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DYC-279对人肝癌细胞株HepG-2体外抗肿瘤活性的初步研究

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DYC-279对人肝癌细胞株HepG-2体外抗肿瘤活性的初步研究

作者：朴军颜郑州大学

学位级别：硕士

1背景和目的：1，2，3-三氮唑在药物化学合成中占据重要地位，它具有易于合成以及生物活性较高等特点。近年研究表明，1，2，3-三氮唑类化合物具有较强的抗肿瘤活性，使此类化合物的研究成为研发抗肿瘤药物的一个热点。DYC-279是一种新... 详细信息

1背景和目的：1，2，3-三氮唑在药物化学合成中占据重要地位，它具有易于合成以及生物活性较高等特点。近年研究表明，1，2，3-三氮唑类化合物具有较强的抗肿瘤活性，使此类化合物的研究成为研发抗肿瘤药物的一个热点。DYC-279是一种新合成的小分子化合物，具有1，2，3-三氮唑基团的二硫代氨基乙酸酯，相对分子质量为468，对MGC-803、MCF-7、PC-3和EC-109等细胞株具有较强的抑制作用，是一种具有活性的药物前体，但其作用机制尚没有明确的报道。本文研究了DYC-279对人肝癌细胞HepG-2的体外抗肿瘤活性，运用Western blot及PCR方法探讨其干扰细胞周期及诱导凋亡作用的机制，并初步考察了DYC-279对CYP450酶活性的影响。2方法：分别用0.39、0.78、1.56、3.13、6.25、12.5mg/L的DYC-279处理人肝癌HepG-2细胞24、48及72h后，CCK-8法检测DYC-279对细胞的增殖抑制作用;用浓度为0.78、1.56、3.13mg/L的DYC-279处理人肝癌HepG-2细胞24h后，FCM检测细胞周期变化和凋亡情况;使用RT-PCR及Western blot技术检测细胞周期及凋亡相关因子CyclinB1、cdc-2、CyclinD1、Caspase9、Bax及Bcl-2的mRNA或蛋白表达水平变化;使用大鼠S9体外孵育体系，分析DYC-279对CYP1A2、CYP2D6、CYP2E1三种代谢酶活性的影响。3结果：(1)DYC-279对细胞株HepG-2的抑制实验CCK-8法检测结果表明DYC-279对细胞的抑制作用随药物浓度的增大而增大，随药物作用时间的延长而增加;DYC-279处理细胞24h、48h及72h后，DYC-279对人肝癌细胞株HepG-2的IC50值分别为（10.6±2.7）mg/L、（6.5±1.9）mg/L、（3.1±1.1）mg/L。(2)DYC-279对HepG-2细胞周期及凋亡的干扰作用FCM检测细胞周期变化显示，随着药物浓度的增加，处于G0/G1期的细胞数目减少，G2/M期的明显增加，而S期细胞数目变化不明显。使用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡显示，药物作用24h后，细胞早期凋亡及晚期凋亡数目有增加的趋势，且早期凋亡更加明显。(3)PCR技术检测周期相关基因表达的变化PCR检测CyclinB1、cdc-2、CyclinD1基因的mRNA水平结果显示，CyclinB1、cdc-2基因的mRNA表达水平均上调，CyclinD1基因的mRNA水平显著下调，预示着细胞周期相关基因CyclinB1、cdc-2、CyclinD1的表达受到DYC-279的影响。(4)DYC-279对细胞周期及凋亡相关蛋白表达的影响实验采用Western blot方法检测周期蛋白CyclinB1、cdc-2、CyclinD1及凋亡蛋白Caspase9、Bcl-2、Bax的表达水平。实验表明蛋白CyclinB1、cdc-2、Caspase9、Bax等的表达水平随用药浓度的增加而上调，蛋白CyclinD1与Bcl-2的表达水平明显下调。（5）DYC-279对CYP450酶活性的影响不同浓度DYC-279与S9孵育体系中，与对照组相比，非那西丁的浓度变化不明显，表明DYC-279对CYP1A2酶活性无影响;右美沙芬的代谢减慢，说明了DYC-279降低了CYP2D6的活性;氯唑沙宗的代谢减慢较快，说明了DYC-279同样降低了CYP2E1的活性，同时孵育体系中DYC-279的浓度越高，氯唑沙宗的代谢越慢，预示着DYC-279对CYP2E1活性的影响可能具有浓度依赖性。结论：（1）DYC-279在一定浓度下抑制人肝癌HepG-2细胞株的增殖。（2）DYC-279阻滞HepG-2细胞于G2/M期并诱导其凋亡现象的产生。（3）DYC-279的抗肿瘤活性可能与CyclinB1、cdc-2、CyclinD1、Caspase9、Bcl-2、Bax等蛋白表达异常相关。（4）DYC-279可以抑制代谢酶CYP2D6及CYP2E1的活性而对CYP1A2的活性影响不大。

关键词： DYC-279 HepG-2 Western blot RT-PCR S9

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肿瘤睾丸抗原基因研究进展

肿瘤基础与临床 2014年第4期27卷 366-368,F0003页

作者：朴军颜杨小昂郑州大学河南省医药科学研究院河南郑州450052

当前，导致人类死亡的主要原因之一为恶性肿瘤。WHO统计结果显示，每年约有700万人因肿瘤而死亡[1]，而且这一数字呈逐年递增趋势。肿瘤发生是一个长期累积的过程，受多基因控制和多因素调节。

关键词：肿瘤睾丸抗原基因免疫治疗

利奈唑胺治疗耐药性肺结核的临床效果和安全性评价

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临床研究 2023年第10期31卷 74-77页

作者：朴军颜赵花郑州市第六人民医院药学部河南郑州450000 郑州市第六人民医院呼吸介入科/气管镜室河南郑州450000

目的浅析耐药性肺结核使用利奈唑胺治疗的临床效果及安全性,从而为日后的临床制定治疗方案提供依据。方法纳入2021年1月至2022年12月郑州市第六人民医院收入的耐药性肺结核患者70例,使用数字表法随机分为对照组与观察组,各35例,对照组... 详细信息

目的浅析耐药性肺结核使用利奈唑胺治疗的临床效果及安全性,从而为日后的临床制定治疗方案提供依据。方法纳入2021年1月至2022年12月郑州市第六人民医院收入的耐药性肺结核患者70例,使用数字表法随机分为对照组与观察组,各35例,对照组接受标准治疗方案,观察组基于此接受利奈唑胺治疗,就两组患者痰菌转阴率、空洞闭合率、症状改善时间、血清总氧化态(TOS)、总抗氧化态(TAS)、血清对氧磷酶-1(PON1)、血清炎性因子水平以及不良反应进行组间比较。结果治疗后,观察组患者痰菌转阴率、空洞闭合率均高于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论利奈唑胺能抑制细菌的蛋白质合成,且对革兰阳性菌与耐药菌均具有良好的抑制作用,从而降低耐药菌的风险。利奈唑胺应用于耐药性肺结核治疗中,可有效提高痰菌转阴率、空洞闭合率,安全性较佳,值得临床应用。

关键词：利奈唑胺耐药性肺结核痰菌转阴率症状改善时间安全性评价

沉默FATE/BJ-HCC-2基因的表达对肝癌细胞迁移及侵袭的影响

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郑州大学学报（医学版） 2015年第6期50卷 805-809页

作者：葛丽丽朴军颜杨小昂尹艳慧张毓郑州大学医药科学研究院郑州450052 郑州市儿童医院检验科郑州450053 北京大学免疫学系T细胞实验室北京100083

目的:研究FATE/BJ-HCC-2基因表达与肝癌细胞迁移及侵袭的关系。方法:体外合成FATE/BJ-HCC-2基因序列特异性小干扰RNA(siRNA),转染肝癌细胞系克隆株5B4,并设非特异性siRNA转染和空白对照组。采用RT-PCR及Western blot方法检测各组细胞中F... 详细信息

目的:研究FATE/BJ-HCC-2基因表达与肝癌细胞迁移及侵袭的关系。方法:体外合成FATE/BJ-HCC-2基因序列特异性小干扰RNA(siRNA),转染肝癌细胞系克隆株5B4,并设非特异性siRNA转染和空白对照组。采用RT-PCR及Western blot方法检测各组细胞中FATE/BJ-HCC-2 mRNA和蛋白的表达;通过Transwell小室模型检测各组细胞体外迁移及侵袭的能力;激光共聚焦显微镜下观察5B4及空质粒转染的对照细胞(Mock)的骨架结构。结果:各组细胞中FATE/BJ-HCC-2 mRNA和蛋白表达差异有统计学意义(F=15.321,P=0.020),特异性siRNA转染组细胞低于其他2组(P<0.05)。抑制FATE/BJ-HCC-2基因表达后,细胞体外迁移及侵袭的能力降低(F=6.171和10.109,P<0.05)。5B4细胞形态拉长,蝌蚪状,呈现迁移、游走的状态;微丝丰富,形态规则,平行贯穿于细胞全长,细胞膜周围有较多丝状伪足伸出;微管减少,分布不规则。结论:FATE/BJ-HCC-2基因表达促进肝癌细胞的迁移及侵袭。

关键词： FATE/BJ-HCC-2 RNA干扰肝癌转移

基因芯片筛选稳定转染FATE/BJ-HCC-2基因的肝癌细胞中肿瘤转移相关差异表达基因

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重庆医学 2016年第12期45卷 1595-1597页

作者：葛丽丽杨小昂朴军颜尹艳慧张毓河南省郑州市儿童医院检验科 450053 郑州大学医药科学研究院 450052 北京大学免疫学系T细胞室 100083

目的筛选稳定转染FATE/BJ-HCC-2基因的肝癌细胞中肿瘤转移相关的差异表达基因。方法分别提取稳定转染FATE/BJ-HCC-2的肝癌细胞(5B4)及转染空质粒的对照细胞(Mock)总RNA,通过基因芯片技术筛选差异表达基因。结果与Mock细胞比较,5B4细胞... 详细信息

目的筛选稳定转染FATE/BJ-HCC-2基因的肝癌细胞中肿瘤转移相关的差异表达基因。方法分别提取稳定转染FATE/BJ-HCC-2的肝癌细胞(5B4)及转染空质粒的对照细胞(Mock)总RNA,通过基因芯片技术筛选差异表达基因。结果与Mock细胞比较,5B4细胞共筛选出1 694个差异表达基因,有11个基因表达差异明显,其中MMP-1、PTGS2、FN、CA9、IL-8、ILK、Areg 7个基因在转染FATE/BJ-HCC-2基因后表达量明显上升,差异倍数分别为81.80、49.86、11.30、16.26,3.48、2.79、2.20。E-cadherin、RhoBTB3、ALPP、HLA-DRB 4个基因表达量明显下降,差异倍数分别为-5.42、-2.23、-5.93、-8.03。结论采用基因芯片技术对FATE/BJ-HCC-2参与的肝癌转移的差异表达基因进行细致的筛选,其最终目的是为研究肝癌转移机制打下坚实的理论基础。

关键词：肝肿瘤基因芯片基因差异表达

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醉椒素脂质体的制备及其理化性质考察

郑州大学学报（理学版） 2013年第1期45卷 73-76页

作者：陈玉堂袁曼朴军颜闫淑娟徐霞郑州大学药学院河南郑州450001

制备醉椒素脂质体并对其稳定性进行考察.采用薄膜—超声分散法制备脂质体,利用高效液相色谱法测定其主药含量,并考察其粒径、Zeta电位、包封率等指标及在室温与4℃保存14 d的稳定性.所得脂质体粒径小而均匀,粒径均值为(161±5)nm,Zeta... 详细信息

制备醉椒素脂质体并对其稳定性进行考察.采用薄膜—超声分散法制备脂质体,利用高效液相色谱法测定其主药含量,并考察其粒径、Zeta电位、包封率等指标及在室温与4℃保存14 d的稳定性.所得脂质体粒径小而均匀,粒径均值为(161±5)nm,Zeta电位为(2.37±0.2)mV,包封率均在77.09%以上,稳定性考察各项指标均无明显改变.由此可以得出结论,所制制剂包封率较高,稳定性良好.

关键词：醉椒素脂质体理化性质包封率

KYBNZ-1Ⅰ对Tca8113细胞增殖的抑制作用

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郑州大学学报（医学版） 2015年第3期50卷 413-416页

作者：常悦王维嘉朴军颜姚珂左非非徐少博徐霞郑州大学口腔医学院正畸科郑州450052 郑州大学临床医学系郑州450001 郑州大学药学院郑州450001

目的:观察冬凌草提取物KYBNZ-1I对口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113增殖的抑制作用,并探讨其可能机制。方法:采用MTT法检测0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/L的KYBNZ-1I分别作用24、48、72 h对Tca8113细胞增殖的抑制作用。分别采用流式细胞仪及Wes... 详细信息

目的:观察冬凌草提取物KYBNZ-1I对口腔鳞状细胞癌细胞Tca8113增殖的抑制作用,并探讨其可能机制。方法:采用MTT法检测0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mg/L的KYBNZ-1I分别作用24、48、72 h对Tca8113细胞增殖的抑制作用。分别采用流式细胞仪及Western blot检测0.0、1.0、2.0、3.0 mg/L的KYBNZ-1I作用48 h Tca8113细胞的周期分布、凋亡情况及CyclinD 1、CyclinB 1、Cdc-2蛋白的表达。结果:KYBNZ-1I对Tca8113细胞增殖有抑制作用,该作用呈剂量和时间依赖性(F剂量=133.991,F时间=22.526,P<0.05)。与对照组比较,1.0、2.0、3.0 mg/L的KYBNZ-1I作用48 h后G2/M期细胞增多,并可诱导细胞凋亡,呈剂量依赖性(F=108.465、212.353,P<0.05);随药物剂量的升高,CyclinD 1蛋白的表达水平下降(F=45.288,P<0.001),CyclinB 1、Cdc-2蛋白的表达水平升高(F=21.273、19.228,P<0.05)。结论:KYBNZ-1I对Tca8113细胞增殖有抑制作用,可将细胞阻滞于G2/M期并诱导细胞凋亡,其作用机制可能与KYBNZ-1I抑制CyclinD 1蛋白的表达、提高CyclinB 1和Cdc-2蛋白的表达有关。

关键词： KYBNZ-1I Tca8113细胞增殖凋亡细胞周期

左氧氟沙星辅助四联抗结核方案治疗结核性胸膜炎的疗效及对细胞因子水平的影响

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数理医药学杂志 2022年第9期35卷 1322-1325页

作者：朴军颜赵花王平平河南省传染病医院(郑州市第六人民医院) 郑州450000

目的:探究左氧氟沙星辅助四联抗结核方案治疗结核性胸膜炎的疗效以及对患者细胞因子水平的影响。方法:选取某院于2019年1月-2019年10月收治的结核性胸膜炎患者124例,采用随机数表法将其分为对照组和研究组各62例,对照组行常规与四联抗... 详细信息

目的:探究左氧氟沙星辅助四联抗结核方案治疗结核性胸膜炎的疗效以及对患者细胞因子水平的影响。方法:选取某院于2019年1月-2019年10月收治的结核性胸膜炎患者124例,采用随机数表法将其分为对照组和研究组各62例,对照组行常规与四联抗结核方案治疗,研究组在对照组的基础上辅以左氧氟沙星治疗1周。对比分析两组T淋巴细胞亚群(CD3^(+)、CD4^(+)及CD4^(+)/CD8^(+))和白介素-2(IL-2)、白介素-4(IL-4)、白介素-10(IL-10)以及干扰素-γ(IFN-γ)等细胞因子水平,记录胸膜厚度以及胸腔积液消失时间,并行疗效与安全性评价。结果:研究组治疗有效率为93.55%,高于对照组的80.65(P0.05)。结论:左氧氟沙星辅助四联抗结核方案治疗结核性胸膜炎,可有效平衡机体炎症反应及免疫功能,改善临床症状和因子水平,效果确切且安全。

关键词：结核性胸膜炎左氧氟沙星四联抗结核方案细胞因子

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基于知识图谱的动物性食品质量智能问答方法研究

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基于知识图谱的动物性食品质量智能问答方法研究

作者：颜士军山东农业大学

学位级别：硕士