于雌性组(P<0.05);结肠黏膜中,雌性组中unclassified_Muribaculaceae、Rikenellaceae_RC9_gut_group和Prevotellaceae UCG-003相对丰度显著高于雄性组(P<0.05),Oscillospiraceae UCG-005、Lachnospiraceae_NK4A136_group和unclassified_Lachnospiraceae在雄性组中相对丰度更高(P<0.05)。功能预测发现,雄性乌猪回肠黏膜菌群显著富集了氨基酸代谢、碳水化合物代谢和能量代谢等功能途径(P<0.05);结肠黏膜菌群主要富集了膜转运相关的ABC转运蛋白和信号转导相关的双组分系统等功能途径(P<0.05)。【结论】不同性别江山乌猪肠黏膜菌群结构及功能具有明显差异。这些结果揭示了不同性别江山乌猪肠道黏膜菌群的差异特征,为了解和挖掘我国地方畜禽品种肠道微生物资源提供部分参考。

关键词：性别肠黏膜微生物微生物功能江山乌猪

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白术和酸枣仁提取物对大肠杆菌的抑菌活性研究

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中国畜牧杂志 2024年第4期60卷 306-311页

作者：吕曼婷吴科惠刘锋张亚南龚海洲王攀林李向臣宋丹浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

药用植物是天然抗生素的潜在来源之一,具有良好的抑菌作用。白术和酸枣仁是富含多种生物活性物质的药用植物,其对大肠杆菌(Escherichia coli)的抑制作用尚未在体外模型中进行评估。本试验旨在探究白术和酸枣仁提取物对大肠杆菌的抑菌效... 详细信息

药用植物是天然抗生素的潜在来源之一,具有良好的抑菌作用。白术和酸枣仁是富含多种生物活性物质的药用植物,其对大肠杆菌(Escherichia coli)的抑制作用尚未在体外模型中进行评估。本试验旨在探究白术和酸枣仁提取物对大肠杆菌的抑菌效果。采用微量肉汤法测定白术、酸枣仁提取物单独和联合作用对大肠杆菌的亚抑菌浓度并绘制抑菌曲线;用酶标仪微量法测定OD260和OD280数值、碱性磷酸酶(AKP)活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性;用SDS-PAGE凝胶电泳法检测大肠杆菌菌体总蛋白;采用结晶紫染色测定白术和酸枣仁提取物对大肠杆菌生物膜的作用。结果显示:与对照组相比,0.8 mg/mL白术和酸枣仁提取物单独处理及0.4 mg/mL白术和酸枣仁提取物、联合处理均显著抑制大肠杆菌生长、增加OD260、OD280数值及AKP活力,降低菌体胞内总蛋白含量,并且对生物膜具有破坏作用;此外,与对照组相比,白术提取物单独处理和白术、酸枣仁提取物联合作用显著降低LDH活性。以上结果表明,白术、酸枣仁提取物单独及联合作用对大肠杆菌均有抑制作用,且联合处理抑菌效果较单独处理更为明显。

关键词：白术酸枣仁大肠杆菌抑菌联合处理

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白术、酸枣仁提取物对金黄色葡萄球菌的抑菌效果研究

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饲料工业 2024年第7期45卷 93-99页

作者：吴科惠吕曼婷刘锋龚海洲张亚南王攀林李向臣宋丹浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室浙江杭州311300

试验旨在研究菊科植物白术干燥根茎切片提取物(白术提取物)、鼠李科植物酸枣的种子提取物(酸枣仁提取物)单独和联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。通过微量肉汤法测定抑菌浓度和抑制率;用酶标仪测定相应OD值以检测核酸和蛋白质含量... 详细信息

试验旨在研究菊科植物白术干燥根茎切片提取物(白术提取物)、鼠李科植物酸枣的种子提取物(酸枣仁提取物)单独和联合作用对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。通过微量肉汤法测定抑菌浓度和抑制率;用酶标仪测定相应OD值以检测核酸和蛋白质含量、乳酸脱氢酶(LDH)活力及碱性磷酸酶(AKP)活力,以确定对细菌细胞膜和细胞壁的影响,用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺(SDSPAGE)凝胶电泳检测金黄色葡萄球菌菌体总蛋白含量变化;用结晶紫染色法检测对细菌生物膜的抑制作用。结果表明:0.4 mg/mL白术、酸枣仁提取物单独及0.1 mg/mL二者联合作用对金黄色葡萄球菌均具有显著抑菌效果;与对照组相比,白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均使菌液上清液OD_(260)、OD_(280)数值和AKP活力显著增加,菌体LDH活力和总蛋白含量降低,抑制了生物膜的形成。说明白术、酸枣仁提取物单独和联合作用均可显著抑制金黄色葡萄球菌,且联合作用抑菌效果显著强于各药物单独作用。

关键词：金黄色葡萄球菌白术提取物酸枣仁提取物联合作用抑菌

江浙皖部分地区副鸡禽杆菌分离鉴定及生物学特性研究

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动物医学进展 2024年第5期45卷 39-45页

作者：吴娴毕海洋张燕茹李向臣何玉龙舒建洪武永淑浙江理工大学生命科学与医药学院浙江杭州310018 浙江理工大学绍兴生物医药研究院浙江绍兴312366 浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为了解江浙皖地区鸡传染性鼻炎流行状况,对浙江、江苏和安徽部分地区疑似鸡传染性鼻炎的8个鸡场进行样品采集,对122份样品进行病原菌分离,对10株分离株进行形态学、卫星试验、PCR鉴定、生化鉴定和血清型鉴定等检测;利用分离株人工感染SP... 详细信息

为了解江浙皖地区鸡传染性鼻炎流行状况,对浙江、江苏和安徽部分地区疑似鸡传染性鼻炎的8个鸡场进行样品采集,对122份样品进行病原菌分离,对10株分离株进行形态学、卫星试验、PCR鉴定、生化鉴定和血清型鉴定等检测;利用分离株人工感染SPF鸡的动物回归试验,对攻毒后7 d和14 d的鸡只进行病理剖检和病理组织切片观察。结果表明,122份样品中副鸡禽杆菌阳性数为48个,阳性率为39.3%,8个养殖场的阳性率为36.8%~50.0%。10株副鸡禽杆菌分离菌,其中A型3株、B型4株、C型3株,致病率为60%~80%。表明不同血清型副鸡禽杆菌在江浙皖地区均有流行,具有一定的致病性,这为鸡传染性鼻炎三价疫苗研发和防控提供参考。

关键词：鸡传染性鼻炎副鸡禽杆菌分离鉴定

姜黄素与根皮素联合作用对大肠杆菌的抑菌效果

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中国食品学报 2023年第8期23卷 75-83页

作者：刘锋陆殷明陶文静王攀林宋丹李向臣浙江农林大学动物科技学院、动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室杭州311300

为研究姜黄素和根皮素联合使用对大肠杆菌的抑菌作用,采用微量肉汤稀释法测定姜黄素、根皮素的亚抑菌浓度;细菌培养测定各药物在亚抑菌浓度剂量下,对大肠杆菌的生长曲线、胞外核酸蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)以及总蛋白含... 详细信息

为研究姜黄素和根皮素联合使用对大肠杆菌的抑菌作用,采用微量肉汤稀释法测定姜黄素、根皮素的亚抑菌浓度;细菌培养测定各药物在亚抑菌浓度剂量下,对大肠杆菌的生长曲线、胞外核酸蛋白、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)以及总蛋白含量的影响;牛津杯法分析各药物亚抑菌浓度剂量下,姜黄素与根皮素的联合抑菌效果。结果表明:1)姜黄素与根皮素在质量浓度均为250μg/mL时,对大肠杆菌的生长具有显著的抑制作用,此质量浓度确定为姜黄素与根皮素的亚抑菌浓度;2)亚抑菌浓度的姜黄素和根皮素联合作用,能够有效抑制大肠杆菌的生长,抑菌效果优于姜黄素与根皮素单独处理组(P<0.05);3)亚抑菌浓度的姜黄素和根皮素联合使用对大肠杆菌的细胞壁和细胞膜有很强的破坏性,导致菌液上清中核酸、蛋白质以及AKP指数均升高。同时,亚抑菌浓度的姜黄素和根皮素联合使用减少了菌体内总蛋白(包括LDH)的表达量,效果显著优于姜黄素与根皮素单独处理组(P<0.05)。由此可见,姜黄素和根皮素联合作用大肠杆菌时,抑菌效果优于姜黄素与根皮素单独使用。

关键词：姜黄素根皮素联合作用大肠杆菌抑菌

N-乙酰半胱氨酸对双酚A诱导的猪肾细胞凋亡和炎症反应的抑制作用

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中国农业科学 2023年第3期56卷 549-558页

作者：陶文静张子婷刘媛宋丹李向臣浙江农林大学动物科技学院/动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室

【背景】双酚A(BPA)广泛应用于塑料材料工业制造，其从塑料制品中渗出，暴露在食物、水、土壤和空气等多种环境介质中，导致动物长期接触，并经过胎盘和母乳传递给后代，干扰动物生长和发育，对动物生长性能和生产效率产生不利影响。N-... 详细信息

【背景】双酚A(BPA)广泛应用于塑料材料工业制造，其从塑料制品中渗出，暴露在食物、水、土壤和空气等多种环境介质中，导致动物长期接触，并经过胎盘和母乳传递给后代，干扰动物生长和发育，对动物生长性能和生产效率产生不利影响。N-乙酰半胱氨酸（NAC）作为公认的强效抗氧化剂，能够调节氧化应激、细胞凋亡、炎症等多种病理生理过程。然而，NAC对BPA诱导的猪肾细胞损伤的调节作用尚不清楚。【目的】探究抗氧化剂NAC在BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应中的潜在作用，为NAC在对抗BPA诱导的猪肾细胞损伤中的应用研究提供科学依据。【方法】选取PK15细胞为试验材料，采用相应的抗氧化检测试剂盒分别测定细胞内过氧化氢酶（CAT）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性变化；设置不同浓度NAC(0、2、5和10 mmol·L-1)预处理，并与BPA共处理PK15细胞，CCK-8检测细胞活力以筛选最佳的NAC作用浓度；实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测凋亡相关基因（BAX、BCL-2和Caspase3）表达和炎症相关基因（IL-8、IL-6、IL-1β和TNF-α）mRNA相对表达量，蛋白免疫印迹检测凋亡相关蛋白（BAX、BCL-2、cleaved-Caspase3）水平；免疫荧光染色检测凋亡细胞数量和核因子κB(NF-κB)核易位。【结果】与对照组相比，BPA处理显著降低了细胞内CAT、T-SOD和GSH-Px活性（P<0.05）。CCK-8结果显示，与对照组相比，BPA显著降低PK15细胞活力，而不同浓度的NAC均能显著促进PK15细胞活力（P<0.05），且与BPA单独处理相比，5和10 mmol·L-1 NAC预处理均能显著促进PK15细胞活力（P<0.05）;qRT-PCR和蛋白免疫印迹结果显示，BPA处理显著增加了BAX、Caspase3 mRNA相对表达量以及蛋白表达水平，减少了BCL-2mRNA相对表达量和蛋白表达（P<0.05），而NAC预处理能够减少BPA诱导增加的BAX、Caspase3基因和蛋白表达，增加BCL-2基因和蛋白表达；Hoechst 33258荧光染色显示，BPA处理的细胞呈现强蓝色荧光染色且有明显的核皱缩，而NAC预处理后呈现较弱的蓝色荧光；BPA处理显著增加炎症相关因子（IL-8和IL-6）mRNA相对表达量（P<0.05），而NAC预处理抑制BPA诱导增加的炎症相关因子（IL-8、IL-6和IL-1β）mRNA相对表达量，免疫荧光检测NF-κB核易位显示，对照组的NF-κB主要分布在细胞质中，而BPA处理后的NF-κB主要分布在细胞核，NAC预处理明显减少核NF-κB的表达。【结论】NAC显著提高BPA诱导降低的PK15细胞活力，抑制BPA诱导的PK15细胞凋亡和炎症反应。

关键词：双酚A N-乙酰半胱氨酸细胞凋亡炎症反应 PK15细胞氧化应激

根皮素对过氧化氢诱导的牛脂肪源性干细胞氧化应激的缓解作用

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动物营养学报 2022年第1期34卷 600-611页

作者：蒋恩惠刘媛李洁马思佳李向臣蓝贤勇西北农林科技大学动物科技学院杨凌712100 浙江农林大学动物科技学院•动物医学院杭州311300 浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室杭州311300

本研究旨在探究根皮素(PT)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的牛脂肪源性干细胞(ADSCs)氧化应激和凋亡的影响。试验选取牛脂肪组织,使用Ⅳ型胶原酶分离牛ADSCs,传代培养后利用免疫荧光对牛ADSCs表面标记蛋白CD29、CD44、CD73及Vimentin进行... 详细信息

本研究旨在探究根皮素(PT)对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的牛脂肪源性干细胞(ADSCs)氧化应激和凋亡的影响。试验选取牛脂肪组织,使用Ⅳ型胶原酶分离牛ADSCs,传代培养后利用免疫荧光对牛ADSCs表面标记蛋白CD29、CD44、CD73及Vimentin进行鉴定。用不同浓度(0、100、200、500、1000μmol/L)的过氧化氢(H_(2)O_(2))处理牛ADSCs 24 h,通过CCK-8法检测细胞存活率,筛选构建牛ADSCs氧化应激模型的适宜H_(2)O_(2)浓度。利用CCK-8法检测不同浓度(0、10、50、100μmol/L)PT作用4 h后牛ADSCs的存活率,确定PT对牛ADSCs进行预保护的适宜浓度。随后先用不同浓度(0、10、50μmol/L)PT预处理牛ADSCs 4 h,对牛ADSCs进行预保护;再利用500μmol/L H_(2)O_(2)处理牛ADSCs 24 h。采用试剂盒检测牛ADSCs内氧化应激相关指标,包括丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性;荧光探针2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)测定细胞内活性氧(ROS)含量;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测细胞凋亡相关基因B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及半胱天冬酶-3(Caspase-3)mRNA相对表达量。结果显示:500μmol/L的H_(2)O_(2)能引起牛ADSCs存活率极显著下降(P0.05),而100μmol/L的PT会引起牛ADSCs的存活率显著下降(P0.05),说明在本试验的条件下,PT不会缓解H_(2)O_(2)诱导的牛ADSCs凋亡。综上所述,适量的PT可以有效缓解H_(2)O_(2)诱导的牛ADSCs氧化应激。

关键词：牛脂肪源性干细胞根皮素氧化应激细胞凋亡

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牛孤雌胚体外培养和体细胞核移植的研究

牛孤雌胚体外培养和体细胞核移植的研究

作者：李向臣西北农林科技大学

学位级别：硕士

本试验在体外成熟培养液中添加EGF，研究其对核及质成熟的作用，并通过孤雌激活来检验EGF对牛卵母细胞胞质的成熟。在培养液中添加各种血清或牛血清白蛋白，这是适宜的也是必要的，但何时添加血清国内未见报道。影响核移植胚胎发育潜力... 详细信息

本试验在体外成熟培养液中添加EGF，研究其对核及质成熟的作用，并通过孤雌激活来检验EGF对牛卵母细胞胞质的成熟。在培养液中添加各种血清或牛血清白蛋白，这是适宜的也是必要的，但何时添加血清国内未见报道。影响核移植胚胎发育潜力的主要因素之一是供体核和受体细胞质细胞周期的一致性。血清饥饿是使细胞同步化于G0/G1期常用的方法;Roscovitine是Cdk2抑制剂，可以抑制Cdk2激酶活性，使细胞同步化于G1期，将细胞从Ros中移出后，细胞又可以进入S期。本研究还探讨血清饥饿、Roscovitine（Ros）和非饥饿等方法，比较其对核移植胚发育的影响。同时，用成纤维细胞和颗粒细胞作供体细胞对比其核移植胚的发育。其结果如下： 1．在牛成熟培养液中添加表皮生长因子（EGF）中分别添加0，10，30，50ng/mL EGF，24h检查成熟率，将成熟的卵母细胞置于5μmol/L离子霉素（Ionomycin）激活5min，然后在含有6-DMAP和细胞松弛素B（CB）的培养液中培养4h，最后移入CR1培养液中培养，7～8 d检查囊胚率。结果表明：添加30 ng/mL的EGF提高牛卵母细胞的成熟，同时结果显示添加EGF能够促进牛孤雌囊胚的发育率，说明EGF即可提高牛卵母细胞核成熟，也可促进胞质的成熟。 2．体外成熟的牛卵母细胞经离子霉素孤雌激活后第0，2，4，6d添加10％（V/V）胎牛血清（FBS），7～8d检查囊胚率。结果表明，添加FBS的时间以4d开始效果较好，在胚胎发育的0d、2d开始添加不利于孤雌胚胎的发育。 3．通过胞质内注射，比较经血清饥饿、非饥饿和RosciVitine（Ros）处理牛成纤微细胞、颗粒细胞。研究发现，（1）非饥饿组、Ros组的牛成纤微细胞重组胚囊胚发育率与显著高于血清饥饿组重组胚囊胚发育率（p＜0.05），Ros与非饥饿组之间无显著差异（p＞0.05）;（2）而用同样的方法处理牛颗粒细胞，Ros组与血清饥饿组重组胚囊胚发育率之间差异不显著（p＞0.05），非饥饿组显著高于Ros和血清饥饿组（p＜0.05）。 4．两种类型细胞经血清饥饿、非饥饿处理后差异不显著（p＞0.05），但经ROS诱导后，牛颗粒细胞重组胚囊胚发育率显著高于牛成纤微细胞（p＜0.05）。结论：EGF可促进牛卵母细胞成熟;用孤雌激活的方法可检验胞质成熟;用非饥饿、Ros处理牛成纤维细胞重组胚的发育率较高，非饥饿的牛颗粒细胞发育率较高;牛颗粒细胞更有利于重新程序化。

关键词：牛孤雌胚胎培养体细胞核移植

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疯牛病与朊蛋白的研究进展

安徽农业科学 2007年第25期35卷 7853-7854,7865页

作者：何炜李向臣青海省乐都县寿乐镇兽医站青海乐都810700 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100094

论述了疯牛病的发病历史与现状、疯牛病的临床症状与检测、朊蛋白与蛋白假说和疯牛病的致病机理等。此外,还讨论了治愈疯牛病的可能性。

关键词：疯牛病朊蛋白朊蛋白基因