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牙龈卟啉单胞菌诱导线粒体转录因子A高表达在食管鳞癌中的临床意义

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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2022年第5期43卷 453-466页

作者：刘怡文周福有杨海军李军扩代宁涛高社干河南科技大学信息工程学院河南洛阳471023 河南科技大学临床医学院/第一附属医院/河南省微生态与食管癌防治重点实验室/河南省肿瘤表观遗传重点实验室河南洛阳471003 河南科技大学附属安阳市肿瘤医院/河南省食管癌精准防治医学重点实验室河南安阳455000

目的:分析食管鳞癌(ESCC)中牙龈卟啉单胞菌(Pg)对线粒体转录因子A(TFAM)的诱导效应,并探讨其潜在机制及临床意义。方法:采用Western blot、qRT-PCR及线粒体压力测试检测Pg感染不同时间(24 h及48 h)ESCC细胞KYSE450及KYSE150中TFAM蛋白与... 详细信息

目的:分析食管鳞癌(ESCC)中牙龈卟啉单胞菌(Pg)对线粒体转录因子A(TFAM)的诱导效应,并探讨其潜在机制及临床意义。方法:采用Western blot、qRT-PCR及线粒体压力测试检测Pg感染不同时间(24 h及48 h)ESCC细胞KYSE450及KYSE150中TFAM蛋白与mRNA表达量及线粒体氧化磷酸化水平的变化。建立TFAM敲降的稳定细胞系KYSE150-T,分别用Pg感染KYSE150及KYSE150-T,将细胞分为4组:KYSE150组、KYSE150-T组、KYSE150+Pg组及KYSE150-T+Pg组。通过Western blot、qRT-PCR、线粒体压力测试、CCK-8、平板克隆及Transwell法检测各组细胞的TFAM蛋白与mRNA表达量、线粒体氧化磷酸化功能及体外增殖与侵袭能力差异。采用免疫组化法检测384例ESCC患者癌组织及相应癌旁组织中Pg感染及TFAM蛋白的表达情况。利用卡方检验分析二者与ESCC患者临床病理特征之间的相关性。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,通过Log-rank分析Pg感染及TFAM高表达与患者生存时间的相关性。结果:Pg感染可诱导KYSE450及KYSE150中TFAM蛋白与mRNA表达量增加,线粒体氧化磷酸化功能增强,且具有时间依赖性(P<0.05)。与KYSE150组相比,KYSE150+Pg组细胞的TFAM蛋白与mRNA表达量均显著增加(P<0.05),线粒体氧化磷酸化功能、体外增殖及侵袭能力均显著增强(P<0.05),而KYSE150-T组上述各指标则显著减少、降低(P<0.05);与KYSE150+Pg组相比,KYSE150-T+Pg组细胞的上述各指标均显著减少、降低(P<0.05)。ESCC组织中Pg感染率及TFAM阳性率分别为41.15%及43.23%,二者具有显著一致性(P<0.05)。Pg感染及TFAM高表达的患者多为有吸烟、饮酒史的男性患者,且肿瘤分化程度低、浸润程度深、淋巴结转移率高、临床分期多为Ⅲ/Ⅳ期(P<0.05)。Pg感染及TFAM高表达阳性的患者5年生存期均会缩短,且二者共阳性的患者5年生存期缩短更为显著(P<0.05)。结论:Pg可通过诱导TFAM高表达,增强ESCC细胞线粒体氧化磷酸化功能,促进ESCC恶性进展。有效清除Pg并抑制其对TFAM的诱导作用,对改善ESCC患者预后至关重要。

关键词：食管鳞癌牙龈卟啉单胞菌线粒体转录因子A 增殖侵袭预后

食管鳞癌患者紫杉醇联合顺铂新辅助化疗疗效与癌组织XRCC1、MDM2表达的相关性研究

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实验与检验医学 2023年第5期41卷 582-584,595页

作者：纪媛媛郭君兰张宁李军扩河南省安阳市肿瘤医院内科河南安阳455000

目的探究食管鳞癌患者紫杉醇联合顺铂新辅助化疗疗效与癌组织X线修复交叉互补基因1(X-ray repair cross-complementary gene 1,XRCC1)、鼠双微染色体2(Murine double mimute2,MDM2)表达的相关性。方法回顾性分析2017年1月至2018年1月期... 详细信息

目的探究食管鳞癌患者紫杉醇联合顺铂新辅助化疗疗效与癌组织X线修复交叉互补基因1(X-ray repair cross-complementary gene 1,XRCC1)、鼠双微染色体2(Murine double mimute2,MDM2)表达的相关性。方法回顾性分析2017年1月至2018年1月期间于我院接受紫杉醇联合顺铂新辅助化疗的70例食管鳞癌患者临床资料,根据其治疗6个月后疗效表现分为缓解组32例与未缓解组38例,比较两组癌组织XRCC1、MDM2表达水平,分析癌组织XRCC1、MDM2表达水平与化疗疗效的相关性,采用受试者工作特征(ROC)曲线评估上述指标对化疗疗效的预测效能,随后依据XRCC1和MDM2的ROC曲线截断值将患者分为高表达组和低表达组,并比较两组两年内生存情况。结果未缓解组癌组织XRCC1、MDM2表达水平显著高于缓解组(P<0.05)。Spearman分析显示,癌组织XRCC1、MDM2表达水平与化疗疗效呈显著负相关(P<0.05)。ROC曲线分析显示,上述指标预测化疗疗效的ROC曲线AUC分别为0.857、0.899,截断值分别为2.48、74.61。Kaplan-Meier生存曲线显示,XRCC1高表达组生存时间均显著短于XRCC1低表达组(P<0.05),MDM2高表达组生存时间均显著短于MDM2低表达组(P<0.05)。结论食管鳞癌患者癌组织XRCC1、MDM2表达情况与紫杉醇联合顺铂新辅助化疗疗效、肿瘤分期具有显著相关性,二者水平变化在预测化疗疗效方面具有显著效能,同时可反映患者生存情况,可为临床接受此类化疗治疗患者的后续治疗方案更替提供一定参考。

关键词：食管鳞癌紫杉醇顺铂化疗疗效 X线修复交叉互补基因1 鼠双微染色体2

胃泌素-shRNAs对胃癌细胞系BGC-823的效应

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胃泌素-shRNAs对胃癌细胞系BGC-823的效应

作者：李军扩郑州大学

学位级别：硕士

胃癌在亚洲有很高的发病率，也是世界上最常见致死性疾病之一。虽然在一些国家，其发病率与致死率有所下降，但从全球范围看其发病率依然居高不下。位于胃幽门粘膜处的G细胞（gastrin-containing cell）是胃泌素合成与分泌的最重要细胞... 详细信息

胃癌在亚洲有很高的发病率，也是世界上最常见致死性疾病之一。虽然在一些国家，其发病率与致死率有所下降，但从全球范围看其发病率依然居高不下。位于胃幽门粘膜处的G细胞（gastrin-containing cell）是胃泌素合成与分泌的最重要细胞。胃泌素既可调节胃酸的分泌，亦可刺激胃粘膜的增殖。胃癌细胞系中，肿瘤细胞以自分泌和旁分泌的方式分泌胃泌素。在胃癌细胞系BGC-823中，胃泌素被证明是胃癌细胞的生长因子。此外，与正常胃粘膜上皮细胞相比较，胃癌细胞对胃泌素增殖作用更为敏感。在胃腺癌病人中，胃泌素表达检出率为47.7％（133／279）。胃泌素还具有抗凋亡的效应，并与肿瘤的侵袭和转移有关。因此，胃泌素基因有可能作为胃癌基因治疗的一个有效的靶基因。 RNA干扰（RNA interference，RNAi）是指内源性或外源性的一段与目的基因互补的小干扰双链RNA，导入细胞后产生的转录后基因沉默现象。RNAi己被成功用来抑制多种生物的基因表达，更为引人注目的是，其可以作为治疗肿瘤的新手段。在哺乳动物细胞内，RNAi最初被用做诱导目的基因沉默的工具。Elbashir等人，首次成功的将长度为21～23nt的dsRNA导入鼠与人的细胞，避免了长于30nt的dsRNA所激活的抗外源病毒侵袭的干扰素反应。试验证明小干扰RNA（small interferingRNA，siRNA）能有效的诱发哺乳动物细胞的靶基因沉默反应。本实验针对胃泌素mRNA，筛选4个不同的靶位点，3个位点位于胃泌素mRNA的编码区内，另一位点位于其3’非翻译区（3’untranslated region，3’UTR）。将4条shRNAs，以lOnm／L、20nm／L、40nm／L和80nm／L的终浓度，分别转染BGC～823胃癌细胞系，在24h、48h、72h分别收获细胞。应用原位杂交及免疫组化技术，检测低分化胃癌细胞系BGC-823中，胃泌素在mRNA和蛋白质水平的抑制效应。筛选有效的shRNA、浓度及作用时间。对筛选的有效的shRNA序列、浓度及作用时间，应用RT-PCR、MTT实验、流式

关键词：胃癌 RNA干扰 shRNA 胃泌素

血清鳞状细胞癌抗原水平与头颈部鳞癌患者肿瘤体积的相关性

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实用癌症杂志 2022年第4期37卷 573-576页

作者：纪媛媛郭君兰张宁李军扩河南省安阳市肿瘤医院 455000

目的探讨血清鳞状细胞癌抗原水平与头颈部鳞癌患者肿瘤体积的相关性。方法选择97例头颈部鳞癌患者作为研究对象,收集患者性别、年龄、肿瘤部位、病理分级、临床分期、肿瘤体积、淋巴结转移等资料,观察患者肿瘤体积与血清SCC-Ag的相关性... 详细信息

目的探讨血清鳞状细胞癌抗原水平与头颈部鳞癌患者肿瘤体积的相关性。方法选择97例头颈部鳞癌患者作为研究对象,收集患者性别、年龄、肿瘤部位、病理分级、临床分期、肿瘤体积、淋巴结转移等资料,观察患者肿瘤体积与血清SCC-Ag的相关性。结果97例患者肿瘤体积2~90.82 mL,平均体积(20.18±14.36)mL;SCC-Ag水平1.12~42.37 ng/mL,平均水平(7.92±2.85)ng/mL。SCC-Ag水平与年龄、性别、体质量指数、病理分级、吸烟、饮酒等无相关性(P>0.05);与临床分期存在相关性(P0.05)。多元线性回归分析结果显示临床分期、SCC-Ag是影响肿瘤体积的独立因素(P<0.05)。结论头颈部鳞癌患者血清SCC-Ag水平与肿瘤体积呈正相关。

关键词：头颈部肿瘤鳞状细胞癌鳞状细胞癌抗原肿瘤体积

hsa_circ_0064369在食管鳞癌组织和细胞中的表达及临床意义

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现代肿瘤医学 2022年第2期30卷 232-236页

作者：曹莎莎李军扩段丽娟夏金杨海军周福有安阳市肿瘤医院(河南科技大学第四附属医院)中心实验室河南安阳455000 安阳市肿瘤医院(河南科技大学第四附属医院)病理科河南安阳455000 安阳市肿瘤医院(河南科技大学第四附属医院)内五科河南安阳455000 安阳市肿瘤医院(河南科技大学第四附属医院)胸外科河南安阳455000

目的:分析hsa_circ_0064369在食管鳞癌中的表达及其临床意义。方法:采用高通量芯片技术检测6例食管鳞癌患者癌组织和对应癌旁组织中差异表达circRNA,依据差异倍数≥5、P0.05)。hsa_circ_0064369低表达食管鳞癌患者无进展生存期较高表达... 详细信息

目的:分析hsa_circ_0064369在食管鳞癌中的表达及其临床意义。方法:采用高通量芯片技术检测6例食管鳞癌患者癌组织和对应癌旁组织中差异表达circRNA,依据差异倍数≥5、P0.05)。hsa_circ_0064369低表达食管鳞癌患者无进展生存期较高表达患者短;ROC曲线下面积为0.928,当截断值为0.6995时其诊断灵敏度和特异性为88.4%和90.7%。结论:hsa_circ_0064369在食管鳞癌中表达量下降,其低表达提示预后不良,是潜在的食管癌诊断和治疗的新型分子标志物。

关键词：环状RNA 食管鳞癌 RT-qPCR hsa_circ_0064369 分子标志物

具核梭杆菌感染对食管癌KYSE150细胞紫杉醇化疗抵抗的影响

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郑州大学学报（医学版） 2023年第5期58卷 603-610页

作者：张哲源刘怡文付臻杨海军代宁涛李军扩孙蔚郭艺博孔金玉周福有安阳市肿瘤医院河南科技大学附属安阳市肿瘤医院河南省食管癌精准防治医学重点实验室河南安阳455000 河南科技大学临床医学院河南科技大学第一附属医院河南省微生态与食管癌防治重点实验室河南省肿瘤表观遗传重点实验室河南洛阳471003 安阳市肿瘤医院影像科河南安阳455000 安阳市肿瘤医院病理科河南安阳455000 安阳市肿瘤医院胸外科河南安阳455000

目的:探讨具核梭杆菌(Fn)感染对食管癌细胞紫杉醇(PTX)化疗的影响及其机制。方法:将食管癌细胞KYSE150分为Fn未感染组及Fn感染组(12、24、48和72 h),通过CCK-8及Western blot检测各组细胞的PTX 24 h药物半数抑制浓度(IC_(50))及炎症小体... 详细信息

目的:探讨具核梭杆菌(Fn)感染对食管癌细胞紫杉醇(PTX)化疗的影响及其机制。方法:将食管癌细胞KYSE150分为Fn未感染组及Fn感染组(12、24、48和72 h),通过CCK-8及Western blot检测各组细胞的PTX 24 h药物半数抑制浓度(IC_(50))及炎症小体NLRP3蛋白表达量。构建NLRP3敲降的食管癌细胞KYSE150-N,然后分为KYSE150组、KYSE150-N组、KYSE150+Fn组和KYSE150-N+Fn组4组。通过Western blot及流式细胞术检测各组细胞系中NLRP3、乙醛脱氢酶1(ALDH1)蛋白表达量及肿瘤干细胞(CSCs)百分比;通过平板克隆、成球实验及CCK-8检测各组细胞的体外增殖能力、克隆成球能力及PTX 24 h IC_(50)。将裸鼠分为上述4组,按分组接种细胞。成瘤后每3 d尾静脉注射一次PTX(10 mg/kg),共6次。对比各组裸鼠的成瘤能力和瘤体组织中NLRP3、ALDH1蛋白表达量及CSCs百分比。结果:与Fn未感染组相比,Fn感染组(12、24、48和72 h)KYSE150细胞的PTX 24 h IC_(50)及NLRP3蛋白表达量均增高(P均<0.05)。与KYSE150组相比,KYSE150+Fn组细胞的NLRP3及ALDH1蛋白表达量、CSCs百分比、体外增殖能力、克隆成球能力、PTX 24 h IC_(50)、裸鼠瘤体对PTX的抗性、瘤体内NLRP3与ALDH1蛋白表达量及CSCs百分比均增高(P均<0.05);而KYSE150-N组细胞上述指标均降低(P均<0.05)。与KYSE150+Fn组细胞相比,KYSE150-N+Fn组细胞上述指标均降低(P均<0.05)。结论:Fn可通过激活NLRP3诱导ALDH1高表达、富集CSCs,降低食管癌细胞对PTX的敏感性,促进其恶性增殖。

关键词：具核梭杆菌食管癌炎症小体NLRP3 肿瘤干细胞紫杉醇化疗抵抗 KYSE150细胞

P53和Ki鄄67及人表皮生长因子受体2蛋白检测对进展期食管胃结合部腺癌新辅助化疗疗效的预测价值

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中华胃肠外科杂志 2015年第9期18卷 901-904页

作者：李守淼李军扩刘志强张志忠张伟杨海军李保中河南省安阳市肿瘤医院外科 455000 河南省安阳市肿瘤医院病理科 455000

目的：探讨P53、Ki-67和人表皮生长因子受体2（HER2）蛋白检测在进展期食管胃结合部腺癌患者新辅助化疗疗效的预测价值。方法收集2010年6月至2013年12月间于河南省安阳市肿瘤医院行SOX方案（奥沙利铂加替吉奥）新辅助化疗的72例Siewert... 详细信息

目的：探讨P53、Ki-67和人表皮生长因子受体2（HER2）蛋白检测在进展期食管胃结合部腺癌患者新辅助化疗疗效的预测价值。方法收集2010年6月至2013年12月间于河南省安阳市肿瘤医院行SOX方案（奥沙利铂加替吉奥）新辅助化疗的72例SiewertⅡ型食管胃结合部腺癌患者化疗前的活检标本及临床病理资料。按照新辅助化疗疗效分为有效组（完全缓解加部分缓解）和无效组（疾病稳定加疾病进展）。用免疫组织化学方法检测两组患者P53、Ki-67和HER2蛋白的表达情况，分析不同蛋白表达情况与新辅助化疗疗效的关系。结果全组72例患者均完成2个周期的SOX方案新辅助化疗，SOX新辅助化疗有效组35例[完全缓解5例（6．9％）、部分缓解30例（41．7％）]、无效组37例[疾病稳定31例（43．1％）、疾病进展6例（8．3％）]。与新辅助化疗无效组相比，有效组的P53蛋白表达阳性率明显降低[25．0％（7／35）比45．9％（17／37），P＝0．020]，Ki-67蛋白表达阳性率明显增加[77．1％（27／35）比43．2％（16／37），P＝0．003]；而两组HER2蛋白阳性率的差异无统计学意义[42．9％（15／35）比21．6％（8／37），P＝0．053]。多因素分析结果显示，Ki-67是影响食管胃结合部腺癌新辅助化疗疗效的独立影响因素（P＝0．015）。Spearman秩相关分析显示，Ki-67表达与HER2表达呈正相关（r＝0．259，P＝0．028）；而Ki-67与P53、P53与HER2的表达均无明显相关性（均P＞0．05）。结论 SOX方案新辅助化疗治疗食管胃结合部腺癌安全、有效，其中Ki-67高表达和P53低表达患者的化疗有效率更高，可作为预测化疗疗效的参考指标；这2种蛋白表达无相关性，可共同检测以提高预测价值。

关键词：食管胃结合部肿瘤,SiewertⅡ型新辅助化疗蛋白表达化疗敏感性

shRNAs对胃癌细胞系BGC-823胃泌素表达的抑制效应

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解剖学报 2007年第2期38卷 182-186页

作者：丁一李军扩邢文英乐晓萍张钦宪郑州大学医学院组织学胚胎学教研室河南省分子医学重点实验室郑州450052

目的研究shRNAs对胃癌细胞系BGC-823胃泌素表达的抑制效应。方法设计4条针对胃泌素基因不同位点的寡核苷酸序列,通过体外转录法合成相应的shRNAs。以10nmol/L、20nmol/L、40nmol/L和80nmol/L的终浓度,将4条shRNAs分别转染胃癌细胞BGC-82... 详细信息

目的研究shRNAs对胃癌细胞系BGC-823胃泌素表达的抑制效应。方法设计4条针对胃泌素基因不同位点的寡核苷酸序列,通过体外转录法合成相应的shRNAs。以10nmol/L、20nmol/L、40nmol/L和80nmol/L的终浓度,将4条shRNAs分别转染胃癌细胞BGC-823。应用原位杂交及免疫细胞化学方法检测胃泌素表达的抑制效果,筛选最有效的shRNA。应用RT-PCR进一步验证其对胃泌素mRNA的抑制效应。应用MTT法检测4条shRNAs在不同浓度下对BGC-823细胞的增殖抑制效应。结果转染后24h、48h及72h,胃泌素表达均被明显地抑制,并呈现浓度及时间依赖的趋势。shRNA3转染后72h,mRNA及蛋白水平表现出最佳的抑制效率,分别为(54.27±0.042)%和(41.69±0.038)%。RT-PCR结果显示,shRNA3对BGC-823细胞胃泌素mRNA的抑制率为48.1%。MTT结果显示,除shRNA4处理组外,其余3组处理细胞均表现出浓度依赖性的增殖抑制趋势。结论4条shRNAs在mRNA及蛋白水平均明显地抑制了胃癌细胞BGC-823胃泌素的表达,shRNA3可能为最有效的胃泌素-shRNA。shRNA对胃泌素表达的抑制,显著降低了BGC-823细胞增殖能力。

关键词：胃泌素 shRNA 胃癌原位杂交逆转录-聚合酶链反应

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RNA干扰与肿瘤基因治疗

国外医学（肿瘤学分册） 2005年第8期32卷 566-569页

作者：李军扩金辉丁一郑州大学医学院组胚教研室 450052

RNA干扰(RNAi)为高效特异的基因干扰方法,其主要参与成分为小干扰RNA (siRNA),可特异性抑制mRNA表达。RNAi已广泛用于多种疾病治疗,尤其在肿瘤治疗方面具有独特的优势,为肿瘤的基因治疗提供了新思路。

关键词： RNA 双链基因表达信号传递基因疗法肿瘤