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中华水蛇PLIγ在毕赤酵母中的表达、纯化及活性测定

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中华水蛇PLIγ在毕赤酵母中的表达、纯化及活性测定

作者：李兴章南昌大学

学位级别：硕士

磷脂酶A是一类可催化细胞膜和脂蛋白磷脂二位酰基(Sn-2)水解,释放溶血磷脂及游离脂肪酸的酶族,从而参与人体花生四烯酸通路,进一步的产生大量的炎症因子,造成机体损伤。磷脂酶A在生物个体中分布广泛,在多种蛇类蛇毒中已发现多种类型的P... 详细信息

磷脂酶A是一类可催化细胞膜和脂蛋白磷脂二位酰基(Sn-2)水解,释放溶血磷脂及游离脂肪酸的酶族,从而参与人体花生四烯酸通路,进一步的产生大量的炎症因子,造成机体损伤。磷脂酶A在生物个体中分布广泛,在多种蛇类蛇毒中已发现多种类型的PLA,含量丰富,毒性多样,表现出细胞毒性、神经毒性、肌肉毒性以及出血毒性等多种毒性,可以作为开发抗蛇毒药物的关键靶点。据研究发现,一些种类的蛇的肝脏可以表达一种蛋白质,可以特异性中和蛇毒组分PLA,从而保护自己不被自身毒液所伤害,这种蛋白称为PLA抑制剂(phospholipase A inhibitors,PLI)。实验室前期研究中,我们从中华水蛇血清中纯化得到一个新PLIγ,它对五步蛇sv PLA酶活性和出血毒均有强抑制效果。由于蛇资源缺乏且血量较少,从中提取大量PLI较为困难,实验室前期构建中华水蛇PLIγ原核表达系统,但蛋白以没有生物活性的包涵体形式存在,复性效率低,对其酶活有所影响,故将采用真核表达方式得到中华水蛇PLIγ。目的:为更加方便快捷的得到活性更高的中华水蛇PLIγ蛋白,构建p PICZαA-PLIγ重组表达载体,转化进毕赤酵母中进行真核表达,进一步的进行活性测定,为开发新型抗蛇毒药物奠定基础。方法:采用琼脂糖活性平板实验,根据形成透明圈的面积,检测中华水蛇血清PLIγ对3种蛇毒酶活的抑制活性;分别向小鼠皮下注射3种蛇毒粗毒,造成小鼠皮下出血形成血斑,注射天然血清与蛇毒混合溶液,比较出血斑的大小,从而证明中华水蛇天然PLIγ的广谱抗蛇毒作用。设计分别带有EcoRⅠ和NotⅠ酶切位点的上下游引物,对实验室前期构建的原核表达载体pET28c(+)-PLIγ进行扩增,从而得到全长为570 bp的PLIγ基因,经双酶切之后,连接至酵母表达载体p PICZαA上,转化至DH5α中进行扩增。设置参数1.5 KV,25μF,电转时间5 ms,将线性化后p PICZαA-PLIγ重组质粒,电转化至毕赤酵母GS115中,利用博来霉素筛选阳性克隆。提取阳性克隆酵母DNA,利用PCR进行鉴定。在30℃、250 rpm条件下,使用终浓度0.5%甲醇对筛选的转化子进行诱导,连续培养120 h,每隔24 h收集发酵液上清,western bolt使用anti-His抗体检测目的蛋白PLIγ表达效果,确定最佳诱导时间。采用镍柱亲和层析分离纯化PLIγ,SDS-PAGE检测纯度。使用琼脂糖平板法检测PLIγ对五步蛇毒粗毒酶活的抑制作用,测量透明圈直径,计算抑制率。利用小鼠皮下注射实验,对比血斑面积,检测PLIγ对五步蛇粗毒的出血毒性抑制效果。结果:在针对五步蛇毒和蝮蛇蛇毒的琼脂糖平板实验中,中华水蛇PLIγ实验组透明圈直径减小。在眼镜蛇粗毒组,中华水蛇PLIγ实验组与阳性对照组相比,透明圈直径无明显变化。在小鼠皮下注射实验中,注射中华水蛇PLIγ蛋白致使五步蛇毒和蝮蛇毒的造成的出血斑的面积减小。在眼镜蛇毒组,注射中华水蛇PLIγ蛋白使小鼠的存活时间延长0.5-1 h。成功从pET28c(+)-PLIγ质粒克隆得到目的基因,长度为570 bp,并经过双酶切构建p PICZαA-PLIγ重组质粒,经过测序发现PLIγ基因没有发生任何突变。重组质粒经Sca I酶线性化,成功电转至酵母GS115细胞中,在含博来霉素平板上长出菌落,PCR鉴定其为阳性转化子。甲醇诱导,取发酵液上清,通过western bolt检测到目的蛋白PLIγ的表达,在23 k Da左右处出现条带,并在培养时间为72 h时蛋白表达量最多。发酵液经亲和层析分离纯化后,SDS-PAGE检测得到单一PLIγ蛋白条带。琼脂糖活性平板实验中,PLIγ使透明圈面积减小,对五步蛇毒酶活的抑制效率为84%。五步蛇毒小鼠背部出血试验中,PLIγ显著改善血管破损症状,出血斑面积减小。结论:中华水蛇PLIγ对蛇毒粗毒的酶活性和出血毒性、神经毒性有较好抑制效果,具有广谱抗蛇毒作用。p PICZαA-PLIγ重组质粒在酵母GS115细胞中,可被甲醇诱导产生PLIγ蛋白,且对五步蛇毒的酶活及出血毒性表现出较好的抑制作用,但发酵条件有待进一步优化。

关键词： PLIγ 蛇毒PLA2 广谱抗蛇毒电转化酵母表达出血毒性

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“言必称西方”现象的本质及危害

人民论坛 2024年第12期 107-109页

作者：李兴北京师范大学历史学国际关系教研室

“言必称西方”看似一种社会现象,实际上是一种思想政治现象或者社会思潮,其实质是“西方中心论”。“言必称西方”现象的社会基础比较深,影响比较大和广,涉及到实践和理论多个层面,不乏消极和危害的方面。正确认识“言必称西方”现象,... 详细信息

“言必称西方”看似一种社会现象,实际上是一种思想政治现象或者社会思潮,其实质是“西方中心论”。“言必称西方”现象的社会基础比较深,影响比较大和广,涉及到实践和理论多个层面,不乏消极和危害的方面。正确认识“言必称西方”现象,需要破除“西方中心论”。我们需要认真思考、精准剖析、对症下药、有的放矢,在世界百年未有之大变局加速演进的历史背景下,努力构建中国自主的知识体系,不断推进学科体系、学术体系、话语体系建设和创新。

关键词： “言必称西方” “ 西方中心论” 历史虚无主义

基于AWRSEI的岱海流域生态环境质量时空演变及驱动因子分析

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环境科学 2024年第3期45卷 1598-1614页

作者：赵嘉丽李兴孙冰内蒙古师范大学化学与环境科学学院呼和浩特010022 内蒙古师范大学内蒙古节水农业工程研究中心呼和浩特010022 内蒙古自治区环境监测总站呼和浩特分站呼和浩特010022

流域是重要的生态安全屏障和社会经济发展区域,为了更加客观准确地评价干旱和半干旱区流域生态环境质量,基于遥感生态指数(RSEI)引入盐度指标构建适用于干旱和半干旱区流域的遥感生态指数(AWRSEI)并以岱海流域为例分析其适用性.基于AWR... 详细信息

流域是重要的生态安全屏障和社会经济发展区域,为了更加客观准确地评价干旱和半干旱区流域生态环境质量,基于遥感生态指数(RSEI)引入盐度指标构建适用于干旱和半干旱区流域的遥感生态指数(AWRSEI)并以岱海流域为例分析其适用性.基于AWRSEI模型,采用4期Landsat TM/OLI合成影像,对2001~2020年岱海流域的生态环境质量进行定量评价,通过变异系数和空间自相关分析岱海流域生态环境质量时空演变规律,并通过地理探测器进行成因分析和驱动因子解释力分析.结果表明:(1)AWRSEI与各生态因子的平均相关系数为0.860,比单个指标分量更具代表性;第一主成分的荷载正负值和排序与RSEI一致,特征值贡献率比RSEI高3.69%,评价结果与真实地表情况更为接近,适合用于干旱区流域的生态环境质量评价.(2)岱海流域2001~2020年AWRSEI指数的年均值为0.427,生态环境质量基础较差,期间AWRSEI的均值呈现波动上升的趋势,并且在2020年均值达到最高0.502.整体生态环境质量明显好转,恶化区域减少了20.51%,改善区域增加了12.71%.空间分布上,岱海流域南部和西北部高海拔地区的林地生态环境质量优,北部和南部中海拔地区生态环境质量较差,湖区北侧生态环境质量优于南侧.(3)岱海流域AWRSEI变异系数平均值为0.280,生态环境质量状况稳定,整体变化波动较小,高波动主要集中在湖区南侧和居民点区域.岱海流域生态环境质量存在显著的空间自相关性,高-高集聚区主要分布在高海拔的林地区域和低海拔耕地区域;低-低集聚区零星分布在中海拔区域.(4)2001~2020年岱海流域生态环境的提升主要由于NDVI提高,NDBSI和NDSI降低. NDVI和NDBSI是交互作用最强的组合,对生态环境的解释力最强.土地利用是AWRSEI的主导因子,解释力最强.土地利用和气象因子的组合是交互作用最强,且各驱动因子之间均为增强关系.

关键词：生态环境质量遥感生态指数(RSEI) 岱海流域空间自相关地理探测器

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论中国睦邻外交:理论构建与实践创新

国际观察 2024年第1期 48-66页

作者：李兴北京师范大学历史学院北京100091

本文从“睦邻”概念出发,分析了中国睦邻外交的理论来源和实践创新。睦邻外交是中国周边外交的特色和亮点。与倡导亲诚惠容的周边外交相比,睦邻外交加重了“以邻为亲”的分量,新增了“与邻为友”“心心相印”等情感和内涵,感情上更互信... 详细信息

本文从“睦邻”概念出发,分析了中国睦邻外交的理论来源和实践创新。睦邻外交是中国周边外交的特色和亮点。与倡导亲诚惠容的周边外交相比,睦邻外交加重了“以邻为亲”的分量,新增了“与邻为友”“心心相印”等情感和内涵,感情上更互信,地位上更平等,态度上更亲和,关系上更紧密,体现了中国特色的大国外交从“周边”向“睦邻”的转型和深化。睦邻外交秉持周边共同体和“大家庭”精神,是新型国际关系和人类命运共同体理念在中国周边区域合乎逻辑的自然体现。中国式现代化为睦邻外交的提出与践行提供了基础和条件。在百年未有之大变局背景下,中国特色的睦邻外交急需理论建构和实践支撑。

关键词：睦邻外交中国特色大国外交周边外交理论建构

跨文化共感情动:中外科幻电影的生态价值及其符码转换

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现代传播（中国传媒大学学报） 2024年第4期46卷 87-95,159页

作者：曹漪那李兴四川大学外国语学院四川大学文学与新闻学院

科幻电影以人类、技术、生态的广阔视角,触发了生态话题在跨文化语境中的同频振动,尤其是它以诉诸观众感官的“灾难美学”方式,引发了观众对生态创伤的共感情动。而超生物域个体的生态共伤情动,既具有生物普遍性,又具有文化特殊性,它提... 详细信息

科幻电影以人类、技术、生态的广阔视角,触发了生态话题在跨文化语境中的同频振动,尤其是它以诉诸观众感官的“灾难美学”方式,引发了观众对生态创伤的共感情动。而超生物域个体的生态共伤情动,既具有生物普遍性,又具有文化特殊性,它提供了符号转码的可能性,促进了相异符号域之间的解域和再域,进而可以凝聚成与地球生物圈对应的整体符号域,因此也是生态文明互鉴、互释、互补、互融的具体联结方式。由此出发,科幻电影将生态境况与世界文化自然桥接,以根植于当地传统,贯穿中外文化眼界的笔触,创造性地书写存异而趋同的人类命运体的具象章图。

关键词：科幻电影跨文化传播生态共伤共感式情动符号转码

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一种基于双稳态驱动器的气动软体四足机器人

机器人 2024年第3期46卷 294-304页

作者：李兴旺滕燕徐迎南京理工大学机械工程学院江苏南京210094

软体机器人受材料性质和驱动原理等方面的限制,难以提升运动性能与承载能力。为此,本文提出一种基于双稳态驱动器的气动软体四足机器人。首先,设计了一种由刚性连杆、软体驱动器和弹簧3部分组成的双稳态软体驱动器。驱动器利用弹簧进行... 详细信息

软体机器人受材料性质和驱动原理等方面的限制,难以提升运动性能与承载能力。为此,本文提出一种基于双稳态驱动器的气动软体四足机器人。首先,设计了一种由刚性连杆、软体驱动器和弹簧3部分组成的双稳态软体驱动器。驱动器利用弹簧进行储能,通过压缩空气的驱动,可在2种稳定状态之间快速跳变。推导出驱动器的理论能量模型并对样机进行测试,试验测得双稳态软体驱动器的跳变运动时间为60~100 ms,其末端输出力是同驱动条件下软体驱动器的2~4倍。然后,以该驱动器为基础设计了一种四足机器人,并对机器人的控制方案和运动步态进行分析。最后,搭建气动控制回路对四足机器人样机的性能进行测试。研究结果表明,该样机在一个运动周期内可爬行125 mm或转向15°,平均爬行速度为158.62 mm/s(1.11倍体长/秒),最高瞬时速度达396.62 mm/s(2.83倍体长/秒)。此外,该机器人可承载400 g负载,相当于自身质量的1.08倍,展现出了良好的运动性能与承载能力。

关键词：双稳态软体驱动器仿生四足机器人

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一般各向异性介质中qS1和qS2波波前分离

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地球物理学报 2024年第7期67卷 2773-2784页

作者：李兴旺王迪白超英长安大学地质工程与测绘学院地球物理系西安710054 长安大学计算地球物理研究所西安710054 海洋油气勘探国家工程研究中心北京100028

地震波在各向异性介质中传播时存在横波分裂现象,可用于研究岩石中地震波传播特征和了解地下介质各向异性参数.一般各向异性介质中计算三种地震波(qP,qS1,qS2)相速度和群速度的研究日趋成熟,但分离qS1和qS2波的波前仍然是一项具有挑战... 详细信息

地震波在各向异性介质中传播时存在横波分裂现象,可用于研究岩石中地震波传播特征和了解地下介质各向异性参数.一般各向异性介质中计算三种地震波(qP,qS1,qS2)相速度和群速度的研究日趋成熟,但分离qS1和qS2波的波前仍然是一项具有挑战性的工作.为此,本文基于新近给出的一般各向异性介质中三种波(qP,qS1,qS2)群速度的解析计算公式,依据相速度光滑连续的条件给出相邻方向上qS1和qS2波识别方法;为避免数值计算误差造成识别错误,构建了置信度函数,并借鉴快速行进法的思想逐点进行判别以分离qS1和qS2波的波前,最终得到三种波(qP,qS1,qS2)各自独立且完整的波前面.多个数值模拟试验结果表明,该算法适用于不同类型各向异性介质,且不受波前复杂程度的影响,具有较高的稳定性,可为一般各向异性介质中多次波射线追踪、多震相走时反演以及横波分裂研究等提供算法支持.

关键词：一般各向异性介质群速度横波分裂波前分离

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集体自然资源损害救济的法治路径

暨南学报（哲学社会科学版） 2024年第4期46卷 70-83页

作者：李兴宇北京林业大学人文社会科学学院

集体自然资源损害救济未受到足够的关注,成为集体产权制度改革与全民所有自然资源损害赔偿试点之间的“空白地带”,存在诸多现实困境。集体自然资源具有资源属性和生态环境价值,承载公共利益,应将其认定为法律上的公物,在损害救济制度... 详细信息

集体自然资源损害救济未受到足够的关注,成为集体产权制度改革与全民所有自然资源损害赔偿试点之间的“空白地带”,存在诸多现实困境。集体自然资源具有资源属性和生态环境价值,承载公共利益,应将其认定为法律上的公物,在损害救济制度上不能完全适用民事规则。应构建农村内部的自然资源监督机制,集体经济组织为所有权行使主体,赋予村民委员会对集体自然资源开发利用的监管职责,例如对自然资源损害的发现与及时报告职责。应建立集体成员的派生诉讼制度,当集体经济组织怠于履行职责时,符合一定条件的集体成员可以作为原告,直接向行为人主张集体自然资源损害赔偿责任。在司法救济上,形成“自然资源所有权诉讼—生态环境损害赔偿诉讼—环境民事公益诉讼”的三阶链条。

关键词：自然资源集体所有生态环境损害公益诉讼

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地方高校科技成果转化股权化改革之路

中国高教研究 2024年第5期 61-68页

作者：李兴伟青岛科技大学党委山东青岛266061

加强地方高校科技创新是全面落实创新驱动发展战略、推动地方经济社会高质量发展的重要举措。地方高校作为区域内知识积累、创造与传播的主体,是原始性创新与科技成果转化的重要载体与平台。传统的转让和许可等方式已面临现实困境,因此... 详细信息

加强地方高校科技创新是全面落实创新驱动发展战略、推动地方经济社会高质量发展的重要举措。地方高校作为区域内知识积累、创造与传播的主体,是原始性创新与科技成果转化的重要载体与平台。传统的转让和许可等方式已面临现实困境,因此,地方高校科技成果转化亟待进行股权化改革,进一步探讨和优化作价投资入股这一方式。通过文献整理、数据分析以及案例研究等方法,对地方高校科技成果转化股权化改革的现状和问题进行归纳和分析,总结我国地方高校科技成果转化的常见模式。在借鉴国内外实践案例基础上,探索地方高校科技成果转化股权化改革的有效路径,为推动科技创新、优化地方高校科技成果转化机制提供参考,促进地方高校科技成果转化的良性发展。

关键词：地方高校科技创新成果转化股权化改革