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显微注射法培育转基因哺乳动物的研究进展

生物工程进展 1997年第1期17卷 42-47页

作者：郭勇倪和民朱裕鼎北京农学院牧医系 102206 中国农科院畜牧所 100094

加州大学医学院 Teh Ping Lin 博士早在1966年即利用小鼠受精卵原核显微注射技术,系统地研究了微注射不同量外源物质(石蜡油、牛γ-球蛋白溶液)对小鼠胚胎受体移植后的分裂、发育的影响程度,并预见该技术用于研究小鼠或其它种类哺乳动... 详细信息

加州大学医学院 Teh Ping Lin 博士早在1966年即利用小鼠受精卵原核显微注射技术,系统地研究了微注射不同量外源物质(石蜡油、牛γ-球蛋白溶液)对小鼠胚胎受体移植后的分裂、发育的影响程度,并预见该技术用于研究小鼠或其它种类哺乳动物胚胎分化及遗传效应具有潜在价值。直到1980年,随着分子生物学技术的迅速发展,Gordon 等人首先采用显微注射法育成带有人胸苷激酶基因这一外源 DNA 片断的'新型'转基因小鼠后。

关键词：遗传工程转基因哺乳动物显微注射法

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鉴定小鼠胚胎性别的染色体标本制作方法研究

动物学报 1994年第4期40卷 419-429页

作者：杨文胜朱裕鼎中国农业科学院畜牧研究所动物生物工程室北京100094

通过制备７２６４枚小鼠（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）胚胎的染色体标本并鉴定其性别的试验，获得了理想的实验参数。采用理想的实验参数，制作和鉴定了２４２枚小鼠晚期桑椹胚、囊胚和扩展囊胚的染色体标本及其性别。性别鉴定成功率分别... 详细信息

通过制备７２６４枚小鼠（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）胚胎的染色体标本并鉴定其性别的试验，获得了理想的实验参数。采用理想的实验参数，制作和鉴定了２４２枚小鼠晚期桑椹胚、囊胚和扩展囊胚的染色体标本及其性别。性别鉴定成功率分别为８０．４％、９９．０％和９４．５％。

关键词：小鼠胚胎性别鉴定标本制作染色体

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小鼠2-细胞胚胎电融合的研究

中国科学（B辑） 1992年第6期B卷 582-586页

作者：黄少华靳瞻群朱裕鼎中国农业科学院畜牧研究所动物生物工程室北京100094

本试验对影响小鼠2-细胞胚胎电融合诸因素进行了研究。胚胎细胞融合面与两电极相平行或相垂直;胚胎细胞在0.3 mol/L甘露醇液、0.25mol/L蔗糖液和杜氏磷酸缓冲液(PBS)中;当电脉冲的持续时间为80μs,电场强度为0,800,1000,1200,1400和1600... 详细信息

本试验对影响小鼠2-细胞胚胎电融合诸因素进行了研究。胚胎细胞融合面与两电极相平行或相垂直;胚胎细胞在0.3 mol/L甘露醇液、0.25mol/L蔗糖液和杜氏磷酸缓冲液(PBS)中;当电脉冲的持续时间为80μs,电场强度为0,800,1000,1200,1400和1600V/cm时以及当电脉冲的电场强度为1200V/cm,持续时间为10,20,40,80,160和320μs时,胚胎细胞融合效果的比较结果表明:融合面与两电极相平行,以0.3mol/L甘露醇液为融合液,电脉冲在1000—1200V/cm,20—160μs范围内的条件下,可获得满意的胚胎细胞融合率(88.6—94.5％),平均为92.2％。

关键词： 2-细胞胚胎电融合细胞融合

利用胚胎染色体分析法验证PCR鉴定小鼠胚胎性别技术的研究

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中国农业科学 1994年第6期27卷 73-77+93页

作者：杨文胜许罕华朱裕鼎中国农业科学院畜牧研究所动物生物工程室

本实验用小鼠切割胚制备了７３枚囊胚和扩展囊胚的染色体性别鉴定标本，将其中２６枚胚胎的活组织样品（含５－１０个细胞）进行聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，简称ＰＣＲ），以检测Ｙ染色体性别决定... 详细信息

本实验用小鼠切割胚制备了７３枚囊胚和扩展囊胚的染色体性别鉴定标本，将其中２６枚胚胎的活组织样品（含５－１０个细胞）进行聚合酶链反应（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃｔｉｏｎ，简称ＰＣＲ），以检测Ｙ染色体性别决定区（ＳｅｘｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｒｅｇｉｏｎｏｆｔｈｅＹ，简称ＳＲＹ）片段的存在，并鉴定胚胎的性别。２６个样品中有２４个的性别鉴定结果和染色体分析的结果相符，从而证明用ＰＣＲ鉴定小鼠胚胎性别技术的准确率为９２．３％（２４／２６）。

关键词：小鼠胚胎,染色体分析 PCR反应 SRY片段,性别鉴定

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小鼠早期胚胎性别鉴定的研究

中国实验动物学报 1993年第2期1卷 65-69页

作者：杨文胜朱裕鼎中国农业科学院畜牧研究所

用改进的细胞遗传学方法制备染色体标本,鉴定了小鼠晚期桑椹胚(晚桑)、囊胚和扩展囊胚(扩囊)的性别。在实验中,利用小鼠早期胚胎染色体标本制备的理想实验参数,鉴定了242枚小鼠晚桑、囊胚和扩囊的性别,性别鉴定成功率分别为80.4％、99.... 详细信息

用改进的细胞遗传学方法制备染色体标本,鉴定了小鼠晚期桑椹胚(晚桑)、囊胚和扩展囊胚(扩囊)的性别。在实验中,利用小鼠早期胚胎染色体标本制备的理想实验参数,鉴定了242枚小鼠晚桑、囊胚和扩囊的性别,性别鉴定成功率分别为80.4％、99.0％和94.5％。以细胞遗传学方法鉴定小鼠早期胚胎性别的结果为标准,得出用间接免疫荧光法和PCR(聚合酶链反应)扩增SRY(y染色体的性别决定期)部分序列法分别鉴定100枚和26枚小鼠胚胎性别的准确率相应地为74.0％和92.3％。

关键词：小鼠性别鉴定细胞遗传学鉴定定期囊胚间接免疫荧光早期胚胎链反应性别决定

核基质附着区(MAR)调控的人胰岛素样生长因子(hIGF-1)转基因兔的制备

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中国兽医学报 1997年第6期17卷 521-525页

作者：葛宝生朱裕鼎陈永福沈孝宙安民中国农业大学动物科技学院解放军农牧大学畜牧水产系中国农业科学院畜牧研究所中国科学院动物研究所

用ＥｃｏＲＩ＋ＨｉｎｄⅢ双酶解含鸡α－珠蛋白基因５′端核基质附着区（ＭＡＲ）、小鼠金属硫蛋白基因启动子（ＭＴ－１）和人胰岛素样生长因子－１（ｈＩＧＦ－１）基因的ｐＭＴＳＭＣＡＧ质粒，０．６％琼脂糖凝胶电泳，玻璃乳回收... 详细信息

用ＥｃｏＲＩ＋ＨｉｎｄⅢ双酶解含鸡α－珠蛋白基因５′端核基质附着区（ＭＡＲ）、小鼠金属硫蛋白基因启动子（ＭＴ－１）和人胰岛素样生长因子－１（ｈＩＧＦ－１）基因的ｐＭＴＳＭＣＡＧ质粒，０．６％琼脂糖凝胶电泳，玻璃乳回收纯化ＭＡＲ／ＭＴ／ｈＩＧＦ－１片段（３．９ｋｂ），用该片段制备转基因兔。利用水平显微注射系统注射１－细胞兔胚胎４６８枚，移植到３６只受体兔，有８只妊娠，共产下１９只活仔兔。采仔兔耳样提取基因组ＤＮＡ，应用ＰＣＲ技术分析其外源基因整合情况，获得８只阳性兔（显示出约６００ｂｐ外源ＤＮＡ条带）。再对８只阳性兔的ＰＣＲ产物进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，得到５只整合有ＭＡＲ／ＭＴ／ｈＩＧＦ－１外源基因的转基因兔，转基因整合率为２６．３％（５／１９）。用１只阳性转基因公兔（５０２号）繁殖了６窝，共获得４２只仔兔。采仔兔耳样提取基因组ＤＮＡ后，如上用ＰＣＲ分析和做Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交，Ｆ１代中有５只整合有ＭＡＲ／ＭＴ／ｈＩＧＦ－１融合基因。

关键词：核基质附着区人胰岛素样生长因子转基因兔

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牛体外受精胚胎无血清培养的研究

中国农业科学 1998年第3期31卷 79-85页

作者：高建明朱裕鼎刘云海敖红杨文胜中国农业科学院畜牧研究所北京农学院

以ＴＣＭ１９９为基础液，对常规ＩＶＭ／ＩＶＦ牛早期胚胎进行了无血清（１ｍｇ／ｍｌ，ＰＶＡ，聚乙烯醇）和有血清（２０％ＦＣＳ）培养的对比实验。通过在无血清培养液中加入９种添加物，初步筛选出了在５％ＣＯ２、９５％空气、３... 详细信息

以ＴＣＭ１９９为基础液，对常规ＩＶＭ／ＩＶＦ牛早期胚胎进行了无血清（１ｍｇ／ｍｌ，ＰＶＡ，聚乙烯醇）和有血清（２０％ＦＣＳ）培养的对比实验。通过在无血清培养液中加入９种添加物，初步筛选出了在５％ＣＯ２、９５％空气、３９℃、饱和湿度培养环境下的牛体外受精胚胎无血清培养体系为：ＴＣＭ１９９＋ＥＤＴＡ０．１ｍｍｏｌ／Ｌ＋Ｉ５μｇ／ｍｌ＋Ｔ５μｇ／ｍｌ＋Ｓ５ｎｇ／ｍｌ＋ＥＧＦ１０ｎｇ／ｍｌ＋牛磺酸７ｍｍｏｌ／Ｌ＋亚牛磺酸５ｍｍｏｌ／Ｌ＋ＰＶＡ１ｍｇ／ｍｌ＋青霉素１００ｉｕ／ｍｌ＋链霉素１００ｍｇ／ｍｌ。无血清培养与有血清培养囊胚率（７．１％对１４．３％）、扩展囊胚率（４．３％对７．１％），均无显著差异（Ｐ＞０．０５）。实验结果还表明，外源激素（雌激素和孕酮）对胚胎发育无促进作用；有血清组与无血清组胚胎的各发育阶段（桑椹胚、囊胚、扩展囊胚）细胞核数量无明显差异（Ｐ＞０．０５）。

关键词：牛体外受精胚胎无血清体外培养 PVA

超数排卵母牛血浆孕酮、雌二醇和促黄体素含量与卵巢反应及胚胎质量的关系

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畜牧与兽医 1991年第5期23卷 194-196页

作者：蔡正华朱裕鼎李金林严焱中国农科院畜牧研究所山东农业大学畜牧系

对9头FSH超排母牛血浆孕酮,雌二醇和促黄体素水平进行了研究。超排第1天到发情后第4天的血浆孕酮含量与排卵数的相关不显著,发情后第7天的孕酮含量与排卵数的相关极显著(r=0.849.P<0.01);发情前的雌二醇含量与排卵数有弱的正相关,发情后... 详细信息

对9头FSH超排母牛血浆孕酮,雌二醇和促黄体素水平进行了研究。超排第1天到发情后第4天的血浆孕酮含量与排卵数的相关不显著,发情后第7天的孕酮含量与排卵数的相关极显著(r=0.849.P<0.01);发情前的雌二醇含量与排卵数有弱的正相关,发情后第7天的雌二醇含量与排卵数有极显著的负相关(r=-0.809,P<0.01);促黄体素的含量与排卵数无关。另将供体母牛随机分为A、B两组,A组注射LRH—A_3,B组不注射,作对照。结果发现,两组间排卵数、采卵数,可用卵数和未排大卵泡数的差异在统计上均不显著。本试验结果表明,超排前血浆孕酮含量不适宜预测卵巢反应,而发情后第7天的孕酮含量是评定卵巢反应的一项合适的指标。超排时给予LRH-A_3的效果虽不十分显著,但有正效果,值得进一步研究。

关键词：牛母牛排卵孕酮雌二醇卵巢

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奶牛冷冻胚胎分割和分割后半胚冷冻技术

兽医大学学报 1989年第4期9卷 363-366页

作者：安铁洙蒋世娥何明伍朱裕鼎兽医大学解剖教研室中国农业科学院畜牧所

用简易分割方法,分割奶牛冷冻胚胎16枚,获得半胚32枚,分割成功率为100％(16/16),可移植半胚29枚,移植于16头受体牛,到第3个情期未返情者经直肠检查有6头妊娠,妊娠率为37.5％(6/16)。其中,在分割前或者分割后经恢复培养0.5～2h再移植的1... 详细信息

用简易分割方法,分割奶牛冷冻胚胎16枚,获得半胚32枚,分割成功率为100％(16/16),可移植半胚29枚,移植于16头受体牛,到第3个情期未返情者经直肠检查有6头妊娠,妊娠率为37.5％(6/16)。其中,在分割前或者分割后经恢复培养0.5～2h再移植的10头受体牛,5头妊娠;而未经恢复培养,分割后直接移植的6头受体牛中,只有1头妊娠。移植后3个月,直肠检查确定2头流产。已有1头受体黄牛生出1头奶牛牛犊(母)和1头受体奶牛产1头奶牛牛犊。其余的2头妊娠受体牛将于9月份产犊。此外,用简易分割法分割奶牛胚胎5枚,得到半胚10枚,裸半胚直接冷冻,解冻后回收可移植半胚5枚,移植于4头受体牛,无一头妊娠。结果表明,冷冻胚胎的分割半胚优于分割后冷冻半胚移植效果;冷冻胚胎分割前或者分割后恢复培养移植优于未经恢复培养而直接移植;简易分割法可应用于冷冻胚胎的分割。

关键词：奶牛胚胎分割技术半胚冷冻