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开展免疫学特色教学,全面提升学生素质

中国免疫学杂志 2015年第11期31卷 1549-1552页

作者：霍乃蕊姜俊兵朱芷葳杨莉榕刘志宗山西农业大学动物科技学院太谷030801 山西农业大学生命科学院太谷030801 山西农业大学食品科学与工程学院太谷030801

免疫学课程不仅在医学院校开设,也是农林院校动物医学、食品质量与安全、食品科学与工程、生物工程、生物技术等专业的基础课程。不同专业对免疫学教学的要求越来越高[1]。免疫学作为生命科学的前沿学科,发展极为迅速,新理论新技术不断... 详细信息

免疫学课程不仅在医学院校开设,也是农林院校动物医学、食品质量与安全、食品科学与工程、生物工程、生物技术等专业的基础课程。不同专业对免疫学教学的要求越来越高[1]。免疫学作为生命科学的前沿学科,发展极为迅速,新理论新技术不断涌现,研究成果日新月异[2]。

关键词：免疫学教学特色教学学生素质生物工程基础课程医学院校动物医学食品质量

牛下丘脑lncRNA SNHG3的筛选及其调控CART表达的功能鉴定

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生物工程学报 2024年第7期40卷 2162-2177页

作者：郝琴琴闫俊蓉任静成俊丽朱芷葳李鹏飞山西农业大学生命科学学院山西太谷030801

本研究旨在筛选调控牛下丘脑可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)表达的长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)小核仁RNA宿主基因3 (small nucleolar RNA host gene 3,SNHG3),明确lncRNA SNHG3调控牛下丘脑CART表达的作用机制。利用Star Base v2.0、NCBI、DIANA tools数据库预测分别与极显著抑制CART表达的miR-381、miR-491存在靶向关系的lncRNAs,分析其结合位点;选取3头健康成年西门塔尔母牛,提取其下丘脑组织总RNA,通过半定量RT-PCR技术鉴定所筛选的lncRNAs内源表达情况;双荧光素酶报告基因技术检测miR-381/491与lncRNAs间的靶向结合关系;构建lncRNAs、CART过表达载体及miR-381/491 mimics,分别转染至293T细胞,分析lncRNAs对CART基因表达的调控作用机制;利用动物活体实验对在细胞水平调控作用效果最强的lncRNA进行功能分析。lncRNA TUG1、SNHG3与miR-381存在结合位点,lncRNA H19、SNHG12、DANCR与miR-491存在结合位点,且lncRNA TUG1、SNHG3、H19、SNHG12、DANCR均在牛下丘脑中有表达;双荧光素酶检测结果显示,miR-381显著抑制TUG1-WT重组荧光质粒的相对荧光活性(P<0.05),极显著抑制SNHG3-WT重组荧光质粒的相对荧光活性(P<0.01);miR-491显著抑制DANCR-WT和H19-WT的荧光素酶活性表达(P<0.05),极显著抑制SNHG12-WT荧光素酶活性表达(P<0.01);在细胞水平,lncRNA SNHG3通过特异性结合miR-381极显著提高CART表达(P<0.001),lncRNA SNHG12通过特异性结合miR-491极显著提高CART表达(P<0.01),其中,lncRNA SNHG3调控CART表达效果最强;动物实验结果表明,lncRNA SNHG3通过特异性结合miR-381显著提高CART m RNA和蛋白表达。本研究证实了lncRNA SNHG3作为miR-381的竞争性内源RNA (competing endogenous RNAs,ce RNA),在转录和转录后水平均显著上调CART表达,为进一步研究牛下丘脑CART的分子网络调控机制奠定了基础。

关键词：牛卵泡发育下丘脑可卡因-苯丙胺调节转录肽(CART) 长链非编码RNA(lncRNAs) miR-381/491

全基因组重测序探究晋南牛优势性状的分子基础

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中国畜牧兽医 2024年第1期51卷 1-10页

作者：贾雪纯戎艳花朱芷葳李鹏飞山西农业大学生命科学学院太谷030801

【目的】探究晋南牛优势性状所基于的遗传基础,为后续晋南牛种质资源利用以及分子育种提供参考。【方法】采集12头健康的纯种晋南牛耳缘组织,提取基因组DNA进行全基因组重测序,将测序数据以及NCBI数据库12头红安格斯牛基因组数据比对到... 详细信息

【目的】探究晋南牛优势性状所基于的遗传基础,为后续晋南牛种质资源利用以及分子育种提供参考。【方法】采集12头健康的纯种晋南牛耳缘组织,提取基因组DNA进行全基因组重测序,将测序数据以及NCBI数据库12头红安格斯牛基因组数据比对到牛参考基因组(ARS-UCD1.2),检测群体SNPs位点,采用ANNOVAR软件对变异位点进行注释;对晋南牛与红安格斯牛变异基因进行韦恩分析,筛选晋南牛特异性变异基因并进行GO功能和KEGG通路富集分析,采用Cytoscape软件将显著富集的变异基因进行功能互作分析。【结果】晋南牛基因组DNA测序共获取clean reads 2 621 153 222条,Q30平均值达93.5%,碱基分布均匀且无明显偏向性,平均测序深度11.19×,覆盖率(≥4×)平均值为92.64%;检测到SNPs位点117 773 201个,注释外显子区域获得nonsynonymous、stopgain/stoploss SNPs共405 506个,覆盖于16 690个基因,筛选出晋南牛特异性变异基因5 289个。GO功能和KEGG通路分析表明,基因广泛富集于线粒体、核糖体、细胞器膜相关生物过程以及氧化磷酸化、细胞色素P450(CYP)代谢通路中;线粒体呼吸链蛋白(NDU)、细胞色素C氧化酶(COX)、葡萄糖醛酸基转移酶(UGT)广泛富集于氧化磷酸化途径;CYP1A1、CYP2E1、UGT1A6、UGT1A1基因富集于细胞色素P450相关的多条代谢通路;GSTM2、GSTT1、GSTT2、GSTK1基因富集于谷胱甘肽(GST)代谢途径与细胞色素P450相关路径;线粒体核糖体蛋白(MRP)、核糖体蛋白(RP)基因家族子网络富集于核糖体蛋白形成过程。【结论】晋南牛特异性变异基因与细胞能量代谢显著相关,推断其对晋南牛饲料高效转化率具有潜在遗传效应。本研究结果为筛选显著影响育肥性状的SNPs标记,繁育高饲料转化率的晋南牛提供方向。

关键词：晋南牛重测序 SNP 线粒体细胞能量代谢饲料转化率

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牛下丘脑CART转录后调控关键miRNA的筛选与鉴定

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生物工程学报 2024年第12期40卷 4557-4572页

作者：成俊丽闫俊蓉侯淑宁朱芷葳李鹏飞山西农业大学动物科学学院山西太谷030801 山西农业大学生命科学学院山西太谷030801

本研究旨在探究microRNA(miRNA)对牛下丘脑可卡因-苯丙胺调节转录肽(cocaineand amphetamine-regulated transcript peptide,CART)的转录后调控作用,并筛选调控关键miRNA。通过生物信息学分析来预测与牛CART 3'非翻译区(3'untranslated regions,3'UTR)结合的潜在miRNA,发现CART3'UTR存在7个miRNA结合位点,即bta-miR-377、bta-miR-331-3p、bta-miR-491、bta-miR-493、bta-miR-758、bta-miR-877和bta-miR-381结合位点;使用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)技术检测CART基因与靶miRNA在牛下丘脑内源性表达情况,发现它们均在牛下丘脑组织内表达;通过双荧光素酶报告实验验证CART 3'UTR与靶细胞miRNA结合位点,证明了CART 3'UTR与7个miRNA均具有靶向结合关系;通过细胞实验检测靶miRNA对外源性CART基因与CART蛋白表达的影响并筛选调控关键miRNA,结果表明,7个miRNA均能抑制外源CART信使RNA(messenger RNA,mRNA)的表达,其中以bta-miR-491的抑制作用最强,bta-miR-377、bta-miR-331-3p、bta-miR-491、bta-miR-493及bta-miR-381均能抑制外源性CART蛋白表达,其中以bta-miR-381的抑制作用最强;通过动物实验研究关键miRNA对下丘脑CART基因、CART蛋白表达及血清CART浓度的影响,结果表明,miR-491和miR-381可结合CART3'UTR位点,调节下丘脑CART内源性表达并影响其血清浓度。本研究的结果表明,miR-491和miR-381是调节牛下丘脑CART表达的主要miRNA,可通过调节CART内源性表达进而影响血清CART浓度。

关键词：牛下丘脑 CART miR-491/381 摄食

基于Illumina平台转录组测序筛选牛卵泡发育调控基因

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2019年第1期45卷 60-67页

作者：郝庆玲景炅婕朱芷葳吕丽华李鹏飞山西农业大学生命科学学院山西太谷030801 山西农业大学动物科技学院山西太谷030801

运用超声波监测技术,采集母牛发情期出现偏差前的第一大卵泡PDF1和出现偏差后的第二大卵泡ODF2,分别分离卵泡颗粒细胞(GCs),构建RNA文库,用Illumina2000测序;测序结果经数据库搜索和差异表达筛选,采用DAVID软件GO和KEGG pathway分析,经G... 详细信息

运用超声波监测技术,采集母牛发情期出现偏差前的第一大卵泡PDF1和出现偏差后的第二大卵泡ODF2,分别分离卵泡颗粒细胞(GCs),构建RNA文库,用Illumina2000测序;测序结果经数据库搜索和差异表达筛选,采用DAVID软件GO和KEGG pathway分析,经Genecards功能查询,筛选牛卵泡发育相关基因。结果表明:数据库搜索共获得35 325个基因,其中有意义的表达基因15 645个,从中筛选获得差异表达基因608个;GO分析表明,608个差异表达基因中参与生物过程的基因占60.46%,细胞组分的基因占20.08%,分子功能的基因占11.46%;KEGG pathway分析表明,608个差异表达基因通过9条信号通路参与牛卵泡发育调控(P<0.05),经Genecards功能筛选,共获得11个与牛卵泡发育密切相关的调控基因——SESN3、COL3A1、CCNE1、CAV1、CACNA1H、ITPR1、PIK3R3、MYC、PTGFR、CDK6、GAPDH,它们直接参与细胞增殖分化及信号通路调节。

关键词：牛卵泡颗粒细胞转录组调控基因

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牛卵泡AGTR2序列结构及表达特性分析

中国农业科学 2020年第7期53卷 1482-1490页

作者：朱芷葳侯淑宁郝庆玲景炅婕吕丽华李鹏飞山西农业大学生命科学学院山西农业大学动物科技学院

【目的】研究牛卵泡发育过程中关键调控蛋白CART的候选受体AGTR2的分子特征和立体结构,并结合AGTR2在不同生理状态牛卵泡的表达特性分析其功能。【方法】同期发情处理后,经B超声波连续监测(每12h一次)采集牛双侧卵巢,分离优势卵泡(domin... 详细信息

【目的】研究牛卵泡发育过程中关键调控蛋白CART的候选受体AGTR2的分子特征和立体结构,并结合AGTR2在不同生理状态牛卵泡的表达特性分析其功能。【方法】同期发情处理后,经B超声波连续监测(每12h一次)采集牛双侧卵巢,分离优势卵泡(dominant follicles, DF)和从属卵泡(subordinate follicles, SF);其中3头牛DF和SF分别分离颗粒细胞(granulosa cells, GCs),抽提总RNA后,经反转录、引物特异性扩增、胶回收及测序,获得AGTR2基因全CDS区;生物信息学方法对其序列结构、亲缘关系及立体结构进行分析;设计AGTR2和内参基因RPLP0 qRT-PCR引物,分析AGTR2在牛DF和SF的差异表达情况;另1头牛DF和SF经4%多聚甲醛固定后,设定阳性、阴性对照组和试验组,应用免疫组织化学技术对AGTR2进行表达和定位分析。【结果】AGTR2 CDS区全长1 089 bp,编码362个氨基酸;牛卵泡AGTR2氨基酸序列与NCBI数据库获得的其他24种动物对应的氨基酸序列BLAST分析表明,该序列与印度水牛序列相似性最高(99.4%),与其他动物序列相似性为92.0%—98.9%;立体结构和功能域分析表明,AGTR2立体结构中包含有7个横跨细胞膜的平行的α螺旋结构,符合G蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors, GPCRs)的典型特征;qRT-PCR分析结果表明AGTR2 mRNA在DF的表达量极显著高于SF(P<0.01),且差异表达倍数达7.47倍;免疫组织化学分析结果表明AGTR2在牛DF和SF颗粒层、膜层细胞均有表达,特异性显色强度表明AGTR2在SF膜层细胞表达量高于DF。【结论】AGTR2属于G蛋白偶联受体,符合神经肽CART受体的基本特征;本试验为进一步研究AGTR2在牛卵泡发育过程中调控信号通路和激素分泌的机理奠定基础,同时,对后期鉴定CART的受体、深入阐明CART调控牛卵泡发育的作用机理具有重要意义。

关键词：牛卵泡发育 CART G蛋白偶联受体 AGTR2

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基因打靶技术及其应用前景

现代农业科技 2009年第20期 368-369页

作者：乔德瑞朱芷葳晋中职业技术学院山西晋中030600 山西农业大学

基因打靶技术是一项新兴的分子生学技术,综述了基因打靶技术的原理、操作以及应用与研究进展。

关键词：基因打靶同源重组打靶载体打靶效率筛选系统

牛卵泡CMKLR1基因CDS区克隆及结构分析

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山西农业大学学报（自然科学版） 2018年第7期38卷 57-63页

作者：郝庆玲朱芷葳许冬梅李鹏飞山西农业大学生命科学学院山西太谷030801

[目的]旨在确定牛卵泡趋化因子样受体1(Chemokine-like receptor 1,CMKLR1)全CDS区序列结构并对其分子特征和三级结构进行预测。[方法]采集正常发育牛卵泡分离颗粒细胞(Granulosa cells,GCs),提取总RNA后反转录,特异性引物扩增、测序,... 详细信息

[目的]旨在确定牛卵泡趋化因子样受体1(Chemokine-like receptor 1,CMKLR1)全CDS区序列结构并对其分子特征和三级结构进行预测。[方法]采集正常发育牛卵泡分离颗粒细胞(Granulosa cells,GCs),提取总RNA后反转录,特异性引物扩增、测序,获得全CDS区后生物信息学方法进行结构分析和功能预测。[结果]CMKLR1CDS区全长1 089bp,编码362个氨基酸;蛋白质一级结构中分别包含4个O-糖基化位点、1个N-糖基化位点和50个磷酸化位点;三级结构和功能域分析表明,CMKLR1有7个横跨胞膜的平行的α螺旋结构,属于典型的G蛋白偶联受体。[结论]多糖基化、磷酸化位点的存在以及蛋白定位的特殊性,提示该蛋白功能较为复杂。该研究为后期深入探讨CMKLR1与牛卵泡发育的关系奠定了基础。

关键词：牛颗粒细胞 CMKLR1 生物信息学分析 G蛋白偶联受体

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鸡白痢沙门菌噬菌体的分离及电镜分析

中国家禽 2015年第8期37卷 55-57页

作者：邢颖朱芷葳张利环侯燕平范华冯爱梅李慧锋山西农业大学生命科学院山西太谷030801 山西农业大学实验教学中心山西太谷030801 汾阳市畜牧兽医局山西汾阳032200

通过以鸡白痢沙门菌为宿主菌,采用双层琼脂平板法从鸡场粪样中分离噬菌体。结果获得1株噬菌体,并对其进行形态学的鉴定,同时测定噬菌体对宿主的敏感性。经透射电镜观察发现该噬菌体无明显尾部,头部大致呈六角形,直径约为27.3 nm,其噬菌... 详细信息

通过以鸡白痢沙门菌为宿主菌,采用双层琼脂平板法从鸡场粪样中分离噬菌体。结果获得1株噬菌体,并对其进行形态学的鉴定,同时测定噬菌体对宿主的敏感性。经透射电镜观察发现该噬菌体无明显尾部,头部大致呈六角形,直径约为27.3 nm,其噬菌斑清晰透亮,周围无晕环,具有宽噬菌谱的特性,不仅可强裂解宿主菌,还可裂解1株大肠杆菌。获得的这株噬菌体可用于家禽生产中鸡白痢沙门菌感染的防治。

关键词：鸡沙门菌噬菌体广谱抗菌