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地塞米松对恶性造血细胞Flt3受体表达及重组人Flt3配体诱导的细胞增殖的影响

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Acta Pharmacologica Sinica 2001年第6期22卷 58-64页

作者：许志祥徐颖朱剑昆李彩霞李颖张学光中国 215007 苏州大学生命科学院医学生物技术研究所免疫研究室苏州大学生命科学院医学生物技术研究所免疫研究室苏州

目的:研究地塞米松(DXM)对恶性造血细胞表面Flt3受体表达及重组人Flt3配体(rhFL)介导的恶性造血细胞增殖的影响。方法:采用流式细胞仪分析18株恶性造血细胞系细胞和10例新鲜白血病原代细胞表面Flt3受体的表达,及与DXM 0.1μmol/L共育24h... 详细信息

目的:研究地塞米松(DXM)对恶性造血细胞表面Flt3受体表达及重组人Flt3配体(rhFL)介导的恶性造血细胞增殖的影响。方法:采用流式细胞仪分析18株恶性造血细胞系细胞和10例新鲜白血病原代细胞表面Flt3受体的表达,及与DXM 0.1μmol/L共育24h后Flt3受体的表达,用NTT法测定DXM对rhFL介导的恶性造血细胞增殖的影响。结果:(1)恶性造血细胞系细胞和白血病原代细胞Flt3受体的表达广泛并呈多样性。(2)恶性细胞表面Flt3受体的表达与rhFL介导的恶性细胞增殖无一定相关性,rhFL促进部分Flt3受体阴性细胞的增殖。(3)DXM下调Flt3受体的表达,抑制rhFL介导的部分恶性造血细胞系细胞和新鲜白血病原代细胞的增殖。结论:DXM可下调恶性造血细胞表面Flt3受体的表达,抑制rhFL介导的恶性造血细胞的增殖。DXM和rhFL联合应用,可使rhFL在恶性造血系统疾病的造血功能缺乏治疗时更为安全。

关键词：重组蛋白质类重组人Flt3配体酪氨酸激酶受体血液肿瘤地塞米松

人Flt3配体在酵母中的表达及其生物学特性(英文)

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第3期32卷 217-222页

作者：许志祥朱剑昆张之宏李颖鲁严黄伟达张学光复旦大学生物化学系!上海200433 苏州医学院生物技术研究所!苏州215007

Flt3配体 (FL)是一种具有促进早期造血功能的细胞因子 ,能够促进造血干 /祖细胞的增殖和分化。为了获得高效表达的人可溶性Flt3配体 (rhFL)重组蛋白 ,采用酵母偏爱的密码子 ,人工合成rhFL基因 ,构建表达载体 pPICZαA FL ,电转化毕氏酵... 详细信息

Flt3配体 (FL)是一种具有促进早期造血功能的细胞因子 ,能够促进造血干 /祖细胞的增殖和分化。为了获得高效表达的人可溶性Flt3配体 (rhFL)重组蛋白 ,采用酵母偏爱的密码子 ,人工合成rhFL基因 ,构建表达载体 pPICZαA FL ,电转化毕氏酵母 (Pichiapastoris) ,得到稳定分泌rhFL的基因工程菌株 ,在培养上清中 ,其表达量达 30mg/L。生物学活性检测提示 ,毕氏酵母系统表达的rhFL可显著地促进人脐带血造血细胞体外集落的形成。rhFL与SCF、GM CSF、IL 3因子合用是体外扩增造血干细胞 /祖细胞较好的组合方案之一。rhFL与GM CSF、TNFα、IL 4等因子合用 ,显著增加自人脐带血单核细胞诱导的树突状细胞的数量。rhFL尚可刺激体外培养的人内皮细胞的生长。鉴此 ,毕氏酵母系统表达的rhFL具有重要的研究和潜在的临床应用价值。

关键词：重组人可溶性Flt3配体(rhFL) 毕氏酵母(Pichia pastoris) 造血集落形成树突状细胞内皮细胞

人重组白细胞介素11在毕氏酵母系统中的表达及纯化

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中国医学科学院学报 2001年第2期23卷 127-131页

作者：朱剑昆许志祥黄伟达闵太善谢炜徐颖张学光苏州大学免疫教研室苏州215007 Department of Biochemistry Fudan University

目的在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达人白细胞介素-11（ rhIL-11），便于进一步开发。方法以人工设计合成的 rhIL-11基因，构建表达载体 pPICZα A-IL-11，经线性化后电转化导入毕氏酵母菌株 KM71，甲醇诱导表达，用 EL... 详细信息

目的在甲醇营养型毕氏酵母蛋白质表达系统中高效表达人白细胞介素-11（ rhIL-11），便于进一步开发。方法以人工设计合成的 rhIL-11基因，构建表达载体 pPICZα A-IL-11，经线性化后电转化导入毕氏酵母菌株 KM71，甲醇诱导表达，用 ELISA和 SDS-PAGE检测发酵上清中 IL-11的抗原性和表达量，用 IL-11依赖的 B9-11细胞株分析其生物学活性，采用疏水层析、离子交换和凝胶过滤纯化发酵上清中的 IL-11。结果序列分析表明，克隆载体中 IL-11人工基因序列与设计相符；基因工程菌株 KM71-2424在摇瓶培养上清中 IL-11的表达量超过 60 mg/L，生物学活性测定显示其比活性为 5.5× 107 U/mg，而标准品的生物学活性为 2.2× 107 U/mg。经过三步层析纯化得到电泳纯的 rhIL-11蛋白质。结论成功获得 IL-11人工基因和稳定分泌重组蛋白的基因工程菌株 KM71-2424，该重组蛋白的生物学活性显著高于大肠杆菌表达的标准品，并获得较高纯度的重组蛋白。

关键词：重组人白细胞介素-11 毕氏酵母表达分离纯化

Recombinant human Flt3 ligand exerts both direct and indirect effects on hematopoiesis

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Chinese Medical Journal 2002年第2期115卷 202-205,149页

作者：许志祥徐颖朱剑昆施勤李颖张学光苏州医学院医学生物技术研究所免疫研究室苏州215007

OBJECTIVE: To investigate the direct effects of the Flt3 ligand (FL) on hematopoiesis, such as the stimulation of the formation of hematopoietic colonies and the proliferation of dendritic cells, as well as the indirect stimulation of hematopoiesis, especially via the proliferation of endothelial cells. METHODS: Mononuclear cells from human cord blood were plated in methylcellulose medium containing different cytokines to induce hematopoietic colony formation. Dendritic cells (DCs) were induced from the mononuclear cells with a cytokine cocktail with or without recombinant human soluble FL (rhFL; 100 ng/ml). The Flt3 receptors on the surface of a human microvascular endothelial cell line (ECV) were analyzed by flow cytometry. The proliferation of ECV stimulated by rhFL was measured with the microculture tetrazolium assay. The levels of FL, IL-6, IL-8, G-CSF and GM-CSF in the supernatant of ECV cultures were measured by enzyme linked immunoabsorbent assay (ELISA). RESULTS: rhFL stimulates colony formation from cord blood when used as a sole stimulant. FL in combination with other cytokines increased colony formation significantly. The number of DCs was approximately 2.5 times higher when rhFL was used. rhFL stimulates the proliferation of ECV on which Flt3 receptors are expressed. Furthermore, ECV secretes FL, IL-6, IL-8, G-CSF and GM-CSF, which were augmented by tumor necrosis factor-alpha and rhFL. CONCLUSIONS: rhFL enhances hematopoietic colony formation and DC proliferation from human cord blood cells. FL not only stimulates the proliferation of ECV, but is also secreted by ECV. FL may exert direct and indirect effects on hematopoiesis.

关键词： Cell Division Cell Line Dendritic Cells Dexamethasone Dose-Response Relationship, Drug Endothelium, Vascular Fetal Blood Hematopoiesis Hematopoietic Stem Cells Humans Immunophenotyping Membrane Proteins Recombinant Proteins Research Support, Non-U.S. Gov't Tumor Necrosis Factor-alpha

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造血生长因子受体超家族研究进展

国外医学（分子生物学分册） 1996年第6期18卷 248-252页

作者：朱剑昆苏州医学院免疫教研室苏州215007

造血生长因子受体是一组对机体具有重要调节功能的重要分子,近年来对其分子结构的特性和信号转导的机制有了许多新发现,尤其证实一些成员通过共同机制介导信号的转导,这确保了每个细胞因子高度的特异性和生物效应的交叠性。

关键词：造血生长因子受体超家族性

重组人Flt3配体对微血管内皮细胞的抗辐射作用研究

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中华放射医学与防护杂志 2001年第4期21卷 286-289页

作者：许志祥张学光强亦忠徐颖施勤朱剑昆丁天苏州大学核医学生物技术重点实验室医学生物技术研究所江苏215007 上海复旦大学生化系

目的　研究Flt3配体 (FL)对人微血管内皮细胞系细胞 (ECV)的抗辐射作用及其可能的作用机理。方法　用流式细胞仪分析ECV表面Flt3受体的表达 ;用MTT法观察FL对受照射ECV增殖的影响 ;用AnnexinV PI方法测定细胞凋亡 ,用RT PCR方法分析细... 详细信息

目的　研究Flt3配体 (FL)对人微血管内皮细胞系细胞 (ECV)的抗辐射作用及其可能的作用机理。方法　用流式细胞仪分析ECV表面Flt3受体的表达 ;用MTT法观察FL对受照射ECV增殖的影响 ;用AnnexinV PI方法测定细胞凋亡 ,用RT PCR方法分析细胞凋亡基因bax和Bcl 2的改变。结果　ECV表达Flt3受体 ,FL能激发ECV增殖 ,ECV经 15Gy的照射后 ,FL能有效地拮抗照射对ECV增殖的抑制作用 ;同时照射后ECV的bax基因表达增加 ,bcl 2基因表达轻度降低。FL通过抑制bax基因的表达 ,降低辐射引起的ECV细胞凋亡。结论　FL通过抑制细胞凋亡 ,减轻辐射引起的ECV的损伤 ,可能在辐射损伤患者造血微环境的保护中具有应用价值。

关键词： Flt3配体造血微环境微血管内皮细胞抗辐射作用细胞凋亡细胞增殖

重组人Flt3配体在毕氏酵母中的表达及其对恶性造血细胞的体外作用

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中华血液学杂志 2000年第11期21卷 595-599页

作者：许志祥徐颖朱剑昆李颖施勤蒋令瑜黄伟达张学光苏州大学医学生物技术研究所免疫研究室 215007 复旦大学生物化学系

目的　用毕氏酵母 (Pichiapastoris)表达人可溶性Flt3配体 (rhFL) ,并观察rhFL对恶性造血细胞增殖的作用 ;探讨地塞米松 (DXM)对Flt3受体 (Flt3R)表达及rhFL介导的恶性造血细胞增殖的影响。方法　人工合成FL基因片段 ,经基因重组技术获... 详细信息

目的　用毕氏酵母 (Pichiapastoris)表达人可溶性Flt3配体 (rhFL) ,并观察rhFL对恶性造血细胞增殖的作用 ;探讨地塞米松 (DXM)对Flt3受体 (Flt3R)表达及rhFL介导的恶性造血细胞增殖的影响。方法　人工合成FL基因片段 ,经基因重组技术获得重组质粒pPICZα FL ,电转化毕氏酵母 ,筛选分泌rhFL的基因工程菌株。用流式细胞仪测定恶性造血细胞表面Flt3R的表达 ,用MTT法分析rhFL对恶性造血细胞的增殖作用及DXM的影响。结果　经筛选 ,获得稳定分泌rhFL的基因工程菌株 ,表达量达 30mg/L。rhFL在 10～ 10 0ng/ml时 ,刺激Raji和HL 6 0细胞的增殖 ,但对绝大多数的恶性造血细胞无刺激作用 ;18株恶性造血细胞株中 5株细胞表达Flt3R ;对部分病理类型的白血病新鲜标本的研究发现 ,6 0 %患者的外周血或骨髓细胞表达Flt3R ,急性单核细胞白血病及急性淋巴细胞白血病患者Flt3R的阳性率较高 ,但仅有部分患者的白血病细胞在体外对FL的刺激有增殖效应。DXM可抑制rhFL对Raji、HL 6 0细胞及部分新鲜白血病标本的白血病细胞的刺激增殖作用。结论　应用毕氏酵母表达具有生物学活性的rhFL ,rhFL可刺激Raji、HL 6 0和部分白血病患者白血病细胞在体外的增殖。DXM通过降低Flt3R的表达 ,抑制rhFL介导的恶性造血细胞的增殖。

关键词：重组人Flt3配体造血细胞地塞米松白血病

重组人Flt3配体联合其它细胞因子对免疫细胞的体外抗辐射作用研究

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中华放射医学与防护杂志 2001年第6期21卷 424-427页

作者：朱剑昆张学光许志祥徐颖赵仁亮於葛华强亦忠苏州大学生命科学院医学生物技术研究所免疫研究室江苏215007 青岛医学院附属医院

目的　研究重组人Flt3配体 (rhFL)及其他细胞因子在体外对免疫细胞的抗辐射作用及其可能机理。方法　用流式细胞仪分析照射前后外周血单个核细胞 (PBMC)表型及rhFL对受照射PBMC表型的影响。 [3H] TdR测定细胞的增殖能力。PBMC来源贴壁... 详细信息

目的　研究重组人Flt3配体 (rhFL)及其他细胞因子在体外对免疫细胞的抗辐射作用及其可能机理。方法　用流式细胞仪分析照射前后外周血单个核细胞 (PBMC)表型及rhFL对受照射PBMC表型的影响。 [3H] TdR测定细胞的增殖能力。PBMC来源贴壁细胞经细胞因子诱导树突状细胞 (DC) ,并观察辐射对诱导DC的影响及rhFL对DC的抗辐射效应 ;用PI AnnexinV、DNALadder分析细胞凋亡。结果　PBMC在体外经 15Gy照射后 ,CD8+ 、CD5 6 + 细胞明显减少 ,照射前细胞培养液中加入 10 0ng mlrhFL ,可促进CD5 6 + 细胞的恢复 ;照射前应用rhFL及照射后联合应用IL 2等细胞因子 ,可促进受照射CD8+ 、CD5 6 + 细胞的恢复 ;rhFL可协同GM CSF、IL 4、TNFα产生DC ,并使DC细胞的数量较常规方法诱导产生的数量增加 6倍 ,而且rhFL对DC分化诱导的辐射抑制作用具有明显的抗性 ;rhFL可抑制照射所致的细胞凋亡。结论　rhFL单独或与其他细胞因子联合应用 ,对人外周血免疫细胞具有明显的抗辐射效应。

关键词：细胞因子 Flt3配体免疫细胞辐照凋亡

sCD40L在小鼠急性辐射损伤中的应用研究

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辐射防护 2003年第1期23卷 37-41页

作者：朱剑昆周旋於葛华马银辉徐颖强亦忠张学光苏州大学生命科学院医学生物技术研究所江苏省核医学生物技术重点实验室 215007

CD4 0和 CD4 0 L的相互作用在机体细胞和体液免疫调节及其应答中起重要作用 ,注射可溶性CD4 0 L(s CD4 0 L)可促进骨髓移植小鼠粒细胞和血小板数量的恢复。本实验采用外周血细胞计数、白细胞分类计数、免疫荧光标记和流式细胞技术 ,探讨... 详细信息

CD4 0和 CD4 0 L的相互作用在机体细胞和体液免疫调节及其应答中起重要作用 ,注射可溶性CD4 0 L(s CD4 0 L)可促进骨髓移植小鼠粒细胞和血小板数量的恢复。本实验采用外周血细胞计数、白细胞分类计数、免疫荧光标记和流式细胞技术 ,探讨了 s CD4 0 L对小鼠急性辐射损伤的救治作用。结果显示 ,体内注射 s CD4 0 L以最佳剂量 10 0 μg处理受照小鼠时可明显延长其存活时间 ,并促进 CD8+ T细胞比例和 CD4 + /CD8+ T细胞比值的恢复。说明 s CD4 0

关键词： sCD40L 辐射损伤可溶性CD40配体免疫系统治疗修复作用