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肺癌p14～（ARF）、p16～（INK4a）蛋白表达缺失及其临床意义研究

作者：李军果

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肺癌p14～（ARF）、p16～（INK4a）蛋白表达缺失及其临床意义研究

作者：李军果第三军医大学

学位级别：硕士

目的检测p14ARF 、p16INK4a蛋白在肺癌及其淋巴结转移灶中的表达,探讨p14ARF 、p16INK4a蛋白表达单一缺失或共缺失在各型肺癌中的差异及相关性,并探讨不同临床分期、病理分级、淋巴结有无转移间的肺癌组织中p14ARF 、p16INK4a蛋白表达... 详细信息

目的检测p14ARF 、p16INK4a蛋白在肺癌及其淋巴结转移灶中的表达,探讨p14ARF 、p16INK4a蛋白表达单一缺失或共缺失在各型肺癌中的差异及相关性,并探讨不同临床分期、病理分级、淋巴结有无转移间的肺癌组织中p14ARF 、p16INK4a蛋白表达缺失是否存在差异,初步阐明INK4a/ARF基因表达改变在肺癌发生发展中的作用和意义,为肺癌的诊治及预后判断提供理论和实验依据。方法采用免疫组织化学超敏链酶卵白素-辣根过氧化物酶(strept-avidin peroxidase,SP)方法,检测103例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织、24例小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)组织、37例NSCLC淋巴结转移灶标本中p14ARF 、p16INK4a蛋白的表达缺失情况, 应用SPSS11.0软件进行χ2检验、Fisher’s精确检验及PEARSON相关分析,检验水准(=0.05。结果 (1)103例NSCLC组织中,p14ARF阳性表达30例,阴性表达73例,表达缺失率为70.87%;p16INK4a阳性表达58例,阴性表达45例,表达缺失率为43.69%;两种蛋白表达缺失率差异有非常显著的意义(p0.05)。(3)不同类型NSCLC中p14ARF表达不同,肺鳞癌中p14ARF表达缺失率较高(88.24%),肺泡癌中较低(52.78%),腺癌介于两者之间(72.73%),各组织类型之间的差异有非常显著的意义(p (p0.05)。(7)相关分析结果显示,NSCLC和SCLC p14ARF、p16INK4a表达缺失相互间无显著相关性(p>0.05)。结论 (1)NSCLC 中p14ARF、p16INK4a蛋白表达单一缺失加上共缺失发生率很高,其中p14ARF蛋白表达缺失率显著高于p16INK4a,推测p14ARF在NSCLC发生发展中至少具有与p16INK4a同等重要的作用;肺鳞癌中p14ARF、p16INK4a表达共缺失率明显高于其它组织类型的肺癌,提示肺癌INK4a/A

关键词：非小细胞肺癌小细胞肺癌抑癌基因 INK4a/ARF基因 p14ARF p16INK4a 蛋白表达免疫组织化学

小细胞肺癌p14^(ARF)、p16^(INK4a)蛋白表达及其临床意义

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第三军医大学学报 2004年第12期26卷 1098-1101页

作者：李军果叶明福胡义德第三军医大学新桥医院肿瘤科全军肿瘤诊治中心重庆市肿瘤生物技术研究所重庆400037 第三军医大学新桥医院病理科重庆400037

目的　研究p14 ARF、p16INK4a蛋白在小细胞肺癌 (smallcelllungcancer ,SCLC)中的表达及其临床意义。方法　应用免疫组织化学S P方法检测 2 4例SCLC癌组织标本中两种蛋白表达。结果　 2 4例标本中 ,15例p14 ARF蛋白表达阴性( 62 .5 0 %)... 详细信息

目的　研究p14 ARF、p16INK4a蛋白在小细胞肺癌 (smallcelllungcancer ,SCLC)中的表达及其临床意义。方法　应用免疫组织化学S P方法检测 2 4例SCLC癌组织标本中两种蛋白表达。结果　 2 4例标本中 ,15例p14 ARF蛋白表达阴性( 62 .5 0 %) ,4例p16INK4a蛋白表达阴性 ( 16.67%) ,3例p14 ARF、p16INK4a蛋白表达均阴性 ( 12 .5 0 %)。p14 ARF、p16INK4a蛋白阴性率均与患者性别、年龄、临床分期及淋巴结转移无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　SCLC中p14 ARF、p16INK4a蛋白表达阴性是各自独立的事件 ,可能与SCLC的发生有关 ,其中p14 ARF表达阴性占主要地位。

关键词：小细胞肺癌蛋白表达 p14ARF p16INK4a

p14^(ARF)和p16^(INK4a)蛋白共表达状态对非小细胞肺癌术后放化疗及生存的影响

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解放军医学杂志 2004年第12期29卷 1039-1041页

作者：高丽莉胡义德李军果钱频钱桂生第三军医大学新桥医院全军肿瘤中心重庆400037 第三军医大学新桥医院超声科第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所

目的　探讨p14 ARF蛋白和p16 INK4a蛋白共表达状态对非小细胞肺癌 (NSCLC)术后放化疗及生存的影响。方法　选择经免疫组化SP法检测出的p14 ARF和p16 INK4a蛋白共表达阴性的NSCLC患者 35例 ,共表达阳性患者 2 0例 ,比较两组的临床病理特... 详细信息

目的　探讨p14 ARF蛋白和p16 INK4a蛋白共表达状态对非小细胞肺癌 (NSCLC)术后放化疗及生存的影响。方法　选择经免疫组化SP法检测出的p14 ARF和p16 INK4a蛋白共表达阴性的NSCLC患者 35例 ,共表达阳性患者 2 0例 ,比较两组的临床病理特征并随访其术后放化疗情况和生存时间。结果　两组患者年龄、肿瘤分期、分化程度、术后复发转移及术后放化疗差异无统计学意义 (P >0 0 5 ) ,而性别、吸烟指数、组织学类型差异显著 (P <0 0 1) ;共表达阴性组患者术后 2、3年及总生存率较阳性组显著降低 (P <0 0 5 )。结论　p14 ARF和p16 INK4a蛋白共表达状态是影响NSCLC病人放化疗及远期生存的因素之一。

关键词：癌非小细胞肺 p14^ARF蛋白 p14^ARF蛋白放化疗敏感性

细胞周期专职调控基因INK4a-ARF与妇科肿瘤

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国外医学（妇产科学分册） 2007年第4期34卷 223-225页

作者：李军果李力重庆第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科 400042

INK4a-ARF基因是新近发现的抑癌基因,包含两个重叠基因:INK4a和ARF,编码产物p16INK4a和p14ARF蛋白,分别对cyclinD-CDK4-pRb-E2F和MDM2-p53通路具有关键性调控功能,且在大部分恶性肿瘤中缺失表达,其功能失活的机制主要包括该基因的缺失... 详细信息

INK4a-ARF基因是新近发现的抑癌基因,包含两个重叠基因:INK4a和ARF,编码产物p16INK4a和p14ARF蛋白,分别对cyclinD-CDK4-pRb-E2F和MDM2-p53通路具有关键性调控功能,且在大部分恶性肿瘤中缺失表达,其功能失活的机制主要包括该基因的缺失、突变和甲基化。但在妇科肿瘤如宫颈癌及外阴癌中p16INK4a和p14ARF蛋白过表达,提示INK4a-ARF基因在妇科肿瘤发生发展中所起的作用可能与其在其他肿瘤中所起的作用不同,将成为妇科肿瘤检测与预后判断的标志性基因之一。就INK4a-ARF基因与妇科肿瘤关系的研究进展综述。

关键词：细胞周期基因调节抑癌基因妇科肿瘤

非小细胞肺癌INK4a和ARF基因甲基化与其蛋白共表达关系的探讨

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中国肿瘤临床 2006年第3期33卷 130-133页

作者：高丽莉胡义德李军果谢启超孙恒文胡中华第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤中心重庆市400037

目的:分析INK4a和ARF基因启动子甲基化与其蛋白共表达之间的关系。方法:选择前期实验中p14ARF和p16INK4a蛋白共表达阴性的非小细胞肺癌(NSCLC)患者35例,共表达阳性的NSCLC患者20例作为研究对象,分别称为(p14+p16)阴性组和(p14+p16)阳性... 详细信息

目的:分析INK4a和ARF基因启动子甲基化与其蛋白共表达之间的关系。方法:选择前期实验中p14ARF和p16INK4a蛋白共表达阴性的非小细胞肺癌(NSCLC)患者35例,共表达阳性的NSCLC患者20例作为研究对象,分别称为(p14+p16)阴性组和(p14+p16)阳性组。运用甲基化特异性PCR(MSP)方法对两组患者癌组织INK4a和ARF基因启动子的甲基化状态进行检测。结果:(p14+p16)阴性组有18例发生INK4a基因甲基化,(p14+p16)阳性组有2例发生INK4a基因甲基化,两组差异有显著意义(P0.05)。INK4a和ARF基因异常甲基化相互之间无显著相关性(P>0.05)。结论:NSCLC患者肺癌组织INK4a基因甲基化是导致p16INK4a蛋白表达阴性的重要机制;INK4a和ARF基因甲基化可能是相对独立的事件。

关键词：非小细胞肺癌 INK4a基因 ARF基因甲基化甲基化特异性PCR

野生型INK4a/ARF基因共转染对A549细胞药物敏感性的影响

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解放军医学杂志 2004年第12期29卷 1045-1048页

作者：谢启超胡义德刁鑫伟钱桂生李军果王玲俐第三军医大学新桥医院全军肿瘤中心重庆400037 第三军医大学新桥医院病理科第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所

目的　研究野生型INK4a/ARF基因共转染对人肺腺癌A5 4 9细胞药物敏感性的影响。方法　利用阳离子脂质体介导的基因转染技术 ,将含有人全长野生型INK4a/ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3 p16 INK4a和pcDNA3 p14 ARF同时导入该基因位点缺... 详细信息

目的　研究野生型INK4a/ARF基因共转染对人肺腺癌A5 4 9细胞药物敏感性的影响。方法　利用阳离子脂质体介导的基因转染技术 ,将含有人全长野生型INK4a/ARF基因的真核表达重组质粒pcDNA3 p16 INK4a和pcDNA3 p14 ARF同时导入该基因位点缺失的人肺腺癌A5 4 9细胞系中 ,确定其编码的蛋白p16 INK4a和p14 ARF稳定表达 ;在设立空白组和空质粒转染组的情况下 ,用 5种不同作用机制的常用肺癌化疗药物 (阿霉素、顺铂、拓朴替康、诺维本和紫杉醇 )作用于转染前后的细胞 ,利用MTT法测定各种不同药物的 5 0 %抑制浓度(IC50 ) ,并测定在该浓度作用下转染细胞的凋亡指数。结果　转染INK4a/ARF基因后 ,A5 4 9细胞对阿霉素和顺铂的IC50 值显著降低 (P 0 0 5 ) ;阿霉素和顺铂诱导的凋亡指数也明显高于其他 3种药物。结论　恢复p16 INK4a和p14 ARF蛋白的表达可改变A5 4 9细胞对部分化疗药物的敏感性。

关键词：癌非小细胞肺 INK4a/ARF基因转染微生物敏感性试验

咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的保护

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中国组织工程研究 2016年第40期20卷 5979-5985页

作者：邱实李军果邱倩陈辉相子民解放军陆军总医院北京市100068 解放军第155医院呼吸肾病科河南省开封市475003 解放军南京军区福州总医院骨一科福建省福州市350025

背景:咖啡酸苯乙酯可抑制大鼠脑损伤后的脂质过氧化和脑损伤,但是在帕金森细胞模型中,5-脂氧酶和白三烯的变化规律,以及咖啡酸苯乙酯是否通过抑制鱼藤酮诱导的5-脂氧酶和白三烯变化而发挥对帕金森样损伤的保护作用,仍有待进一步研究。目... 详细信息

背景:咖啡酸苯乙酯可抑制大鼠脑损伤后的脂质过氧化和脑损伤,但是在帕金森细胞模型中,5-脂氧酶和白三烯的变化规律,以及咖啡酸苯乙酯是否通过抑制鱼藤酮诱导的5-脂氧酶和白三烯变化而发挥对帕金森样损伤的保护作用,仍有待进一步研究。目的:探讨咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的保护作用,同时观察5-脂氧酶是否参与帕金森细胞模型的损伤。方法:(1)取生长状态良好的PC12细胞,分5组培养,分别以0,0.01,0.1,1,10μmol/L鱼藤酮干预,24,48 h后,观察细胞形态及活性变化,选择最佳诱导帕金森细胞模型的鱼藤酮浓度;24 h后,Western法检测5-脂氧酶表达,ELISA法检测半胱氨酰白三烯生成释放量;(2)取生长状态良好的PC12细胞,分6组培养,以正常培养的细胞为空白对照,其余5分别加入0,0.01,0.1,1,10μmol/L咖啡酸苯乙酯预处理30 min,之后加入1μmol/L鱼藤酮,24 h后,检测细胞活性,ELISA法检测半胱氨酰白三烯生成释放量。结果与结论:(1)0.1-10μmol/L鱼藤酮可诱导PC12细胞损伤,1μmol/L鱼藤酮处理24 h后的细胞形态和细胞存活率变化适度明显,所以选择该条件作为鱼藤酮诱导PC12细胞帕金森样损伤的细胞模型;(2)鱼藤酮呈浓度依赖性增加5-脂氧酶的表达与半胱氨酰白三烯的生成释放;(3)1-10μmol/L咖啡酸苯乙酯可降低鱼藤酮诱导的PC12细胞半胱氨酰白三烯生成释放量增加,呈浓度依赖性抑制鱼藤酮诱导的PC12细胞存活率降低;(4)结果表明,5-脂氧酶参与鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的损伤作用,咖啡酸苯乙酯对鱼藤酮诱导帕金森细胞模型的损伤有明显保护作用。

关键词：实验动物神经损伤与修复动物模型咖啡酸苯乙酯 5-脂氧酶国家自然科学基金

p16^INK4a蛋白在宫颈疾病中的表达特点及其与HPV感染的关系

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第三军医大学学报 2008年第10期30卷 928-931页

作者：李军果李力郭建新高奉浔赵雯第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科重庆 400042 第三军医大学大坪医院野战外科研究所病理科重庆 400042 西南医院病理学研究所重庆 400038

目的研究伴有高危型人乳头瘤病毒(high-risk human papillomavirus,hr-HPV)感染及无hr-HPV感染的宫颈癌(cervical cancer,CC)、宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及宫颈炎中p16INK4a蛋白表达水平的变化及意义,探讨宫颈癌及癌前病变中p16INK4a蛋白表达与HPV感染的相关性。方法应用免疫组化方法检测126例宫颈疾病(CC40例,CIN67例和宫颈炎19例)组织中p16INK4a蛋白的表达,其中,hr-HPV(+)宫颈疾病89例(CC32例,CIN48例和宫颈炎9例),hr-HPV(-)宫颈疾病37例(CC8例,CIN19例和宫颈炎10例),进行半定量分析及统计学检验。结果40例CC中,p16INK4a全部阳性表达;48例hr-HPV(+)和19例hr-HPV(-)CIN中,p16INK4a阳性表达分别为39例和12例;9例hr-HPV(+)和10例hr-HPV(-)宫颈炎组织中,p16INK4a阳性表达均为4例。hr-HPV(+)或hr-HPV(-)宫颈炎、宫颈上皮内瘤变和宫颈癌组织中p16INK4a蛋白表达水平均依次升高。CC和CIN中p16INK4a蛋白表达与hr-HPV感染相互间无显著相关性(P>0.05)。结论细胞周期抑制蛋白p16INK4a在CC及癌前病变中过表达,且与hr-HPV感染无关,提示p16INK4a蛋白在宫颈癌的发生、发展中所起的作用和作用机制可能与其在其他恶性肿瘤中不同。检测p16INK4a蛋白表达有助于CC的早期诊断。

关键词：宫颈癌免疫组织化学 HPV 蛋白 p16^INK4a

HPV16E7基因沉默对宫颈癌细胞系CaSki细胞增殖的影响

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肿瘤学杂志 2012年第1期18卷 29-33页

作者：李军果李力北京军区总医院生殖医学中心北京100700 第三军医大学野战外科研究所重庆400042

[目的]探讨脂质体转染HPV16E7 siRNA对人宫颈癌CaSki细胞增殖的影响。[方法]人工合成抑制HPV16E7基因的siRNA片段,通过脂质体转染到CaSki细胞内,显微镜下观察其形态学变化;流式细胞术检测各组细胞周期变化;RT-PCR检测HPV16E7 mRNA的表达... 详细信息

[目的]探讨脂质体转染HPV16E7 siRNA对人宫颈癌CaSki细胞增殖的影响。[方法]人工合成抑制HPV16E7基因的siRNA片段,通过脂质体转染到CaSki细胞内,显微镜下观察其形态学变化;流式细胞术检测各组细胞周期变化;RT-PCR检测HPV16E7 mRNA的表达;Western blot检测HPV16E7蛋白表达。[结果]转染siRNA后的CaSki细胞,细胞增殖受到显著抑制,HPV16E7 mRNA表达显著下降,HPV16E7蛋白水平显著下降。[结论]应用RNA干扰靶向抑制HPV16E7基因可以显著抑制CaSki细胞增殖。

关键词： HPV16E7 siRNA 宫颈肿瘤