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抗慢性粒细胞白血病细胞人源化单链抗体—免疫毒素的制备及其生物活性的鉴定

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抗慢性粒细胞白血病细胞人源化单链抗体—免疫毒素的制备及其生物...

作者：朱小影重庆医科大学

学位级别：硕士

目的慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia, CML）是一种造血祖细胞恶性增殖性血液系统肿瘤，目前耐药和复发仍然是CML的两大难题。近年来，随着DNA重组技术的发展，免疫毒素尤其是重组免疫毒素(recombinant immunotoxin, r... 详细信息

目的慢性粒细胞白血病（chronic myelogenous leukemia, CML）是一种造血祖细胞恶性增殖性血液系统肿瘤，目前耐药和复发仍然是CML的两大难题。近年来，随着DNA重组技术的发展，免疫毒素尤其是重组免疫毒素(recombinant immunotoxin, rIT)迅猛发展，已经成为肿瘤免疫治疗研究中的重点和热点。到目前为止，国内外已经有许多种免疫毒素试剂进入临床试验。在本研究中，我们制备了抗CML细胞人源化单链抗体（humanized single chain variable region fragment,hscFv)，并将其与截短了的假单胞菌外毒素基因（truncated pseudomonasexotoxin A, ETA′)融合来制备免疫毒素，对其进行了原核表达、纯化，并研究了其生物学活性，旨在为CML的靶向治疗提供一种高效的选择性的方法。方法1.将抗CML细胞hscFv片段插入到pET32a(+)原核表达载体中。将构建正确的pET32a-hscFv重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株，在IPTG诱导下表达融合蛋白，表达产物用SDS-PAGE和WesternBlot进行鉴定;蛋白纯化后，采用细胞膜酶联免疫吸附试验（cellmembrane-enzyme linked immunosorbent asssay, CM-ELISA)和流式细胞术（flow cytometer, FCM)鉴定hscFv融合蛋白的抗原结合特性。2.将hscFv与ETA′基因通过酶切与连接反应，在pWW20载体上构建hscFv-ETA'免疫毒素基因;再将其亚克隆入pET32a(+)中，转化BL21（DH3）宿主菌，IPTG诱导融合蛋白表达;SDS-PAGE和WesternBlot实验观察目的蛋白的表达情况并对纯化后的目的蛋白进行鉴定。CM-ELISA和FCM鉴定融合蛋白的抗原结合特性。通过细胞增殖实验（MTT)、细胞凋亡实验等来探讨hscFv-ETA'融合蛋白对CML细胞株和患者细胞的靶向杀伤作用。结果1.本研究成功构建了hscFv的重组原核表达载体;该蛋白在25℃、l mM IPTG诱导4h的条件下获得高效、可溶性的表达;经纯化获得了高纯度的hscFv融合蛋白;CM-ELISA、FCM实验证实该蛋白具有CML细胞表面抗原结合的特性。2.成功构建了hscFv-ETA'重组原核表达载体;hscFv-ETA'融合蛋白在23℃、l mM IPTG诱导6h的条件下获得可溶性表达;经Ni2+-NTA亲和纯化获得了hscFv-ETA'融合蛋白;经CM-ELISA、FCM等实验证实了该融合蛋白具有CML细胞表面抗原结合的特性;凋亡实验证明了该融合蛋白对CML细胞株或者患者细胞具有明显的靶向杀伤能力。结论本研究成功制备、表达了hscFv蛋白和hscFv-ETA'重组免疫毒素，通过一系列的试验证明了制备的hscFv和hscFv-ETA'具有与CML细胞结合的活性并且hscFv-ETA'能特异性地靶向杀伤CML细胞，为慢性粒细胞白血病的靶向治疗提供了新的免疫学方法。

关键词：慢性粒细胞白血病假单胞菌外毒素免疫毒素原核表达

阻塞性睡眠呼吸暂停患者脑白质及认知功能损害的扩散磁共振成像研究进展

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磁共振成像 2024年第1期15卷 199-204,228页

作者：周天宇朱小影张清大连大学附属中山医院放射科大连116001

阻塞性睡眠呼吸暂停(obstructive sleep apnea, OSA)是一种全球性的睡眠呼吸障碍疾病,特征是间歇性低氧血症、高碳酸血症、微觉醒和睡眠碎片化,会导致大脑在结构和功能方面发生改变,现已有很多研究表明OSA是认知功能损害的重要因素。扩... 详细信息

阻塞性睡眠呼吸暂停(obstructive sleep apnea, OSA)是一种全球性的睡眠呼吸障碍疾病,特征是间歇性低氧血症、高碳酸血症、微觉醒和睡眠碎片化,会导致大脑在结构和功能方面发生改变,现已有很多研究表明OSA是认知功能损害的重要因素。扩散磁共振成像(diffusion magnetic resonance imaging, dMRI)通过测量水分子在组织中的扩散特性来获取有关组织微结构的详细信息,在检测组织微结构的病理变化方面具有极高的敏感度和特异度,尤其是在白质纤维病变的诊断中非常敏感。近年来,dMRI快速兴起,在OSA脑白质及认知功能损害的研究中得到了广泛应用。本文对OSA患者脑白质及认知功能损害的dMRI研究进展进行综述,多序列地分析OSA患者脑白质扩散参数的变化,进一步探讨OSA神经病理改变与认知功能损害的联系,从而为诊断OSA患者认知功能损害提供神经影像学依据。

关键词：阻塞性睡眠呼吸暂停扩散磁共振成像磁共振成像认知功能损害脑白质

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计算声波测井曲线的Box算法研究

石油天然气学报 2009年第5期31卷 299-301页

作者：余训兵周红朱小影中国地质大学(武汉)资源学院湖北武汉430074

地层是一个非常复杂的非均质体,声波测井曲线在一定程度上反映了地层的非均质性。研究利用分形理论分析声波测井曲线。在测井资料处理中,选取一定井段的声波测井数据计算其分维数是可行的,其中Box是应用最为广泛的一种,也是最简便的一种... 详细信息

地层是一个非常复杂的非均质体,声波测井曲线在一定程度上反映了地层的非均质性。研究利用分形理论分析声波测井曲线。在测井资料处理中,选取一定井段的声波测井数据计算其分维数是可行的,其中Box是应用最为广泛的一种,也是最简便的一种,它能够反映孔隙结构的非均质性,可以用来研究测井曲线的形态。而且由于逐点计算的要求,研究将采用窗口技术来计算声波测井曲线的Box。结果表明,Box的大小与测井曲线的读数无关,而只与测井曲线读数的变化有关。而测井曲线读数的变化为地层的非均质性。

关键词：声波测井曲线分形 Box 窗口分析

麻黄山西区块宁东油田3、5井区合理注水强度的计算

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石油天然气学报 2009年第3期31卷 262-264页

作者：朱小影周红余训兵中国地质大学(武汉)资源学院湖北武汉430074

注水强度是油藏注水开发的重要参数之一,合理的注水强度有利于提高油藏的开发水平。应用采油速度法计算注水强度。传统方法只是单纯用采油速度来计算合理注水强度,但是有些油田边底水能量很强,且边底水锥进严重,如果单用合理采油速度来... 详细信息

注水强度是油藏注水开发的重要参数之一,合理的注水强度有利于提高油藏的开发水平。应用采油速度法计算注水强度。传统方法只是单纯用采油速度来计算合理注水强度,但是有些油田边底水能量很强,且边底水锥进严重,如果单用合理采油速度来计算合理注水强度,容易造成合理注水强度过大,按此方案注水容易发生水淹;在本文中把原来公式稍作修改,综合考虑水侵量的影响,把水侵速度考虑进去,按此改进的方法计算合理注水强度比较符合实际情况,既能使注入水补充地层亏空,又不会发生水淹。

关键词：宁东油田合理采油速度水侵速度合理注水强度

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侧柏珠孔闭合过程及其进化生物学意义

西北植物学报 2024年第9期44卷 1456-1463页

作者：尚鑫朱小影贾智硕张鑫西北农林科技大学林学院陕西杨凌712100 中国农业大学植物保护学院北京100193

【目的】探究侧柏珠孔闭合过程,以丰富裸子植物珠孔闭合数据,为研究裸子植物系统发育提供参考。【方法】以侧柏雌球花为材料,通过石蜡切片及扫描电子显微镜等形态学方法观察授粉后胚珠发育过程;同时基于珠孔闭合方式对本内苏铁和其他现... 详细信息

【目的】探究侧柏珠孔闭合过程,以丰富裸子植物珠孔闭合数据,为研究裸子植物系统发育提供参考。【方法】以侧柏雌球花为材料,通过石蜡切片及扫描电子显微镜等形态学方法观察授粉后胚珠发育过程;同时基于珠孔闭合方式对本内苏铁和其他现存裸子植物进行聚类分析。【结果】(1)侧柏花粉进入胚珠后,珠孔端珠被最内侧2层细胞开始辐射状向内横向生长,直至将珠孔完全堵塞。(2)侧柏珠孔闭合过程中,珠被细胞为长圆锥形,细胞层数增多至4~6层。(3)裸子植物珠孔闭合方式可分为4类:其中苏铁、银杏为一类,松属植物与罗汉松科植物为一类,本内苏铁单独一支,侧柏及其他种聚为一类。【结论】侧柏珠孔闭合过程不同于苏铁类植物和银杏,但与松科植物及本内苏铁的珠孔闭合过程类似,这暗示本内苏铁与现存松柏类植物在珠孔闭合有一定的演化关系,为理解裸子植物生殖系统演化提供新的形态学依据。

关键词：柏科珠孔闭合珠心组织裸子植物珠被

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不规则抗体筛查在临床输血中的价值

国际检验医学杂志 2015年第23期36卷 3486-3487页

作者：朱小影河南省人民医院输血科河南郑州450003

目的探讨输血前对受血者进行不规则抗体检测,选择与受血者相合的血液成分的意义,以预防受血者在输血过程中发生输血性溶血等不良反应的发生。方法采用卡式微柱凝胶法对该院2014年11月至2015年5月拟输血患者标本进行不规则抗体筛查,对结... 详细信息

目的探讨输血前对受血者进行不规则抗体检测,选择与受血者相合的血液成分的意义,以预防受血者在输血过程中发生输血性溶血等不良反应的发生。方法采用卡式微柱凝胶法对该院2014年11月至2015年5月拟输血患者标本进行不规则抗体筛查,对结果阳性者用谱细胞再进行抗体鉴定。结果 10 534例患者标本中不规则抗体阳性者36例,阳性率为0.34%,其中血液病患者发生率最高,占36.11%。特异性抗体分布情况为:抗-E 7例,占19.44%;抗-D 15例,占41.67%;抗-Ec 2例,占5.56%;抗-C 2例,占5.56%;抗-c 2例,占5.56%;抗-M 2例,占5.56%;抗-S 1例,占2.78%;抗-Fyb 1例,占2.78%;抗-Jka 1例,占2.78%;抗-Dib 1例,占2.78%;抗-Lea 2例,占5.56%。结论在输血前对患者进行不规则抗体筛查及鉴定,能够有效地避免溶血性输血反应的发生,提高了输血的安全性和有效性。

关键词：不规则抗体输血安全性

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环境监测中地表水监测现状及进展研究

皮革制作与环保科技 2021年第16期2卷 34-35页

作者：朱小影保定市生态环境局蠡县分局河北保定071400

控制地表水资源进一步污染,避免生态环境遭到破坏,是目前现今地表水监测人员非常重要的任务。本文以环境监测中地表水监测现状及进展为论述中心,从地表水监测的作用以及监测范围设置不当、监测系统存在问题、监测人员素质不高等方面展... 详细信息

控制地表水资源进一步污染,避免生态环境遭到破坏,是目前现今地表水监测人员非常重要的任务。本文以环境监测中地表水监测现状及进展为论述中心,从地表水监测的作用以及监测范围设置不当、监测系统存在问题、监测人员素质不高等方面展开论述,并对保障地表水监测工作有效开展提出了建议。

关键词：环境监测水资源污染地表水监测

基于DTI-ALPS评估中枢神经系统疾病患者类淋巴系统功能的研究进展

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磁共振成像 2024年第6期15卷 166-171页

作者：朱小影周天宇黄强马红卫张清大连大学附属中山医院放射科大连116001

类淋巴系统(glymphatic system,GS)是近年出现的探究中枢神经系统疾病生理病理机制的新兴角度。研究证实沿血管周围间隙扩散张量分析(diffusion tensor image analysis along the perivascular space,DTI-ALPS)能够有效地评估中枢神经... 详细信息

类淋巴系统(glymphatic system,GS)是近年出现的探究中枢神经系统疾病生理病理机制的新兴角度。研究证实沿血管周围间隙扩散张量分析(diffusion tensor image analysis along the perivascular space,DTI-ALPS)能够有效地评估中枢神经系统疾病患者GS功能改变,尤其是在退行性中枢神经系统疾病,如癫痫、帕金森病、痴呆。本文就应用DTI-ALPS技术评估中枢神经系统疾病患者GS功能的研究现状作一综述,旨在为疾病的神经影像研究提供新方向。

关键词：中枢神经系统疾病类淋巴系统磁共振成像沿血管周围间隙扩散张量分析

HFO混合制冷剂R455A和R454C在转子式压缩机的应用特性研究

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制冷与空调 2023年第1期23卷 75-78页

作者：邵美玲朱小影沈阳中航机电三洋制冷设备有限公司

针对冷冻冷藏领域转子式压缩机,R455A、R454C制冷剂在不同蒸发温度下进行测试,与目前使用最为广泛的R404A进行对比分析,得出结论,在蒸发温度低于-20℃,R404A性能最优;蒸发温度高于-20℃,R455A性能最优;蒸发温度在-40℃~-5℃,R454C功率... 详细信息

针对冷冻冷藏领域转子式压缩机,R455A、R454C制冷剂在不同蒸发温度下进行测试,与目前使用最为广泛的R404A进行对比分析,得出结论,在蒸发温度低于-20℃,R404A性能最优;蒸发温度高于-20℃,R455A性能最优;蒸发温度在-40℃~-5℃,R454C功率及电流均比R404A、R455A偏低。

关键词： HFO R455A R454C 转子式压缩机