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miR-328在小鼠胚胎干细胞体外分化胰岛素分泌细胞过程中的调控作用

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中华医学杂志 2019年第36期99卷 2848-2854页

作者：朱沙俊王尧王雷钱海鑫苏州大学附属第一医院普通外科苏州215006 南通大学附属医院普通外科南通216002

目的探讨miR-328在小鼠胚胎干细胞体外分化胰岛素分泌细胞过程中的调控作用及分子机制.方法小鼠胚胎干细胞系mESCs-Nanog-GFP经条件培养基诱导后,分为阴性对照组、转染miR-328激动剂组、转染miR-328拮抗剂组和转染转化生长因子β2(TGF-... 详细信息

目的探讨miR-328在小鼠胚胎干细胞体外分化胰岛素分泌细胞过程中的调控作用及分子机制.方法小鼠胚胎干细胞系mESCs-Nanog-GFP经条件培养基诱导后,分为阴性对照组、转染miR-328激动剂组、转染miR-328拮抗剂组和转染转化生长因子β2(TGF-β2)小干扰RNA组.通过实时荧光定量PCR(qPCR)、免疫荧光鉴定胰岛素分泌细胞功能;qPCR、免疫荧光及酶联免疫吸附(ELISA)检测多系前体细胞过表达及抑制miR-328对胰岛素分泌细胞分化的影响;生信分析预测miR-328与TGF-β2结合位点,双荧光素酶报告基因及Western印迹法验证两者调控关系.结果miR-328激动剂可成功转染小鼠胚胎干细胞,转染效率为70%~80%,使胰岛功能相关基因表达均有不同程度下降,且葡萄糖刺激胰岛素释放量减少,胰岛素、NK6同源盒1蛋白表达下降(均P<0.05);转染miR-328拮抗剂上调胰岛功能相关基因及转录因子表达(均P<0.05).双荧光素酶报告基因实验发现miR-328可结合至TGF-β2的3'端非编码区(3'-UTR),Western印迹检测显示转染miR-328拮抗剂组TGF-β2蛋白相对表达量1.00±0.01,共转染miR-328拮抗剂组和TGF-β2小干扰RNA组蛋白相对表达量0.80±0.03,转染TGF-β2小干扰RNA组蛋白相对表达量0.20±0.01.敲降TGF-β2下调胰腺早期转录因子表达(P<0.05),抑制Pdx1+细胞分化.结论miR-328能够靶向TGF-β2抑制小鼠胚胎干细胞向胰岛素分泌细胞的分化,为糖尿病干细胞治疗提供了新的调控途径.

关键词：胚胎干细胞胰岛素分泌细胞细胞分化微RNAs

脾肾分流术与断流术治疗门静脉高压症疗效的对比研究

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中华普通外科杂志 2022年第12期37卷 903-906页

作者：朱必文王东芝黄䶮郭青松朱沙俊陆玉华王志伟南通大学医学院南通226001 南通大学附属医院肝胆胰外科南通226001

目的比较脾肾分流术和传统断流术治疗门静脉高压症的临床疗效。方法回顾性分析2012年1月至2021年11月于南通大学附属医院行脾肾分流术和传统断流术109例乙肝肝硬化门静脉高压症患者的临床资料。结果分流组手术时间长于断流组,差异有统... 详细信息

目的比较脾肾分流术和传统断流术治疗门静脉高压症的临床疗效。方法回顾性分析2012年1月至2021年11月于南通大学附属医院行脾肾分流术和传统断流术109例乙肝肝硬化门静脉高压症患者的临床资料。结果分流组手术时间长于断流组,差异有统计学意义[(208±43)min比(172±53)min,t=-3.677,P0.05;(21±6)d比(21±8)d,t=-0.403,P>0.05]。术后两组中重度腹水、腹腔出血和肝性脑病发生率差异均无统计学意义(χ^(2)=0.973、0.830、0.095,均P>0.05)。分流组术后再出血率低于断流组,差异有统计学意义(5%比28%,χ^(2)=5.280,P<0.05)。手术方式是再出血的独立预测因素。分流组1、2、3、5年的累积生存率分别为95%、94%、91%、88%,断流组分别为95%、88%、85%、73%。再出血是影响生存率的独立危险因素。结论脾肾分流术比传统断流术在降低门静脉高压症患者术后再出血率和提高生存率方面有明显的优势。

关键词：高血压,门静脉脾肾分流术,外科治疗效果断流术

保留幽门胰十二指肠切除术与经典胰十二指肠切除术临床疗效对比研究

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交通医学 2023年第2期37卷 166-168,170页

作者：朱东辉王蔺周锐陆玉华朱沙俊黄龑王志伟郭青松南通大学附属医院普外科江苏226001

目的:比较保留幽门胰十二指肠切除术(PPPD术)与经典胰十二指肠切除术(Whipple术)的临床疗效。方法:回顾性分析接受胰十二指肠切除术177例恶性肿瘤患者的临床资料,根据手术方式不同分为PPPD组67例和Whipple组110例。比较两组围手术期相... 详细信息

目的:比较保留幽门胰十二指肠切除术(PPPD术)与经典胰十二指肠切除术(Whipple术)的临床疗效。方法:回顾性分析接受胰十二指肠切除术177例恶性肿瘤患者的临床资料,根据手术方式不同分为PPPD组67例和Whipple组110例。比较两组围手术期相关指标,术后并发症和术后生存时间。结果:PPPD组手术时间186.85±8.51 min、术中出血量328.10±15.63 mL,少于Whipple组的225.07±14.87 min、437.14±25.62 mL,PPPD组胃管留置时间11.15±3.48 d,长于Whipple组8.75±3.78 d,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:与经典胰十二指肠切除术(Whipple术)比较,保留幽门胰十二指肠切除术(PPPD术)手术时间短,术中出血量少,术后出血、碱性反流性食管炎及倾倒综合征发生率低,患者生存质量更高。

关键词：保留幽门胰十二指肠切除术标准胰十二指肠切除术围手术期并发症生存时间

胰腺癌胰十二指肠切除术78例多因素分析评估预后

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交通医学 2013年第4期27卷 374-376页

作者：周昱辰朱沙俊南京医科大学江苏221008 南通大学附属医院普外科

目的:分析胰腺癌患者术后生存率,术后生存期比较,探讨影响预后的6个相关因素。方法:分析对患者预后产生影响的非重复特征性临床因素:性别、年龄、血清胆红素水平、血清白蛋白、术前黄疸持续时间、术中出血量、淋巴结转移、病理学类型、... 详细信息

目的:分析胰腺癌患者术后生存率,术后生存期比较,探讨影响预后的6个相关因素。方法:分析对患者预后产生影响的非重复特征性临床因素:性别、年龄、血清胆红素水平、血清白蛋白、术前黄疸持续时间、术中出血量、淋巴结转移、病理学类型、肿瘤浸润深度、肿瘤大小、CA19-9水平与患者生存情况。结果:PD术后中位生存时间为15.3个月,1、2、3年生存率分别为58.7%,44.2%和19.8%。不同的血清胆红素水平、术前黄疸持续时间、术中出血量、肿瘤血管神经侵润、淋巴结转移、CA19-9水平等6个独立因素的1年生存率比较的差异有统计学意义(P<0.05),是影响胰腺癌预后的因素。其中肿瘤血管神经侵犯、CA19-9、淋巴结转移依次是影响胰腺癌手术预后的前3位因素。结论:胆红素水平低、黄疸持续时间短、术中输血量少、无肿瘤血管神经浸润、无淋巴结转移、CA19-9水平低者预后较好。

关键词：胰腺癌胰十二指肠切除术淋巴结转移血管神经侵犯梗阻性黄疸生存率中位生存期

小鼠骨髓间充质干细胞、骨髓单核细胞和胚胎成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞的效率比较

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第二军医大学学报 2013年第12期34卷 1304-1311页

作者：王尧王雷陆玉华范向军朱铭岩朱沙俊王志伟南通大学附属医院普通外科南通226001

目的比较小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)、小鼠骨髓单核细胞(BM-MNCs)和小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)重编程为诱导性多能干细胞(iPS细胞)的效率。方法用慢病毒LV-ef1a-mOct4-IRES-EGFP、LV-ef1amSox2-IRES-EGFP、LV-ef1a-mKlf4-IRES-EGFP和LV-ef1a-mc-Myc-IRES-EGFP感染BMSCs、BMMNCs和MEFs,通过计算碱性磷酸酶染色阳性克隆数比较这3种细胞重编程为iPS细胞的效率。用胚胎干细胞表面标记检测、胚胎干细胞内源基因检测、拟胚体形成实验和畸胎瘤形成实验验证重编程获得的iPS细胞的多能性。结果起源于小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs的3种iPS细胞均能形成边缘光整的致密克隆,可表达干性基因Nanog、Rex-1、SSEA-1,并能在体内外分化为三胚层组织。但是BMSCs来源的碱性磷酸酶阳性克隆数低于BM-MNCs和MEFs来源的克隆数。结论小鼠BMSCs、BM-MNCs及MEFs均可重编程为iPS细胞,但BMSCs重编程为iPS细胞的效率低于BM-MNCs和MEFs。

关键词：诱导性多潜能干细胞重编程效率骨髓间充质干细胞骨髓单核细胞小鼠胚胎成纤维细胞

达芬奇机器人辅助保留脾脏的胰体、胰尾肿瘤切除术一例

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中华腔镜外科杂志（电子版） 2022年第1期15卷 62-64页

作者：王志伟陈启阳郭青松黄 朱沙俊陆玉华南通大学附属医院肝胆胰腺外科 226001

目的探讨达芬奇机器人辅助下保留脾脏的胰体、胰尾肿瘤切除术的临床疗效及优势。方法2020年5月,南通大学附属医院收治1例胰体、胰尾肿瘤患者,27岁,女性,MRI平扫+增强(上腹部)(1.5 T)检查提示:胰尾部占位,考虑神经内分泌肿瘤可能。在全... 详细信息

目的探讨达芬奇机器人辅助下保留脾脏的胰体、胰尾肿瘤切除术的临床疗效及优势。方法2020年5月,南通大学附属医院收治1例胰体、胰尾肿瘤患者,27岁,女性,MRI平扫+增强(上腹部)(1.5 T)检查提示:胰尾部占位,考虑神经内分泌肿瘤可能。在全身麻醉下使用达芬奇机器人(da Vinci Xi,P8)辅助保留脾脏的胰体、胰尾肿瘤切除术。术后评估患者的术中出血量、切口愈合、手术并发症、患者术后恢复及满意度情况。结果患者术中出血量少,术后恢复好,无腹腔出血、感染,脾脏顺利保留。术后随访1年,患者未出现手术并发症,患者满意度高。结论达芬奇机器人辅助保留脾脏的胰体、胰尾肿瘤切除术具有较传统腹腔镜手术更加高清的手术视野、安全且精准的手术操作,保留脾脏安全,可行度比传统腹腔镜手术更有优势。

关键词：机器人腹腔镜胰体、胰尾肿瘤保留脾脏

肝脏脱细胞支架与MIN6细胞三维共培养移植治疗Ⅰ型糖尿病实验研究

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交通医学 2015年第4期29卷 319-322,F0002页

作者：朱沙俊王雷南通大学附属医院普外科江苏226001

目的:通过体外制备小鼠肝脏脱细胞支架并种植MIN6细胞,观测其定植生长并检测其功效发挥,为体外构建胰岛素分泌器官提供理论基础。方法:灌注法制备全肝脏脱细胞支架,将小鼠MIN6细胞种植入支架中于三维培养体系中培养,通过苏木精-伊红染... 详细信息

目的:通过体外制备小鼠肝脏脱细胞支架并种植MIN6细胞,观测其定植生长并检测其功效发挥,为体外构建胰岛素分泌器官提供理论基础。方法:灌注法制备全肝脏脱细胞支架,将小鼠MIN6细胞种植入支架中于三维培养体系中培养,通过苏木精-伊红染色、胰岛素免疫组化分析及荧光定量聚合酶链反应检测其功效。检测MIN6细胞功能基因Insulin表达。将种植MIN6细胞的肝脏脱细胞支架移植入糖尿病小鼠体内,监测其功能发挥并初步评估其疗效。结果:体外成功制备肝脏脱细胞支架,在保留其原有脉管网络基础上,未见组织残留。HE染色显示肝脏脱细胞支架内没有细胞核染,且脉管结构保存完整。扫描电镜未见细胞结构,支架保存完整胶原纤维形态。MIN6细胞在脱细胞支架中三维培养后,检测胰岛素基因表达水平,结果和平面培养相比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。将种植MIN6细胞的肝脏脱细胞支架移植入糖尿病小鼠体内能够较好的发挥降血糖作用。结论:通过将MIN6细胞种植入肝脏脱细胞支架并三维培养,可构建体外胰岛素分泌体系。

关键词： Ⅰ型糖尿病肝脏脱细胞支架移植免疫组化染色法实时定量聚合酶链反应

小鼠胰岛与肝脏脱细胞支架三维共培养的实验研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2015年第12期35卷 1685-1690页

作者：朱沙俊徐天鑫王雷钱海鑫王志伟南通大学附属医院普外科江苏南通226001 苏州大学附属第一医院普外科江苏苏州215001

目的 :观测原代小鼠胰岛在小鼠肝脏脱细胞支架上的生长及功能,探讨组织工程学治疗糖尿病的新方法。方法 :运用灌注法制备结构完整的全肝脏脱细胞支架并检测,运用胶原酶P灌注消化法获取小鼠胰岛细胞并行结构和功能完整性分析;将分离纯化... 详细信息

目的 :观测原代小鼠胰岛在小鼠肝脏脱细胞支架上的生长及功能,探讨组织工程学治疗糖尿病的新方法。方法 :运用灌注法制备结构完整的全肝脏脱细胞支架并检测,运用胶原酶P灌注消化法获取小鼠胰岛细胞并行结构和功能完整性分析;将分离纯化的原代小鼠胰岛经门静脉灌入全肝脏脱细胞支架,在三维培养体系培养后进行相关检测。结果:肝脏脱细胞支架检测未见细胞结构,胶原结构保存完整。支架内剩余DNA定量检测结果为(38±11)ng/mg ds DNA,生物相容性良好。双硫腙(dithizone,DTZ)染色胰岛呈现特异性猩红色,葡萄糖刺激实验提示在高糖组中培养的原代小鼠胰岛胰岛素分泌功能明显高于低糖组,差异具有统计学意义(P<0.01);将胰岛移植入肝脏脱细胞支架培养5 d后胰岛定植,且胰岛素基因表达显示脱细胞支架三维培养中胰岛素表达水平与平面培养相比,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:肝脏脱细胞支架三维培养体系中的胰岛细胞比传统平面培养具有更佳的细胞活力及更有效的胰岛素分泌功能。

关键词：糖尿病脱细胞生物支架胰岛移植

三维立体培养MIN-6β细胞调节Ⅰ型糖尿病小鼠血糖水平的实验研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2016年第2期36卷 176-181页

作者：朱沙俊袁骁祺王雷王志伟钱海鑫南通大学附属医院普外科江苏南通226001 苏州大学附属第一医院普外科江苏苏州215001 上海市第十人民医院普外科上海200070

目的:探讨MIN-6β细胞经人工合成丝素-Ⅳ型胶原支架三维立体培养后用于移植治疗Ⅰ型糖尿病的新方法。方法 :冷冻干燥法制备丝素-Ⅳ型胶原支架并检测,将MIN-6β细胞种植于丝素-Ⅳ型胶原支架中三维培养,观察细胞定植及细胞活力。将种植有M... 详细信息

目的:探讨MIN-6β细胞经人工合成丝素-Ⅳ型胶原支架三维立体培养后用于移植治疗Ⅰ型糖尿病的新方法。方法 :冷冻干燥法制备丝素-Ⅳ型胶原支架并检测,将MIN-6β细胞种植于丝素-Ⅳ型胶原支架中三维培养,观察细胞定植及细胞活力。将种植有MIN-6β细胞复合培养的丝素-Ⅳ型胶原支架移植入Ⅰ型糖尿病小鼠腹腔,监测对比其血糖变化情况和胰岛素的表达。结果:丝素-Ⅳ型胶原支架为不规则片层样与多孔相结合的结构,各支架三维培养组效果均明显优于传统二维平面培养组,差异存在统计学意义(P<0.05),各支架复合培养组移植入糖尿病动物体内后的降血糖效果与作用时间均要优于无支架组,差异存在统计学意义(P<0.05)。移植物中MIN-6β细胞胞浆内存在有特异性棕黄色受染区域,证实存在胰岛素表达。结论:丝素-Ⅳ型胶原支架有良好的生物相容性且有利于MIN-6β细胞的生长定植及功能表达。

关键词：丝素蛋白 Ⅳ型胶原糖尿病胰岛素