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重组猪α-干扰素的纯化及生化性质鉴定

南京师大学报（自然科学版） 2008年第2期31卷 97-100,104页

作者：邵菁于瑞嵩董世娟朱于敏沈世缘曹祥荣李震南京师范大学生命科学学院江苏南京210046 上海市农业科学院畜牧兽医研究所

对巴斯德毕赤酵母高效分泌表达的猪α-干扰素(PoIFN-α)纯化工艺和纯化后重组蛋白的部分生化特性进行了研究,结果表明:猪α-干扰素(PoIFN-α)发酵液经离心、透析、过滤处理之后,依次利用亲和层析和离子交换层析使目的蛋白得到了纯化.经... 详细信息

对巴斯德毕赤酵母高效分泌表达的猪α-干扰素(PoIFN-α)纯化工艺和纯化后重组蛋白的部分生化特性进行了研究,结果表明:猪α-干扰素(PoIFN-α)发酵液经离心、透析、过滤处理之后,依次利用亲和层析和离子交换层析使目的蛋白得到了纯化.经N端氨基酸测序,Western-blot,对酸、热、巯基乙醇的稳定性和糖基化程度等检测后发现,所表达的猪α-干扰素N端氨基酸序列(前5个)正确,对酸和热基本稳定,二硫键对目的蛋白的活性至关重要,没有发现目的蛋白的糖基化.

关键词：重组猪α-干扰素(PoIFN-α) 亲和层析离子交换层析糖基化生化性质

应用灰色系统GM(1,1)模型预测猪场中猪戊型肝炎的流行趋势

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上海农业学报 2012年第4期28卷 59-61页

作者：董世娟黄芬芬施标朱于敏于瑞嵩司伏生李震上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 江西农业大学动物科学技术学院南昌330045 上海市农业科学院国际合作办公室上海201403

为研究猪戊型肝炎的流行趋势及其预测,应用灰色系统理论对上海市2005-2010年的猪戊型肝炎资料进行分析,建立了灰色系统GM(1,1)模型,并进行了模型评价。结果表明:GM(1,1)模型精度检验结果为优,能精确地模拟猪戊型肝炎的流行趋势。应用该... 详细信息

为研究猪戊型肝炎的流行趋势及其预测,应用灰色系统理论对上海市2005-2010年的猪戊型肝炎资料进行分析,建立了灰色系统GM(1,1)模型,并进行了模型评价。结果表明:GM(1,1)模型精度检验结果为优,能精确地模拟猪戊型肝炎的流行趋势。应用该模型预测上海市2011年、2012年猪戊型肝炎的感染率分别为19.25%和18.34%。

关键词：猪戊型肝炎病害预测 GM(1 1)模型

CpG-ODN对大肠杆菌诱导的山羊实验性乳腺炎乳腺的保护作用研究

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浙江农业科学 2008年第1期49卷 106-109页

作者：朱于敏苗晋峰邹思湘陈伟华李震邓月娥上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 南京农业大学农业部动物生理生化重点开放实验室江苏南京210095 南京农业大学理学院江苏南京210095

选择同处于泌乳初期的睢宁白山羊6头，体重为30～40妇。产后第5d早上挤奶后，于右乳区经过乳头管灌注10μg／kgCpG—ODN，左乳区则通过乳头管灌人等体积的灭菌0．0lmol／LpH值7．2磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution，PBS）作为... 详细信息

选择同处于泌乳初期的睢宁白山羊6头，体重为30～40妇。产后第5d早上挤奶后，于右乳区经过乳头管灌注10μg／kgCpG—ODN，左乳区则通过乳头管灌人等体积的灭菌0．0lmol／LpH值7．2磷酸盐缓冲液（phosphate buffer solution，PBS）作为对照，灌注后第3d按同等剂量进行二次灌注，二次灌注后第2d早上挤奶后，于左右乳区经乳导管灌注2×10^9CFU／ml大肠杆菌（Escherichia coli，***）各3ml，分别于灌注细菌前（定义为0h），灌注后8，16，24，48，72h收集左右乳区乳汁，灌注大肠杆菌72h后，处死动物，取乳腺组织。临床症状观察显示，乳腺内灌注3rnl2×10^9CFU／ml的大肠杆菌能迅速诱导山羊典型的急性乳腺炎症状。组织学观察显示感染大肠杆菌后72h乳腺腺泡内仍有少量嗜中性粒细胞（Polymorphonuclear neutrophils，PMN）浸润，但实验乳区已无浸润。乳汁大肠杆菌数在感染后16h上升至最高。乳汁白细胞介素一6（Interleukine-6，IL-6）水平在感染后16h上升至最高，CpG—ODN能显著提高感染前乳汁IL-6水平，而在感染后24h实验乳区较对照下降了33．73％（P〈0．05）。乳汁肿瘤坏死因子一a（Tumornecrosisfactor-（2，TNF．a）水平在感染后16h上升至最高，其中在感染后24h实验乳区较对照下降35．29％（P〈0．01）。乳汁N-乙酰-β—D-氨基葡萄糖苷酶（N-acetYl-β-D-glucosaminidase，NAGase）水平在感染后16h达最高（P〈0．01），CpG-ODN能显著提高感染后8h乳汁NAGase水平。提示CpG—ODN可通过提高乳汁IL-6水平，减少了乳汁中大肠杆菌数量，减轻了炎症介质对细胞的损伤，并能明显缩短炎症过程。证实了CpG-ODN对大肠杆菌感染诱发的山羊乳腺炎的乳腺有保护作用。

关键词： CpG-ODN 山羊乳腺炎大肠杆菌

重组牛生长激素油混悬长效注射剂的体内外缓释行为和效果研究

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复旦学报（自然科学版） 2007年第6期46卷 900-905页

作者：张蓓笑肖莉莉于瑞嵩沈世缘朱于敏董世娟邹思湘李震陈庆华南京农业大学动物医学院南京210095 上海医药工业研究院上海200040 上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

通过对重组牛生长激素油混悬制剂体外缓释效果的研究发现,油混悬制剂首日释放量为20.3%,且能持续释放至31 d.为验证其在体内的缓释效果,18只去垂体雄鼠分成5组,分别为4个不同剂量的牛生长激素油混悬制剂组和1个PBS对照组.试验的第1天试... 详细信息

通过对重组牛生长激素油混悬制剂体外缓释效果的研究发现,油混悬制剂首日释放量为20.3%,且能持续释放至31 d.为验证其在体内的缓释效果,18只去垂体雄鼠分成5组,分别为4个不同剂量的牛生长激素油混悬制剂组和1个PBS对照组.试验的第1天试验Ⅰ组,试验Ⅱ组,试验Ⅲ组和试验Ⅳ组的每只大鼠分别皮下注射药物含量为4.2%的重组牛生长激素油混悬长效注射剂0.84,1.4,2.8 mg和4.2 mg,对照组皮下注射PBS溶液120μL/只.注射后大鼠每天上午称重1次,连续称重32 d并观察大鼠的增重.注射PBS的去垂体大鼠体重相对比较稳定,32 d累积增重5.87 g,增重6.9%.药物处理32 d后试验Ⅰ组增重为18.66%,试验Ⅱ组增重为18.97%,试验Ⅲ组增重为20.61%,试验Ⅳ组增重为27.38%.试验Ⅰ组和试验Ⅱ组与对照组累积增重的差异均显著(P<0.05),试验Ⅲ组和试验Ⅳ组与对照组累积增重的差异均极显著(P<0.01).另外,试验Ⅳ组和试验Ⅰ组累积增重差异性显著(P<0.05),注射31 d后试验组大鼠的体重仍有增加的趋势.上述结果表明此种油混悬注射剂在体内至少能缓释31 d,其有望发展成为新型长效制剂.

关键词：重组牛生长激素油混悬长效注射剂体外释放增重

重组猪α干扰素抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞增殖的初步研究

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上海农业学报 2010年第2期26卷 114-116页

作者：刘小宝董世娟李福宝朱于敏于瑞嵩沈世缘李震上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室上海201106 安徽农业大学动物科技学院合肥230036

采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)/Marc-145细胞体系验证重组猪α干扰素(rPoIFN-α)制剂的抑制病毒作用。结果表明:rPoIFN-α稀释至10^(10)可有效预防PRRSV感染Marc-145细胞;当rPoIFN-α稀释至10~8可有效抑制病毒在Marc-145细胞上的... 详细信息

采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)/Marc-145细胞体系验证重组猪α干扰素(rPoIFN-α)制剂的抑制病毒作用。结果表明:rPoIFN-α稀释至10^(10)可有效预防PRRSV感染Marc-145细胞;当rPoIFN-α稀释至10~8可有效抑制病毒在Marc-145细胞上的增殖。研究结果在细胞水平上明确了rPoIFN-α对PRRSV的抑制作用,为进一步将rPoIFN-α应用于动物试验提供了参考。

关键词：重组猪α干扰素抑制作用猪繁殖与呼吸综合征病毒

我国人和猪戊型肝炎病毒(HEV)的基因型及其流行状况分析

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我国人和猪戊型肝炎病毒(HEV)的基因型及其流行状况分析

通过多参数聚类分析利用毕赤酵母分批补料发酵高效稳定生产猪α-干扰素

第3届全国人畜共患病学术研讨会

作者：朱于敏董世娟于瑞嵩司伏生于晓明沈世缘李震上海市农业科学院畜牧兽医研究所上海市农业遗传育种重点实验室动物分室南京农业大学动物医学院

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(hepatitis E virus)感染引起的经肠道传播的急性病毒性肝炎,主要通过粪便经口传播。HE为人畜共患,其暴发流行主要发生在亚洲和非洲一些卫生条件较差的发展中国家,散发病例见于世界各地。我国曾发生11次HE的暴... 详细信息

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒(hepatitis E virus)感染引起的经肠道传播的急性病毒性肝炎,主要通过粪便经口传播。HE为人畜共患,其暴发流行主要发生在亚洲和非洲一些卫生条件较差的发展中国家,散发病例见于世界各地。我国曾发生11次HE的暴发或流行,是HE高发区之一,1986年至1988年新疆发生迄今为止规模最大的HE暴发性流行,约有12万人感染。据卫生部发布的传染病疫情公示,近年来我国HE发病数呈现连续增长的态势,死亡率也在逐年增加,已经被列为因HE发病和死亡而引起的经济负担最为严重的国家之一。自1999年我国首次发现基因4型HEV以来,我国各地对HEV的流行状况进行了广泛的研究,但大都各自集中在局部地区,至今仍形成一个比较宏观的认识。因此,本文利用已发表的261株分离于我国大陆地区猪和人的戊型肝炎病毒(HEV)序列的5′ORF2部分序列进行了基因型及其流行状况分析。结果显示,我国HEV的基因型有1型、3型和4型,其中4型占绝对优势。基因1型可以分为1b和1c两个亚型,分别流行于新疆和北京地区。基因3型只有3b一个亚型,主要分布在华东地区,尤其是上海地区。基因4型可以分为4a,4h,4c,4d,4f,4g,4h和4i 8个亚型。其中4h和4i是新发现的基因亚型,本文暂时命名为4h和4i。4a,4d和4h三个亚型最为普遍,分布较广,包括东北、华东、西北和华中地区。对同一地区猪和人HEV亚型的对比分析发现,在我国大部分地区两者的分布并不完全一致,比如,在新疆地区,人的HEV为基因1b亚型,而猪HEV为4a,4d和4h亚型。有些地区(如华北和东北地区)即使人和猪基因型相同,但亚型却不相同,提示有些亚型可能不参与当地的跨种间传播。有些来源于地理位置相隔较远的毒株,其核苷酸序列却高度同源,提示HEV存在跨地区传播现象。同时,本文的序列分析再次证实流行于我国的基因3型和4型HEV为人畜共患。

关键词：戊型肝炎病毒基因亚型人畜共患病跨种间传播

来源： cnki会议评论

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通过多参数聚类分析利用毕赤酵母分批补料发酵高效稳定生产猪α-...

中国畜牧兽医学会2011年学术年会

作者：于瑞嵩董世娟朱于敏金虎高敏杰郑志勇史仲平李震上海市农业科学院畜牧兽医研究所江南大学生物工程学院

引言/目的:干扰素是由动物和人细胞产生的一种抗病毒细胞因子。猪α-干扰素(pIFN-α)是一种有效的亚单位疫苗免疫佐剂和抗病毒制剂。然而,动物组织来源的干扰素是极其微量的,因此建立猪α-干扰素的高密度发酵重组生产工艺显得尤为重要。

关键词：

来源： cnki会议评论

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重组猪α干扰素冻干保护剂的筛选

中国兽药杂志 2010年第3期44卷 37-40页

作者：董世娟朱于敏于瑞嵩沈世缘李震上海市农业科学院畜牧兽医所上海201106 上海市农业遗传育种重点实验室上海201106

为使重组猪α干扰素(rPoIFN-α)制品更好地应用于生产实践中,采用保守的冻干工艺重点对rPoIFN-α制品的冻干保护剂进行筛选,通过外观检测、水分含量、活性检测对14种冻干保护剂进行了比较和筛选。研究结果表明,终浓度2%、4%和5%的甘露... 详细信息

为使重组猪α干扰素(rPoIFN-α)制品更好地应用于生产实践中,采用保守的冻干工艺重点对rPoIFN-α制品的冻干保护剂进行筛选,通过外观检测、水分含量、活性检测对14种冻干保护剂进行了比较和筛选。研究结果表明,终浓度2%、4%和5%的甘露醇的保护效果较好,活性保持率分别为102.8%、95.1%、108.3%。按照活性好的这三个配方再冻干三批制品进行放置40℃加速稳定性实验。结果表明,在40℃放置三个月后,三个保护剂制品效价基本没变化,稳定性良好,有效期暂定为两年。本研究初步探索了rPoIFN-α的冻干配方,为rPoIFN-α的产业化打下了基础。

关键词：重组猪α干扰素冻干保护剂筛选

猪戊型肝炎病毒(HEV)分离株SAAS-FX17全长感染性克隆的构建

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猪戊型肝炎病毒(HEV)分离株SAAS-FX17全长感染性克隆的构建