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2016—2018年我国华北部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的遗传变异分析

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黑龙江畜牧兽医 2020年第11期 96-100页

作者：朱国坡马凤龙王家福刘金华中国农业大学动物医学院北京100193 杭州佑本动物疫苗有限公司浙江杭州310018

为了了解2016—2018年华北部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的遗传变异情况,试验采用RT-PCR方法对采集的临床疑似猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)样品进行检测,然后对阳性样品进行开放阅读框5(ORF5)基因扩增和测序,并对获得毒株ORF5基因的核苷酸序列和推导氨基酸序列进行同源性分析,以及推导氨基酸序列的遗传变异分析。结果表明:所采集的198份临床疑似PRRS样品中有114份RT-PCR检测结果为阳性,阳性率为57.58%;测序共获得37条ORF5基因序列;所获毒株与基因Ⅱ型代表毒株ORF5基因的核苷酸和氨基酸序列同源性分别为82.6%~99.5%、81.0%~99.5%;全部PRRSV毒株均为基因Ⅱ型,分属于Linage 1(代表毒株为NADC30)、Linage 5(代表毒株为VR-2332)和Linage 8(代表毒株为JXA1)3个亚群,其中Linage 1占比最高,为78.38%;各亚群毒株均具有各自特征性氨基酸,在非中和表位区域(aa27~30)的全部氨基酸均可发生突变,Linage 1亚群的HeBxtsh-1808株在胞外域存在1个氨基酸的插入。说明华北地区PRRSV流行毒株呈多样化,而且不断发生变异,类NADC30已成为该地区的优势流行毒株,提示应根据当地的流行情况及时调整该病的防控方案。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) 开放阅读框5(ORF5) 华北遗传变异突变插入

2019年四川省部分地区猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的遗传变异分析

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江苏农业科学 2021年第8期49卷 68-73页

作者：孔军朱国坡康斌武玉梅李少丽邵攀峰尹忠良山西省运城市畜牧兽医发展中心山西运城044000 金河佑本生物制品有限公司研究院内蒙古呼和浩特010010

为了解2019年四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的遗传变异情况,采用RT-PCR方法对来自该省部分地区猪场的36份疑似PRRS猪的组织样品进行PRRSV ORF5基因测序,并对所获得的基因序列进行了生物信息学分析。结果显示,成功扩增出1... 详细信息

为了解2019年四川省猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5基因的遗传变异情况,采用RT-PCR方法对来自该省部分地区猪场的36份疑似PRRS猪的组织样品进行PRRSV ORF5基因测序,并对所获得的基因序列进行了生物信息学分析。结果显示,成功扩增出14条PRRSV ORF5基因片段。同源性分析显示,14条PRRSV ORF5基因序列均为基因Ⅱ型毒株,分属于1、3、8这3个不同的谱系,以NADC30为代表的谱系1和以QYYZ为代表的谱系3各5株,以JXA1为代表的谱系8毒株4株,各毒株间核苷酸和推导氨基酸的同源性分别为78.5%~100.0%、78.0%~100.0%。氨基酸序列分析结果显示,14个毒株GP5蛋白上3个主要的抗原表位上均存在广泛的变异,同时谱系1和谱系3毒株与毒力相关的位点也发生了不同程度的突变,这些突变可能影响病毒毒力及有助于病毒逃避机体的免疫系统。结果表明,2019年四川省PRRSV呈多亚型毒株同时流行的复杂局面,有必要对PRRSV的流行和变异情况进行实时监测,以此选择更为合适的疫苗毒株及免疫程序,结合严格的生物安全措施,从而达到科学防控PRRS的效果。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因遗传变异

改良疫苗免疫接种方案对猪繁殖与呼吸综合征免疫效果的影响

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内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2020年第6期41卷 6-10页

作者：刘哲邵攀峰朱国坡王斌卿韩润林内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 杭州佑本动物疫苗有限公司杭州310026

目前我国对猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)感染的主要防治手段是疫苗免疫。常用的疫苗有PRRS灭活疫苗(Killed Virus,KV)和PRRS弱毒疫苗(Modified-live Virus,MLV)2种。本研究选取市售的2种疫苗,在前人报道联合免疫的基础上,首次对联合免疫时灭活疫苗最低抗原含量进行确定。试验结果表明,联合免疫组病死率都显著优于单纯免疫灭活疫苗组,当联合免疫时灭活疫苗的抗原含量为3μg/ml时,仔猪的体重增长率最高。而抗原含量为1μg/ml时虽有37%的发病率,但其病死率为0%。本研究再次验证了弱毒疫苗和灭活疫苗联合免疫的可行性,首次确定了灭活疫苗中抗原含量的最低剂量,本研究对PRRS的免疫防治提供新的思路。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征联合免疫抗原含量免疫效果

不同抗原含量鸡新城疫灭活疫苗的HI效价测定

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黑龙江畜牧兽医 2013年第1期 135-137页

作者：邵攀峰李少丽何叶峰余彬辉王斌卿胡志航朱国坡杭州荐量兽用生物制品有限公司杭州310018

新城疫（newcastle disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）引起的一种禽类急性、高度接触性传染病，导致鸡群生产性能下降和大批死亡，造成巨大的经济损失。

关键词：新城疫灭活疫苗效价测定抗原含量鸡群 HI 接触性传染病新城疫病毒 virus

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猪圆环病毒2型灭活疫苗生产关键技术

中国兽医杂志 2015年第4期51卷 102-103页

作者：李少丽张雅会李新华胡志航邵攀峰王斌卿朱国坡杭州荐量兽用生物制品有限公司浙江杭州310018 唐山市畜牧水产品质量监测中心河北唐山063000 中国农业科学院家禽研究所江苏扬州225125

猪圆环病毒2型（PCV-2）在我国乃至全世界猪群中广泛传播,是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的主要病原,PCV-2能造成仔猪生长缓慢,饲料报酬降低,同时侵害猪的免疫系统,导致机体免疫力下降,引起其他疫病的暴发,是近年来危害养猪业的主要免... 详细信息

猪圆环病毒2型（PCV-2）在我国乃至全世界猪群中广泛传播,是引起断奶仔猪多系统衰竭综合征的主要病原,PCV-2能造成仔猪生长缓慢,饲料报酬降低,同时侵害猪的免疫系统,导致机体免疫力下降,引起其他疫病的暴发,是近年来危害养猪业的主要免疫抑制病之一[1].我国自2000年首次报道猪群中存在PCV-2感染[2],之后在全国各地陆续有报道,呈逐渐蔓延趋势.近年来,PCV-2的发生和流行,给我国养猪业造成了巨大的经济损失.

关键词：猪圆环病毒2型断奶仔猪多系统衰竭综合征疫苗生产 PCV-2 技术灭活免疫力下降免疫抑制病

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细胞凋亡常用检测方法的研究进展

中国畜牧兽医 2010年第2期37卷 90-92页

作者：郭延锋高均伟朱国坡刘兴友河南科技学院动物科学学院新乡453003

近年来,细胞凋亡一直是生命科学和医学领域各专业的研究热点。作者综述了细胞凋亡的形态学、生物化学及分子生物学、酶学、免疫学和流式细胞仪法等常用的细胞凋亡检测方法,并对各种方法的优点及局限性进行了简要概述。

关键词：细胞凋亡检测方法

H5N1禽流感病毒HA基因的重组腺病毒表达载体的构建

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河南农业科学 2010年第7期39卷 92-96页

作者：王青胡建和徐彦召朱国坡郑素玲河南科技学院动物科学学院河南新乡453003 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241

采用PCR方法扩增出禽流感病毒HA基因,将其定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中构建pAdtrack-H5,之后将pAdtrack-H5与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-H5,将pAdeasyd-H5经PacⅠ线性化... 详细信息

采用PCR方法扩增出禽流感病毒HA基因,将其定向插入pAdtrack-CMV腺病毒穿梭质粒中构建pAdtrack-H5,之后将pAdtrack-H5与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在基因工程菌BJ5183中进行同源重组,获得腺病毒质粒pAdeasy-H5,将pAdeasyd-H5经PacⅠ线性化后转染HEK293细胞株,包装出含有HA基因的腺病毒pAd-H5。结果表明:含有目的基因的腺病毒穿梭质粒pAdtrack-H5和含有目的基因的腺病毒质粒pAdeasy-H5经PCR、双酶切及核苷酸测序鉴定无误。包装成功的腺病毒pAd-H5经绿色荧光蛋白和RT-PCR分析证实,目的基因在该细胞中成功表达。

关键词：腺病毒载体禽流感病毒 H5N1亚型 HA基因载体构建

鸡传染性支气管炎病毒HZ13株的分离与鉴定

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中国家禽 2014年第4期36卷 43-45页

作者：邵攀峰李新华李少丽朱国坡王斌卿胡志航孙庆霞杭州荐量兽用生物制品有限公司浙江杭州310018 中国农业科学院家禽研究所江苏扬州225125

从浙江省某肉鸡养殖场发生疑似肾型传染性支气管炎的发病鸡群中采集病料,进行病毒分离。结果显示,经1%胰酶处理后,该病毒尿囊液可以凝集鸡的红细胞,而未处理的病毒尿囊液则无此凝集活性;该分离株对新城疫病毒(La Sota)株增殖具有明显的... 详细信息

从浙江省某肉鸡养殖场发生疑似肾型传染性支气管炎的发病鸡群中采集病料,进行病毒分离。结果显示,经1%胰酶处理后,该病毒尿囊液可以凝集鸡的红细胞,而未处理的病毒尿囊液则无此凝集活性;该分离株对新城疫病毒(La Sota)株增殖具有明显的抑制作用;对10日龄鸡胚的致病变率达100%;通过鸡胚矮小化试验和动物回归试验,发现该分离株能引起鸡胚和病鸡典型的临床症状和病理变化;RT-PCR可扩增出768 bp片段,测序比对结果证实分离获得了1株肾型鸡传染性支气管炎病毒,命名为HZ13株。

关键词：鸡传染性支气管炎病毒分离鉴定

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悬浮培养技术在猪圆环疫苗生产中的应用

养殖与饲料 2020年第5期19卷 77-78页

作者：李少丽邵攀峰朱国坡尹忠良杭州佑本动物疫苗有限公司杭州310018

猪圆环病毒病是猪的一种非常重要的免疫抑制性疾病,可直接破坏猪的免疫系统,并引起其他疾病的并发或继发感染。针对该病的疫苗主要为全病毒灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗,基因工程亚单位疫苗一般利用生物反应器生产,而国内猪圆环全病毒... 详细信息

猪圆环病毒病是猪的一种非常重要的免疫抑制性疾病,可直接破坏猪的免疫系统,并引起其他疾病的并发或继发感染。针对该病的疫苗主要为全病毒灭活疫苗和基因工程亚单位疫苗,基因工程亚单位疫苗一般利用生物反应器生产,而国内猪圆环全病毒灭活疫苗的微载体悬浮培养生产的工艺目前还处于研究阶段。

关键词：悬浮培养猪圆环病毒疫苗