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新型血管内皮细胞抑制因子VEGI151的基因克隆表达及其活性

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2000年第5期32卷 485-489页

作者：王路潘卫朱分禄焦炳华娄永华肖扬戚中田卫生毒理学教研室!上海200433 第二军医大学基础医学部微生物学教研室!上海200433

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ... 详细信息

血管内皮细胞生长抑制因子 (vascularendothelialcellgrowthinhibitor,VEGI)是近年发现的一类肿瘤坏死因子超家族成员 ,具有抑制内皮细胞增殖的作用。从人脐静脉内皮细胞株 (ECV30 4)克隆到其基因 ,构建N端缺失 2 3个氨基酸的表达载体 ,并通过原核表达系统进行表达 (命名为VEGI151) ,表达量为 2 5 .5 % ,纯化后纯度达92 .5 %。通过生物学效应检测 ,发现VEGI151可明显抑制无血清培养基中内皮细胞的增殖 ,2 4h时VEGI151对内皮细胞的IC50 为 10mg/L ,0 .6 13mg/L时使内皮细胞在 36h内完全凋亡。通过检测体外培养肿瘤细胞 (A5 49、HepG2、Hela等 )的存活率 ,未发现明显的增殖或抑制效应。提示VEGI是一种主要作用于血管内皮细胞 ,在新生血管性疾病及肿瘤的治疗中有潜在的应用前景。

关键词：血管内皮细胞生长抑制因子(VEGI) 基因克隆表达内皮细胞生物学活性

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用乳鼠实验法测定STa应注意的几个问题

中国兽医科学 1991年第3期 39-40页

作者：朱分禄新疆军区后勤部兽医研究所乌鲁木齐

目前测定STa(大肠杆菌耐热性肠毒素)的生物学方法包括乳鼠法和动物肠袢结扎法,两者相比,乳鼠法具有简便易行、结果可靠等特点,因此是检测STa的一种重要方法。我们在进行研究STa

关键词：乳鼠 STa 灌胃法实验法

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庚型肝炎病毒基因组RNA的实验转染

中华传染病杂志 2002年第3期20卷 144-147,I001页

作者：任浩朱分禄戚中田第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的　研究庚型肝炎病毒 (HGV)对恒河猴的致病性及其在恒河猴体内的复制和表达。方法　体外转录制备全长HGV基因组RNA ,肝内注射感染BY1猴 ,9个月后取其阳性血清感染BM 1猴 ,7个月后取BM 1阳性血清感染BB1。采用RT PCR、原位杂交、定量... 详细信息

目的　研究庚型肝炎病毒 (HGV)对恒河猴的致病性及其在恒河猴体内的复制和表达。方法　体外转录制备全长HGV基因组RNA ,肝内注射感染BY1猴 ,9个月后取其阳性血清感染BM 1猴 ,7个月后取BM 1阳性血清感染BB1。采用RT PCR、原位杂交、定量PCR和免疫学、血清酶学、组织病理学等方法 ,对HGV的感染性及致病性进行了研究。结果　BY1、BM1和BB1实验猴感染后 ,分别在第 3、8和 3周血清HGVRNA阳转 ,持续存在最长达 2 1周。血清丙氨酸转移酶 (ALT)均升高 ,最高达 418IU/L。感染后血清中均检测出抗 HGV。肝组织检查呈现轻度肝炎样变 ,并检测到HGVmRNA和HGVE2蛋白在肝组织中的表达。结论　体外转录的HGV基因组RNA对恒河猴具有感染性 ,可在恒河猴中传代感染并引起肝组织轻微炎症改变。恒河猴对HGV感染敏感。

关键词：庚型肝炎病毒基因组RNA 实验转染恒河猴

庚型肝炎病毒基因组全长cDNA的拼接及克隆

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第二军医大学学报 1998年第4期19卷 301-306页

作者：朱分禄戚中田任浩宋燕斌邵力第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：构建ＧＢ病毒Ｃ／庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆。方法：以覆盖ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ分离株ＨＧＶ－Ｉｗ全长基因组且互相重叠的５个基因片段Ｉｗ５，Ｉｗｑ２，Ｉｗｈ６，Ｉｗ３和Ｉｗ３为起始材料... 详细信息

目的：构建ＧＢ病毒Ｃ／庚型肝炎病毒（ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ）基因组全长ｃＤＮＡ克隆。方法：以覆盖ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ分离株ＨＧＶ－Ｉｗ全长基因组且互相重叠的５个基因片段Ｉｗ５，Ｉｗｑ２，Ｉｗｈ６，Ｉｗ３和Ｉｗ３为起始材料，采用重叠延伸ＰＣＲ拼接和连接酶连接的方法，构建ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆。结果：ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ克隆的酶切图谱与预期一致；核苷酸序列分析显示，克隆的ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ的核苷酸及推测的氨基酸序列与原ＨＧＶ－Ｉｗ序列一致。结论：ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ基因组全长ｃＤＮＡ的克隆已经构建成功。该克隆的构建，为深入研究ＧＢＶ－Ｃ／ＨＧＶ的致病性及致病机制、复制及转录和翻译机制。

关键词：全长cDNA 拼接克隆庚型肝炎病毒基因组

HGV RNA转录体感染恒河猴的血清学及组织学改变

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世界华人消化杂志 2002年第1期10卷 7-11页

作者：任浩朱分禄朱诗应王路戚中田中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海市200433

目的:观察接种HGV实验猴的血清学和组织病理改变,以探讨HGV对恒河猴的致病性。方法:将庚型肝炎病毒(HGV)全长RNA转录体肝内注射感染恒河猴,检测血清HGV RNA、ALT变化和抗HGV,定期取实验猴肝组织,观察肝组织病理改变,免疫组化对HGV E2... 详细信息

目的:观察接种HGV实验猴的血清学和组织病理改变,以探讨HGV对恒河猴的致病性。方法:将庚型肝炎病毒(HGV)全长RNA转录体肝内注射感染恒河猴,检测血清HGV RNA、ALT变化和抗HGV,定期取实验猴肝组织,观察肝组织病理改变,免疫组化对HGV E2蛋白的表达进行定位分析,尸检取猴的各种脏器进行常规病理检查,并分析HGV E2蛋白在心、肝、胰、脾和肾脏的表达,PCP检测心、肝、胰、脾和肾脏中HGV正负链RNA的存在,透射电镜分析肝组织超微结构的变化。结果:感染后1wk HGV RNA即阳转,最长持续达27wk,实验恒河猴血清ALT间歇性升高,最高达2106nkat·L^(-1),肝组织学活检呈现轻度炎性病变,尸检结果表明实验猴死于间质性肺炎,除肝组织炎症改变外,其他组织正常,免疫组化显示HGVE2蛋白主要在肝细胞质内表达,在心脏和脾脏亦有不同程度的表达,HGV基因组RNA和负链RNA的检测表明HGV在肝脏以外的其他脏器如心和脾脏中亦有复制,电镜结果表明肝细胞超微结构改变较大,肝窦内发现直径约25nm～30nm的病毒样颗粒呈晶格状排列。结论:HGV RNA转录体有感染性并能形成病毒血症,恒河猴对HGV感染敏感,可作为研究HGV复制及致病性的动物模型。任浩,朱分禄,朱诗应,王路,戚中田,HGV RNA转录体感染恒河猴的血清学及组织学改变,世界华人消化杂志2002;

关键词： HGVRNA转录体感染恒河猴血清学组织学改变庚型肝炎病毒病理

大肠杆菌耐热性肠毒素(STa)的纯化及其特性鉴定

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兽医大学学报 1990年第4期10卷 313-317页

作者：朱分禄刘玗冯书章朱平兽医大学军事兽医研究所

产肠毒素性大肠杆菌工程菌株pSLM004在限定性培养基上培养后,上清液经硫酸铵沉淀、丙酮抽提、Sephadex G-25凝胶过滤、DEAE-Sephadex A-25离子交换层析、Bio-gel P-4凝胶及反相高压液相层析,获得的STa纯化倍数为302.7倍,有效剂量达10.72... 详细信息

产肠毒素性大肠杆菌工程菌株pSLM004在限定性培养基上培养后,上清液经硫酸铵沉淀、丙酮抽提、Sephadex G-25凝胶过滤、DEAE-Sephadex A-25离子交换层析、Bio-gel P-4凝胶及反相高压液相层析,获得的STa纯化倍数为302.7倍,有效剂量达10.72ng/鼠单位,回收率为9.9%。纯化的STa在Sephadex G-25凝胶过滤时出现1个蛋白峰,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)呈现1条蛋白带;在100℃30min不失活,121℃15min则失活;在pH 1～10范围内保持活性;胰蛋白酶、链霉蛋白酶对其活性无影响;2-巯基乙醇、二硫苏糖醇(DTT)可使其迅速失活,表明在STa分子中有生物活性所必需的二硫键存在。

关键词：大肠杆菌肠毒素纯化耐热性性质

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丙型肝炎病毒的变异、分型及意义

国外医学（病毒学分册） 1997年第4期4卷 97-100页

作者：朱分禄军事医学科学院基础医学研究所

丙型肝炎病毒为一单股正链ＲＮＡ病毒，基因组高变异且贯穿整个基因组，表现出许多特点。根据变异可将ＨＣＶ分为不同的型及亚型。丙型肝炎病毒的变异、分型对ＨＣＶ的感染预防和丙肝患者的诊断与治疗均有意义。

关键词：丙型肝炎病毒变异分型

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镉对鸡免疫功能影响的研究

中国兽医科技 1991年第2期21卷 15-16页

作者：杨梅英朱分禄张仕雍刘应义新疆军区兽医研究所解放军兽医大学

本实验检测了给镉45ppm鸡的外周血液ANAE^+淋巴细胞百分率、B-淋巴细胞形成EAC花环百分率及血清γ-球蛋白含量、血清IgG含量。实验结果表明:在整个实验期间ANAE^+淋巴细胞百分率减少,B-淋巴细胞EAC花环形成百分率、血清γ-球蛋白含量及... 详细信息

本实验检测了给镉45ppm鸡的外周血液ANAE^+淋巴细胞百分率、B-淋巴细胞形成EAC花环百分率及血清γ-球蛋白含量、血清IgG含量。实验结果表明:在整个实验期间ANAE^+淋巴细胞百分率减少,B-淋巴细胞EAC花环形成百分率、血清γ-球蛋白含量及血清IgG的含量呈下降趋势。说明镉对鸡的细胞免疫和体液免疫均有抑制作用,其抑制程度与接触镉的时间长短有关。细胞免疫对镉的毒性较体液免疫敏感。

关键词：鸡免疫功能镉

HGV RNA基因组感染HepG2细胞的研究

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微生物学通报 2002年第1期29卷 60-64页

作者：任浩朱分禄戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433

　为了观察HGV　RNA基因组在HepG2细胞中的复制和表达并建立HGV感染的细胞模型,体外转录制备HGV RNA基因组,Lipofectamin介导转染HepG2细胞。取HGV RNA阳性培养上清液传代感染HepG2细胞,采用RT-PCR、免疫组化和Western blot等技术检测HG... 详细信息

　为了观察HGV　RNA基因组在HepG2细胞中的复制和表达并建立HGV感染的细胞模型,体外转录制备HGV RNA基因组,Lipofectamin介导转染HepG2细胞。取HGV RNA阳性培养上清液传代感染HepG2细胞,采用RT-PCR、免疫组化和Western blot等技术检测HGV在HepG2细胞中的复制和表达。HepG2细胞在转染后24h便可在培养上清液中检测到HGV负链RNA,传代感染的细胞及培养上清液中可检测到HGV正、负链RNA。在90d内传代20余次,均能检测到HGV的复制。免疫组化和Western　blot可检测到HGV E2蛋白在感染细胞中的表达。HGV感染细胞经冻存后复苏,仍能检测到 HGV RNA。故 HGV RNA基因组能够在HepG2细胞中复制和表达,此细胞模型有可能用于HGV的复制与感染防治的研究。

关键词：庚型肝炎病毒 HGV RNA基因组 HepG2细胞复制表达