检索结果-南通市图书馆

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

利用核磁共振技术检测植物细胞凋亡

Acta Botanica Sinica 2004年第6期46卷 711-718页

作者：张贵友朱瑞宇徐烨闫永彬戴尧仁清华大学生物科学与技术系北京100084 《植物学报》通讯作者

在细胞凋亡的研究中，通常以检测细胞核和细胞器的形态改变或生物化学特性变化为指标进行分析。已有的实验表明：动物细胞在凋亡过程中，细胞膜的脂质双分子层发生了一系列生物物理和生物化学改变，如膜电位的改变、磷脂酰丝氨酸由细胞... 详细信息

在细胞凋亡的研究中，通常以检测细胞核和细胞器的形态改变或生物化学特性变化为指标进行分析。已有的实验表明：动物细胞在凋亡过程中，细胞膜的脂质双分子层发生了一系列生物物理和生物化学改变，如膜电位的改变、磷脂酰丝氨酸由细胞膜内侧向外翻转、细胞膜微粘度的改变等，这些变化会导致细胞中亚甲基信号强度的增加。我们利用质子核磁共振光谱分析(1H-NMR)方法，首次发现用物理和化学方法诱导的烟草(Nicotiana tabacuum L．cv．BY-2)和胡萝卜(Daucus carota L．)细胞在凋亡过程中伴随有亚甲基信号强度的明显增加。在用烟酰胺处理的烟草细胞中，亚甲基信号强度的增加与DNA Ladder几乎同时出现，随诱导时间的延长，亚甲基信号强度也逐渐增大，在24h亚甲基信号强度增加约2倍。而这种特征在坏死的细胞中并不存在。说明亚甲基信号强度的增加是动、植物细胞凋亡过程中所具有的共同特征，1H-NMR技术提供了一种精确可靠的分析植物细胞凋亡的手段，同时由于它所具有的非侵害性的特点，可能在揭示细胞凋亡机制的研究中具有一定的意义。

关键词：细胞凋亡植物细胞质子核磁共振(1H-NMR) 膜脂

毕赤酵母X-33OCH1基因敲除菌株的构建及其表达低糖基化蛋白GM-CSF

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2011年第5期51卷 622-629页

作者：张大成许永利辛鑫朱瑞宇金坚江南大学生物工程学院无锡214122 江南大学医药学院无锡214122

【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰,产生高甘露糖型糖链,影响蛋白的活性,其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得一个对糖蛋白... 详细信息

【目的】酵母表达外源糖蛋白时会对蛋白进行过度N-糖基化修饰,产生高甘露糖型糖链,影响蛋白的活性,其中α-1,6-甘露糖转移酶(och1p)在这一过程中起着关键作用。通过敲除毕赤酵母X-33的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得一个对糖蛋白进行低糖基化修饰的毕赤酵母表达系统。【方法】采用双交换同源重组敲除目的基因的方法,首先敲除毕赤酵母X-33的URA3基因,获得一个尿嘧啶营养缺陷型的X-33(ura3-)菌株;然后用URA3基因作为选择标记,敲除X-33(ura3-)的α-1,6甘露糖转移酶(och1p)基因,获得OCH1基因敲除的X-33(och1-)菌株。用X-33(och1-)菌表达糖蛋白GM-CSF,分析GM-CSF蛋白糖链的变化。【结果】首次成功敲除了X-33的URA3和OCH1基因,与野生型相比,X-33(och1-)菌表达的GM-CSF蛋白过度糖基化修饰程度明显降低。【结论】X-33(och1-)菌株的构建提供了一个对蛋白低N-糖基化修饰的毕赤酵母表达系统,也为进一步的糖基化改造提供了良好的基础。

关键词： N-糖基化毕赤酵母X-33 基因敲除粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)

重组人血管内皮生长因子165b在毕赤酵母中的表达及纯化

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物制品学杂志 2013年第7期26卷 966-968,973页

作者：戴惠云朱瑞宇雷楗勇侯颖陈蕴金坚江南大学药学院江苏无锡214122

目的在毕赤酵母中表达重组人血管内皮生长因子(recombinant human vascular endothelial growth factor,rhVEGF)165b(rhVEGF-165b),并进行纯化。方法 PCR扩增hVEGF165b基因,插入毕赤酵母表达载体pPIC9k,构建重组表达质粒pPIC9k-VEGF165b,SalⅠ酶切线性化后,电击转化毕赤酵母GS115,甲醇诱导表达。表达产物经Ni-NTA sephrose镍柱纯化后,进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒pPIC9k-VEGF165b经双酶切和测序,证明构建正确;表达的rhVEGF165b蛋白相对分子质量约为23 000,纯化后纯度达90%以上,具有人VEGF的抗原性。结论成功在毕赤酵母中表达了rhVEGF165b蛋白,纯化的蛋白纯度较高,为进一步研究其生物学功能奠定了基础。

关键词：血管内皮生长因子165b 毕赤酵母表达纯化

人乳腺癌细胞及其耐药细胞转录因子表达的差异

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国药理学通报 2012年第9期28卷 1257-1262页

作者：陈淑娴朱瑞宇付强金坚江南大学医药学院细胞与分子药理研究室江苏无锡214122 江苏省原子医学研究所分子生物中心江苏无锡214063

目的研究阿霉素在不同药敏性肿瘤细胞中转录因子水平的差异,为肿瘤细胞多药耐药机制的研究提供参考。方法通过细胞活力检测野生型乳腺癌细胞(MCF7/W)和对阿霉素耐药的乳腺癌细胞(MCF7/ADM)的药敏性差异;荧光显微镜镜检阿霉素荧光分布;... 详细信息

目的研究阿霉素在不同药敏性肿瘤细胞中转录因子水平的差异,为肿瘤细胞多药耐药机制的研究提供参考。方法通过细胞活力检测野生型乳腺癌细胞(MCF7/W)和对阿霉素耐药的乳腺癌细胞(MCF7/ADM)的药敏性差异;荧光显微镜镜检阿霉素荧光分布;有机溶剂萃取法进行全细胞阿霉素吸收分析;细胞膜和核膜分离检测阿霉素的亚细胞定位;通过转录因子膜分析MCF7/W和MCF7/ADM细胞中转录因子表达差异。结果两株细胞的耐药IC50相差近10 000倍左右;利用镜检和定量分析,发现阿霉素在MCF7/W细胞中主要定位于胞核,而在MCF7/ADM细胞中则蓄积较少且主要定位于胞质;转录因子差异分析发现膜上总345个转录因子中,与野生型细胞相比,耐药细胞的106个转录因子表达上调,32个表达下调。结论阿霉素在耐药细胞与野生型细胞中转录因子表达的差异,可能是干扰阿霉素入核,阻止其功能发挥的基础。

关键词： MCF-7/ADM 阿霉素 IC50 转录因子耐药细胞亚细胞定位

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

软岩堆石混凝土筑坝工程质量控制与检测研究

四川水利 2023年第2期44卷 25-29页

作者：张涛朱瑞宇王中陈昊周虎陈宇合江县水务局四川合江646299 四川省水利厅成都610017 四川省水利科学研究院成都610071 清华大学北京100084

堆石混凝土由自密实性能混凝土(胶结材料)和堆石(骨料)两部分组成。堆石混凝土施工技术作为一种创新性的大体积混凝土施工技术,利用了大量堆石骨料,能够充分利用初级开采的石料或开挖料中的大块石,最大限度地降低胶凝材料的用量。具有... 详细信息

堆石混凝土由自密实性能混凝土(胶结材料)和堆石(骨料)两部分组成。堆石混凝土施工技术作为一种创新性的大体积混凝土施工技术,利用了大量堆石骨料,能够充分利用初级开采的石料或开挖料中的大块石,最大限度地降低胶凝材料的用量。具有环保低碳、水化热低、工艺简便、造价低廉、施工速度快等特点。堆石混凝土的密实度和强度一直是混凝土工程质量检测的重要指标之一。文章依托仪陇县七一水库工程实践案例,详细介绍了自密实混凝土原材料质量控制的标准,堆石混凝土质量检测内容和方法,为该项技术推广应用总结提炼了成功经验。堆石混凝土的质量控制和检测分别对自密实混凝土原材料,自密实混凝土性能参数、强度指标加以控制和检测,同时对堆石骨料原材料、堆石混凝土密实度、强度开展控制和检测,其结果表明从自密实性能混凝土(胶结材料)和堆石(骨料)两部分进行质量控制和检测是可以保证堆石混凝土质量合格的。

关键词：软岩堆石混凝土自密实混凝土质量控制质量检测

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

双缺陷型毕赤酵母X33突变株的诱变育种

食品与生物技术学报 2016年第2期35卷 129-135页

作者：顾鹏飞李萌朱瑞宇金坚江南大学工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 江南大学药学院江苏无锡214122

为促进Pichia pastoris X33α-1,6-甘露糖转移酶(OCH1p)与α-1,3-甘露糖转移酶(ALG3p)双突变菌株(och1 alg3 m X33)作为蛋白质表达宿主菌的应用,为双突变菌株进一步糖基化的研究奠定基础。作者通过紫外诱变和常压室温等离子体(ARTP)诱... 详细信息

为促进Pichia pastoris X33α-1,6-甘露糖转移酶(OCH1p)与α-1,3-甘露糖转移酶(ALG3p)双突变菌株(och1 alg3 m X33)作为蛋白质表达宿主菌的应用,为双突变菌株进一步糖基化的研究奠定基础。作者通过紫外诱变和常压室温等离子体(ARTP)诱变的方法来提高双突变菌株的生长速度以及适应能力。经过4轮筛选发现了生长速度提高15%、温度敏感性有所降低、细胞存活率有所提高的双突变菌株。

关键词：糖基化诱变生长表型甘露糖转移酶

转录激活因子1(ATF1)内部核糖体进入位点的鉴定及活性分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物化学与分子生物学报 2015年第9期31卷 937-943页

作者：李琪高文青朱瑞宇金坚江南大学药学院分子药理实验室江苏无锡214122

蛋白质翻译起始通常有两种机制,一是依赖帽结构的翻译,另一种是依赖5'非翻译区的内部核糖体进入位点(IRES).在后一种方式中,在某些IRES反式作用因子,如La蛋白、多聚嘧啶串结合蛋白1等的参与下,直接招募核糖体小亚基到mRNA的翻译起始位点... 详细信息

蛋白质翻译起始通常有两种机制,一是依赖帽结构的翻译,另一种是依赖5'非翻译区的内部核糖体进入位点(IRES).在后一种方式中,在某些IRES反式作用因子,如La蛋白、多聚嘧啶串结合蛋白1等的参与下,直接招募核糖体小亚基到mRNA的翻译起始位点,启始翻译.研究发现,参与细胞生长、分化、细胞周期进程、凋亡和压力调控的相关蛋白中通常含有IRES元件.基于功能,我们提出假说:转录激活因子1(ATF1)的5'-UTR可能具有IRES活性.为验证假说,首先构建了含全长ATF1 5'-UTR的双荧光素酶报告质粒;质粒转染结合报告酶活性分析显示,ATF1 5'-UTR在Bel7402、HCT-8和HEK293细胞中表现出不同的IRES活性;而此IRES活性与5'-UTR中的隐藏启动子无关.同时还发现,ATF1 5'-UTR在NIH3T3细胞中却没有IRES活性.与此结果相一致,Western印迹检测ATF1在这几种细胞系中的表达.结果显示,Bel7402、HCT-8和HEK293中ATF1蛋白质表达水平较高,而在NIH3T3中却极低.ATF1 5'-UTR的系列5'-删除突变及报告酶分析证明,ATF1 5'-UTR的完整性对其IRES活性大小发挥重要作用;其中5'端的204 bp序列对其IRES活性贡献较大.RNA-蛋白免疫共沉淀实验揭示,ATF1 5'-UTR可与La和PTBP1蛋白结合;抑制La和PTBP1蛋白质的表达,并可减低HEK293细胞中ATF1蛋白质表达水平.这些结果提示,La和PTBP1蛋白(两种ITAFs)为ATF1 5'-UTR发挥IRES活性所必需.总之,上述结果证明,ATF1 5'-UTR具有IRES活性,其活性发挥依赖与La和PTBP1蛋白的结合.上述发现为进一步研究La和PTBP1表达及亚细胞定位对ATF1 IRES调控机制的影响奠定了基础.

关键词：转录激活因子1(ATF1) 5'-非编码区(5'-UTR) 内部核糖体进入位点(IRES) IRES反式作用因子(ITAFs)

基于新型地震烈度快速评估方法的震后人员压埋估计

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

地球科学 2024年第2期49卷 437-450页

作者：周中红孙艳萍朱瑞甘肃省地震局甘肃兰州730000

破坏性地震发生后,对震后压埋人员进行有效估计,是科学、有序应急处置和救援的基础.地震烈度快速评估结果是震后人员压埋估计中不可或缺的一类基础数据,对人员压埋数量及分布估计的合理性、准确性有重要作用.以一种新型的基于反投影能... 详细信息

破坏性地震发生后,对震后压埋人员进行有效估计,是科学、有序应急处置和救援的基础.地震烈度快速评估结果是震后人员压埋估计中不可或缺的一类基础数据,对人员压埋数量及分布估计的合理性、准确性有重要作用.以一种新型的基于反投影能量点结合断层最短距离地震动衰减方法、以及目前使用最为广泛的传统椭圆衰减模型方法的烈度快速评估结果为基础,对甘肃及周边近年来发生的3次7级以上地震进行震后人员压埋进行估计,并与实际灾情进行对比.相较于传统椭圆地震烈度衰减模型烈度快速评估方法,基于反投影能量点结合地震动参数衰减模型的烈度快速评估能更为准确、精细地确定地震重灾区、极重灾区的分布;对震后人员压埋总数、压埋重点区域判定的合理性和准确度改进效果明显,该新型烈度快速评估方法在7级以上破坏性大地震人员压埋估计中显示了良好的适用性,在评估时效上也可满足地震应急指挥决策、应急救援工作的实际需求.

关键词：地震烈度快速评估震后人员压埋地震应急

脑心肌炎病毒(EMCV)的内部核糖体进入位点活性的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中国生物工程杂志 2011年第2期31卷 12-17页

作者：蔡燕飞朱瑞宇陈蕴金坚江南大学医药学院药物设计与分子药理学实验室无锡214122

脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)的内部核糖体进入位点(internal ribosomal entry site,IRES)已被广泛运用于蛋白的表达中,如应用于Clontech公司推出的pIRES2质粒对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的表达。但是由于对EMCV的IRES了解还不够深入而在利用EMCV的IRES进行基因表达过程中经常会遇到问题,很有必要对其进行更深入的研究。以红绿色荧光蛋白基因作为报告基因,通过分子克隆、荧光显微镜、荧光分光光度计、Western blot等分子细胞生物学手段,对EMCV的IRES末端序列与其活性的关系进行了深入研究。研究发现EMCV的IRES末端序列对其IRES的活性影响极大,而人们常用的报告基因EGFP本身也可能存在IRES。

关键词：脑心肌炎病毒内部核糖体进入位点增强型绿色荧光蛋白