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贝母素乙通过诱导G0/G1期阻滞抑制结肠癌细胞的增殖

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中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第4期31卷 326-332页

作者：孙丽丽白冰杨霞李玥李一权韩继成房金波李霄尚超朱羿龙金宁一延边大学医学院病理学与病理生理学教研室吉林延吉136200 长春中医药大学院士工作室吉林长春130117 中国农业科学研究院长春兽医研究所吉林长春130122

目的:探讨贝母素乙对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法:利用不同浓度的贝母素乙处理人结肠癌细胞HCT116和正常结肠上皮细胞CCD841 CON,通过CCK-8法和结晶紫染色法检测贝母素乙对HCT116和CCD841 CON细胞增殖活力的影响... 详细信息

目的:探讨贝母素乙对结肠癌HCT116细胞增殖的抑制作用及其分子机制。方法:利用不同浓度的贝母素乙处理人结肠癌细胞HCT116和正常结肠上皮细胞CCD841 CON,通过CCK-8法和结晶紫染色法检测贝母素乙对HCT116和CCD841 CON细胞增殖活力的影响,流式细胞术和WB法检测贝母素乙对HCT116细胞周期及其细胞周期相关蛋白表达的影响。构建HCT116移植瘤裸鼠模型和AOM/DSS结肠癌小鼠模型,观察贝母素乙对小鼠模型肿瘤生长和OS的影响,免疫组化法和WB法检测对移植瘤或肿瘤组织中细胞周期相关蛋白CDK4、CDK6和cyclin D1表达的影响。结果:贝母素乙可显著抑制结肠癌HCT116细胞的增殖能力(P<0.01),诱导HCT116细胞周期G0/G1期阻滞(P<0.01),降低CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达水平(均P<0.01)。荷瘤小鼠实验结果显示,贝母素乙(0.75 mg/kg)显著抑制HCT116细胞移植瘤的生长并延长荷瘤裸鼠的OS(P<0.05或P<0.01),降低AOM/DSS模型小鼠的体质量、延长OS、减少癌变肠组织的肿瘤个数和肿瘤体积,下调肿瘤组织中CDK4、CDK6和cyclin D1的蛋白表达(P<0.01或P<0.05)。结论:贝母素乙通过下调CDK4、CDK6和cyclin D1的表达水平,引起细胞周期G0/G1期阻滞,从而抑制结肠癌HCT116细胞的增殖。

关键词：贝母素乙结肠癌 HCT116细胞 G0/G1期阻滞增殖

苍术多糖通过调节Th17/Treg平衡改善葡聚糖硫酸钠诱导的结肠炎

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中国免疫学杂志 2024年

作者：李菁菁张冬娜李一权朱羿龙张金鑫肖妍韩晶方瑞康金宁一朱光泽韩继成长春中医药大学吉林省院士工作站长春中医药大学中西医结合学院长春中医药大学附属医院检验科

目的：基于葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠结肠炎模型，探索苍术多糖（Atractylodis Rhizoma Polysaccharide，ARP）对调节Th17/Treg平衡改善结肠炎的作用机制。方法：基于DSS诱导小鼠结肠炎模型，给予小鼠ARP提取物干预治疗。通过疾病活... 详细信息

目的：基于葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导小鼠结肠炎模型，探索苍术多糖（Atractylodis Rhizoma Polysaccharide，ARP）对调节Th17/Treg平衡改善结肠炎的作用机制。方法：基于DSS诱导小鼠结肠炎模型，给予小鼠ARP提取物干预治疗。通过疾病活动指数（DAI）分析小鼠疾病活动程度，H&E染色分析结肠组织病理变化，免疫组化及Western Blot分析小鼠结肠组织STAT相关蛋白及紧密连接关键蛋白的表达情况；流式细胞术分析肠系膜淋巴结淋巴细胞Th17和 Treg的分化能力。结果：DSS组小鼠体重明显下降，DAI指数显著升高。ARP干预治疗后，小鼠体重显著增加，DAI指数下降。H&E染色结果显示DSS组小鼠结肠黏膜出现严重的病理损伤，而ARP干预治疗后可有效缓解黏膜损伤；免疫组化和Western blot检测结果显示，经ARP治疗后的小鼠Occludin和ZO-1蛋白表达量显著增加（P<0.01）。流式细胞术结果显示，经ARP干预治疗后，肠系膜淋巴结中的Th17细胞比例显著下调，而Treg细胞比例显著增加。结论：ARP能够通过改善Th17/Treg失衡来显著减轻DSS诱导的结肠炎小鼠的炎症情况。

关键词：苍术多糖(ARP) 炎症性肠病(IBD) Th17/Treg平衡 Stat信号通路

SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD的构建、筛选及免疫原性研究

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第1期40卷 19-25页

作者：赵仁双朱羿龙尚超韩继成刘子睿修志儒李善智李雅茹杨霞李霄金宁一金鑫李一权延边大学农学院预防兽医学实验室吉林延吉133000 长春中医药大学院士工作站吉林长春130117 中国农业科学院长春兽医研究所吉林长春130122

目的构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭... 详细信息

目的构建重组痘苗病毒载体疫苗rVTT△TK-RBD,并评价其安全性和免疫原性。方法参考严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2)基因序列合成受体结合域(RBD)基因,并将其插入自主构建的重组质粒pSTKE的多克隆位点上,构建重组痘苗病毒穿梭载体pSTKE-RBD,并转染到预先感染天坛株痘苗病毒(VTT)的BHK-21细胞内,经多轮的荧光噬斑筛选成功获得重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD;通过滴鼻方式免疫小鼠后,检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠体质量的影响;通过肌肉免疫小鼠后,分析rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠产生的特异性抗体和中和抗体的水平;通过流式细胞术检测rVTT△TK-RBD对BALB/c小鼠T细胞亚群的影响。结果利用同源重组、增强型绿色荧光蛋白(EGFP)筛选标记和多次荧光噬斑筛选,成功筛选获得了表达RBD的胸腺激酶(TK)基因缺失型重组痘苗病毒rVTT△TK-RBD,且PCR验证成功。BALB/c小鼠体内实验表明rVTT△TK-RBD具有较好的抗SARS-CoV-2的免疫原性且相比于亲本株VTT明显降低了对机体的毒性作用。结论成功构建并获得SARS-CoV-2重组痘苗病毒疫苗rVTT△TK-RBD并通过各项试验证明其安全性和免疫原性。

关键词：严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS-CoV-2) 天坛株痘苗病毒 TK基因同源重组

贝母素乙通过下调CDK2/CDK4/CDK6和cyclin D1表达抑制人结肠腺癌SW480细胞活力

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中国病理生理杂志 2024年第6期40卷 1070-1077页

作者：杨霞李雅茹李玥毛泓月白冰李一权韩继成万怡宁谢诗敏朱羿龙金宁一延边大学医学院病理学与病理生理学教研室吉林延吉136200 长春中医药大学院士工作室吉林长春130117 中国农业科学研究院长春兽医研究所吉林长春130122

目的:探究贝母素乙(peiminine)对人结肠腺癌细胞(SW480)活力、迁移和侵袭的抑制作用并探讨其抑制SW480增殖的作用机制。方法:用不同剂量的贝母素乙处理人结肠腺癌细胞SW480和人正常结肠上皮细胞CCD-841CoN,通过CCK-8实验确定贝母素乙抑... 详细信息

目的:探究贝母素乙(peiminine)对人结肠腺癌细胞(SW480)活力、迁移和侵袭的抑制作用并探讨其抑制SW480增殖的作用机制。方法:用不同剂量的贝母素乙处理人结肠腺癌细胞SW480和人正常结肠上皮细胞CCD-841CoN,通过CCK-8实验确定贝母素乙抑制SW480活力的最适剂量和最佳作用时间;划痕和Transwell实验检测贝母素乙对SW480迁移与侵袭能力的影响;流式细胞术和Western blot检测贝母素乙对SW480细胞周期及细胞周期相关蛋白表达的影响;构建SW480移植瘤裸鼠模型,在体内分析贝母素乙对SW480活力及细胞周期相关蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,当贝母素乙作用浓度为110 mg/L时能够显著抑制SW480细胞活力、迁移和侵袭能力(P<0.01),并诱导SW480细胞周期G1期阻滞,周期相关蛋白细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)、CDK4、CDK6、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、p-Rb/Rb、E2F1、E2F3和E2F4的表达水平受到显著抑制(P<0.05);在体内,贝母素乙抑制SW480移植瘤的活力、延长荷瘤裸鼠的生存周期,影响肿瘤组织中CDK2、CDK4、CDK6和cyclin D1的表达。结论:贝母素乙通过下调CDK2、CDK4、CDK6和cyclin D1的表达,引起SW480细胞的G1期阻滞,进而抑制人结肠腺癌细胞SW480增殖。

关键词： SW480细胞贝母素乙周期蛋白依赖性激酶细胞周期

Ad-apoptin通过AMPK/ACC信号通路抑制肺癌细胞脂代谢

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中国免疫学杂志 2022年第5期38卷 569-573,579页

作者：宋高杰尚超李一权朱羿龙金宁一(指导) 李霄(指导) 延边大学医学院延吉133002 中国农业科学院长春兽医研究所长春130122 长春中医药大学长春130117

目的:探讨溶瘤腺病毒Ad-apoptin对非小细胞肺癌细胞脂代谢的影响及分子机制。方法:CCK-8法检测细胞活性;JC-1染色和Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;Western blot检测脂代谢和凋亡相关蛋白;siRNA干扰肺癌细胞AMPK的表达;Co-IP检测Ad-apop... 详细信息

目的:探讨溶瘤腺病毒Ad-apoptin对非小细胞肺癌细胞脂代谢的影响及分子机制。方法:CCK-8法检测细胞活性;JC-1染色和Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;Western blot检测脂代谢和凋亡相关蛋白;siRNA干扰肺癌细胞AMPK的表达;Co-IP检测Ad-apoptin与AMPK蛋白相互间作用;建立移植瘤小鼠模型,检测肿瘤的生长,并通过免疫组化检测TUNEL、Ki-67、p-AMPK和FASN蛋白表达量。结果:Ad-apoptin对肺癌细胞抑制率具有浓度依赖性(P<0.05),显著诱导细胞凋亡(P<0.05),降低细胞脂质累积,下调三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)含量,上调p-AMPK和p-ACC;敲低AMPK可显著减弱Ad-apoptin诱导的凋亡,而抑制ACC可显著增强Ad-apoptin诱导的凋亡。在体内试验中,Ad-apoptin能抑制体内肿瘤生长,同时也能抑制细胞增殖,并促进细胞凋亡。结论:Ad-apoptin以AMPK为靶点,通过AMPK/ACC途径,抑制肿瘤增殖和脂代谢并促进细胞凋亡。

关键词： Ad-apoptin AMPK/ACC 肺癌脂代谢细胞凋亡

新补骨脂异黄酮通过caspase-3/GSDME通路诱导肝细胞癌Huh-7细胞焦亡

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中国肿瘤生物治疗杂志 2023年第4期30卷 318-323页

作者：李雅茹杨霞赵仁双修志儒朱羿龙韩继成李善智李一权金宁一延边大学医学院、病理学与病理生理学教研室吉林延边133002 长春中医药大学院士工作站吉林长春130117 中国农业科学院、长春兽医研究所吉林长春130122

目的:探讨新补骨脂异黄酮(NBIF)对肝细胞癌(HCC)Huh-7细胞焦亡的影响及其分子机制。方法:体外培养Huh-7细胞,用CCK-8法检测不同浓度的NBIF处理48 h时对细胞存活率的影响,光学显微镜下观察NBIF处理后Huh-7细胞的形态变化,乳酸脱氢酶(LDH... 详细信息

目的:探讨新补骨脂异黄酮(NBIF)对肝细胞癌(HCC)Huh-7细胞焦亡的影响及其分子机制。方法:体外培养Huh-7细胞,用CCK-8法检测不同浓度的NBIF处理48 h时对细胞存活率的影响,光学显微镜下观察NBIF处理后Huh-7细胞的形态变化,乳酸脱氢酶(LDH)释放实验检测细胞的LDH释放量,WB实验检测细胞中GSDME、caspase-3的蛋白水平变化。采用si RNA干扰Huh-7细胞中caspase-3、GSDME表达后,CCK-8法检测NBIF处理对细胞存活率的影响,WB实验检测GSDME蛋白表达水平,观察NBIF处理对细胞形态的影响,并检测细胞LDH释放量。结果:60μmol/L以上的NBIF均能显著抑制Huh-7细胞的增殖(均P一种新思路。

关键词：新补骨脂异黄酮肝细胞癌 Huh-7细胞细胞焦亡 GSDME

基因缺失型天坛株痘苗病毒构建及实验免疫研究

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基因缺失型天坛株痘苗病毒构建及实验免疫研究

作者：李一权吉林农业大学

学位级别：硕士

痘苗病毒(vaccinia virus,VACV)具有基因组庞大、宿主范围广,且只在胞浆内复制等特点。因而,作为疫苗载体广泛应用于各种传染病、心血管疾病、免疫缺陷病和肿瘤疾病的治疗领域。虽然,传统的痘苗病毒,如我国的天坛株痘苗病毒,作为疫苗在... 详细信息

痘苗病毒(vaccinia virus,VACV)具有基因组庞大、宿主范围广,且只在胞浆内复制等特点。因而,作为疫苗载体广泛应用于各种传染病、心血管疾病、免疫缺陷病和肿瘤疾病的治疗领域。虽然,传统的痘苗病毒,如我国的天坛株痘苗病毒,作为疫苗在消灭天花过程中发挥了重要作用,但也常引起程度不等的副作用,如全身乏力、发热、皮疹、脑炎和眼部牛痘感染,尤其对免疫抑制患者、慢性皮肤病患者和心脏病患者尤为严重。目前已开发了多种以痘苗病毒为载体的基因工程活载体疫苗。除了作为表达载体已取得令人瞩目的成绩外,痘苗病毒载体还具有一定的问题,如载体构建程序复杂、外源筛选标记插入困难和重组病毒筛选困难等问题。因此,进一步提高载体疫苗效率、载体的安全性、简化制备程序,仍成为痘苗病毒载体的研究热点。本研究通过同源重组技术、Cre/loxp系统逐步敲除天坛株痘苗病毒上的TC7LK2L(包括C7L、C6L、C5L、C4L、C3L、C2L、C1L、N1L、N2L、M1L、M2L、K1L和K2L)、TE3L、TA35R、TB13R及TA66R等基因片段,以达到减弱病毒毒力和缩小病毒宿主范围等目的。随后本研究通过体内外不同实验分析了缺失型痘苗病毒的毒力。首先通过结晶紫染色实验和MTT检测实验分析了缺失型痘苗病毒的细胞内扩散能力和细胞毒性。其次,通过鼻腔接种和颅内接种途径感染小鼠后,观察体重变化和生存率,分析了缺失型痘苗病毒的毒力水平;通过皮内接种途径感染家兔后,观察痘斑大小,分析了缺失型痘苗病毒对皮肤的损伤作用。进而,通过免疫小鼠,分析了缺失型痘苗病毒的免疫原性。包括,T淋巴细胞增殖实验、细胞因子检测实验、特异性抗体检测实验及中和抗体检测实验来进一步分析验证了缺失型痘苗病毒的免疫原性。结果表明,成功构建了缺失TC7LK2L、TE3L、TA35R、TB13R及TA66R基因的缺失型痘苗病毒MVTTEAB,遗传稳定性良好。5段基因的缺失不影响缺失型痘苗病毒的形态发生和正常复制。细胞水平检测病毒毒力结果表明,MVTTEAB在细胞中的扩散能力及细胞毒性显著减弱。痘苗病毒在家兔皮肤和小鼠体内的毒力检测表明,5段基因的缺失显著减弱了痘苗病毒在动物体内的毒力,提高了安全性。BALB/c小鼠免疫MVTTEAB后的免疫原性实验结果表明,基因缺失型痘苗病毒可诱导机体产生有效的体液及细胞免疫应答,并保持了其作为疫苗的免疫原性。总之,TC7LK2L、TE3L、TA35R、TB13R及TA66R基因的缺失在不影响免疫原性的基础上减弱了病毒毒力,且减小了宿主范围。该病毒载体为重组载体疫苗的研究奠定了基础。

关键词：同源重组天坛株痘苗病毒毒力免疫原性

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煤矿企业电能质量问题与补偿优化措施研究

电气应用 2013年第21期32卷 63-67页

作者：王惠李一权和敬涵冯阳李霞北京交通大学电气工程学院大同智能电力勘测设计有限责任公司

现有煤矿企业采用了大量的感性设备，功率因数较低，造成煤矿用户电压水平降低、线路损耗增大。大容量设备的周期性工作制将造成电压波动的电能质量问题。影响企业的经济性运行。SVC能够动态跟踪系统的无功变化进行快速补偿，可以改善... 详细信息

现有煤矿企业采用了大量的感性设备，功率因数较低，造成煤矿用户电压水平降低、线路损耗增大。大容量设备的周期性工作制将造成电压波动的电能质量问题。影响企业的经济性运行。SVC能够动态跟踪系统的无功变化进行快速补偿，可以改善煤矿企业上述电能质量问题。在对张家湾煤矿供电系统进行动态仿真的基础上。

关键词：煤矿企业电能质量 SVC PSCAD 仿真经济效益分析

携Apoptin和PEG3启动子双特异性溶瘤腺病毒对结直肠癌的抑制作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2015年第1期22卷 16-21页

作者：陈智飞李一权胡宁宁兰添周晔李霄孙丽丽金宁一吉林大学动物医学学院预防兽医学教研室吉林长春130062 军事医学科学院军事兽医研究所病毒研究室吉林长春130122 长春中医药大学附属医院检验科吉林长春130103 吉林省肿瘤医院头颈外一科吉林长春130012

目的:探讨携带凋亡素基因(Apoptin)和进行性增量基因3(progression-elevated gene 3,PEG3)启动子的双特异性溶瘤腺病毒Ad-Apoptin-PEG3p-E1a对结直肠癌的体内、外抑制效果。方法:以Ad-Apoptin-PEG3p-E1a、Ad-PEG3p-E1a、AdApoptin、Ad-mock(均为前期工作构建)分别感染人结直肠癌SW1116细胞和胃黏膜上皮GES细胞,MTT法检测感染后细胞的增殖水平;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;采用DCFH-DA和Rho123染色流式细胞术分别检测细胞活性氧水平和线粒体膜电位,Western blotting检测细胞色素C的释放。建立BALB/c小鼠结直肠癌CT26细胞皮下移植瘤模型,观察Ad-ApoptinPEG3p-E1a对结直肠癌皮下移植瘤的抑制作用。结果:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a抑制SW1116细胞增殖,并具有一定的剂效和时效关系,以MOI=100感染72 h后抑制率达到(56.23±6.64)%,其抑制能力明显强于Ad-p EG3p-E1a和Ad-Apoptin等对照组(均P<0.05)。Ad-Apoptin-PEG3p-E1a感染导致SW1116细胞活性氧水平上调、线粒体膜电位下降以及细胞色素C释放增加,最终诱导SW1116细胞凋亡,凋亡率为(37.97±3.78)%,但对正常GES细胞的上述各项指标均无明显影响。Ad-ApoptinPEG3p-E1a能显著抑制小鼠皮下移植瘤生长(P<0.05);有效延长模型动物平均生存期,Ad-Apoptin-PEG3p-E1a治疗组平均生存期为(41.0±0.7)d,显著高于Ad-PEG3p-E1a的(34.4±1.6)d、Ad-Apoptin的(33.2±1.2)d和Ad-mock的(28.4±1.4)d(均P<0.05)。结论:Ad-Apoptin-PEG3p-E1a可以特异性有效抑制结直肠癌细胞增殖及皮下移植瘤的生长。

关键词：溶瘤腺病毒凋亡素基因进行性增量基因3 结直肠癌 SW1116细胞 GES细胞