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基于分子对接筛选并探究中药活性单体对大肠埃希菌生物被膜的作用

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生物工程学报 2024年

作者：杨灿冉蕾杨灼胡惠铭魏薇杨洪早朱买勋余远迪付利芝陈红伟西南大学动物医学院西南大学中兽医药研究所国家生猪技术创新中心重庆市畜牧科学院

为了快速准确筛选出抗大肠埃希菌生物被膜的中药活性单体，本研究以大肠埃希菌关键成膜基因csgD为靶点，采用分子对接、分子动力学模拟等方法从中药系统药理学数据库和分析平台 (traditional Chinese medicine systems pharmacology dat... 详细信息

为了快速准确筛选出抗大肠埃希菌生物被膜的中药活性单体，本研究以大肠埃希菌关键成膜基因csgD为靶点，采用分子对接、分子动力学模拟等方法从中药系统药理学数据库和分析平台 (traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform， TCMSP) 中筛选抗大肠埃希菌生物被膜的中药活性单体，经体外试验验证抗生物被膜作用后，采用数据独立采集 (data-independent acquisition， DIA) 蛋白质组学分析筛选到的单体干预大肠埃希菌生物被膜的差异蛋白，并结合表型验证探究其作用机制。通过虚拟筛选获得单宁酸、芸香柚皮苷、丹参酚酸B、迷迭香素4种候选中药活性单体，经验证单宁酸具有明显的抑制大肠埃希菌生物被膜形成的作用。差异蛋白和相关表型验证结果表明单宁酸主要通过干预大肠埃希菌的菌毛组装、琥珀酸代谢以及群体感应 (quorum sensing， QS) 系统等影响大肠埃希菌生物被膜形成。本研究为开发防治生物被膜相关感染的新型药物提供了一种候选先导化合物。

关键词：分子对接生物被膜单宁酸大肠埃希菌蛋白质组学

黄连生物碱对TGEV诱导的ST细胞炎症反应的调节作用

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湖南农业大学学报(自然科学版) 2023年

作者：唐红梅朱买勋邓小龙徐登峰国家生猪技术创新中心彭水苗族土家族自治县畜牧发展中心重庆市畜牧科学院

分别用质量浓度为100、50、25 μg/mL的黄连生物碱(ACC)对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染的猪睾丸细胞(ST)进行处理，采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的活力，硝酸还原酶法和比色法检测NO、TNOS和iNOS，荧光定量PCR检测TNF–α、IL–1β、IL–... 详细信息

分别用质量浓度为100、50、25 μg/mL的黄连生物碱(ACC)对猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)感染的猪睾丸细胞(ST)进行处理，采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞的活力，硝酸还原酶法和比色法检测NO、TNOS和iNOS，荧光定量PCR检测TNF–α、IL–1β、IL–6、IL–10等炎症基因的表达变化。结果显示，质量浓度为100、50 μg/mL 的ACC处理可极显著提高TGEV感染的ST细胞的存活率，25 μg/mL 的ACC显著提高TGEV感染的ST细胞存活率。TGEV感染后NO含量急剧升高，质量浓度为100、50 μg/mL 的ACC处理可极显著降低TNOS和iNOS酶活力，25 μg/mL显著降低TNOS和iNOS酶活力。ACC可极显著下调TNF–α、IL–1β、IL–6、IL–10 mRNA的表达水平。表明黄连生物碱可以降低TGEV诱导的ST细胞的炎症反应，缓解病毒对细胞的损伤。

关键词：黄连生物碱猪传染性胃肠炎病毒猪睾丸细胞炎症相关基因

生物被膜态益生菌控制病原菌感染及其开发策略

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微生物学通报 2023年第11期50卷 5137-5149页

作者：张阳焦敏余远迪付利芝朱买勋重庆市畜牧科学院重庆402460 国家生猪技术创新中心重庆402460 西南大学动物医学院重庆402460

生物被膜是细菌的一种特殊生存方式。生物被膜感染在临床中的高耐药性问题、反复性问题、迁延性问题等是临床中亟待解决的问题。益生菌作为机体共生微生物的一部分,能够通过多种方式对抗病原菌。本文就临床生物被膜治疗中亟待解决的问... 详细信息

生物被膜是细菌的一种特殊生存方式。生物被膜感染在临床中的高耐药性问题、反复性问题、迁延性问题等是临床中亟待解决的问题。益生菌作为机体共生微生物的一部分,能够通过多种方式对抗病原菌。本文就临床生物被膜治疗中亟待解决的问题做出了部分总结,归纳总结了部分益生菌生物被膜对抗病原菌生物被膜的作用机制,而且还从改进益生菌生物被膜研究方法、增强益生菌生物被膜稳定性和开发新型生物被膜态益生菌的角度出发,就如何开发生物被膜态益生菌的策略方法进行了综述。

关键词：生物被膜益生菌生物对抗开发策略

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一测多评法同时测定甘草泻心汤中8种成分

中成药 2022年第5期44卷 1410-1415页

作者：唐红梅翟少钦陈春林闫志强朱买勋重庆市畜牧科学院重庆402460

目的建立一测多评法同时测定甘草泻心汤(甘草、黄芩、黄连等)中姜酮、盐酸黄连碱、甘草素、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、6-姜辣素、甘草酸铵的含量。方法该药物甲醇-乙腈(1∶1)提取液的分析采用Sepax HP-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 m... 详细信息

目的建立一测多评法同时测定甘草泻心汤(甘草、黄芩、黄连等)中姜酮、盐酸黄连碱、甘草素、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、6-姜辣素、甘草酸铵的含量。方法该药物甲醇-乙腈(1∶1)提取液的分析采用Sepax HP-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相[乙腈-甲醇(1∶1)]-0.1%三氟乙酸,梯度洗脱;体积流量0.8 mL/min;柱温25℃;检测波长282 nm。以盐酸小檗碱为内标,计算其他7种成分的相对校正因子,测定其含量。结果8种成分在各自范围内线性关系良好(R^(2)>0.9990),平均加样回收率98.47%~104.17%,RSD 0.94%~1.49%。一测多评法所得结果与外标法接近。结论该方法简便、准确、可靠,可用于甘草泻心汤的质量控制。

关键词：甘草泻心汤化学成分一测多评

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猪粪快速降解微生物的筛选

农业与技术 2022年第1期42卷 110-112页

作者：徐登峰张邑帆杨柳朱买勋重庆市畜牧科学院重庆402460

为筛选猪粪快速降解微生物,试验从猪场堆肥发酵粪污中采集样品,通过实验室分离鉴定筛选候选微生物,经过耐高温试验筛选、淀粉降解试验、明胶液化试验、纤维素降解试验,筛选粪污快速降解微生物。结果显示,实验室筛选到32株不同菌落形态... 详细信息

为筛选猪粪快速降解微生物,试验从猪场堆肥发酵粪污中采集样品,通过实验室分离鉴定筛选候选微生物,经过耐高温试验筛选、淀粉降解试验、明胶液化试验、纤维素降解试验,筛选粪污快速降解微生物。结果显示,实验室筛选到32株不同菌落形态的细菌,有30株细菌可以在30℃的温度下进行生长,只有12株能够耐受50℃高温;12株耐高温细菌中,有7株细菌有水解淀粉的能力,H8菌株的Up值达到7.11;有10株细菌对明胶有液化作用,其降解能力为H8>H5≥H10≥H2>H12≥H3≥H9>H6≥H7≥H1;H2、H3、H5、H8、H10降解纤维素能力较为明显,Up值均超过10,尤其是H8的Up值达到了23.52。从试验结果可以总结得出H8株细菌能耐受高温,有较好的降解淀粉、蛋白质和纤维素的能力,说明该株细菌可以应用于快速降解猪粪。

关键词：猪粪淀粉降解明胶液化纤维素降解

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柔嫩艾美耳球虫感染对鸡盲肠菌群的影响

湖南农业大学学报（自然科学版） 2022年第3期48卷 342-346页

作者：翟少钦闫志强陈春林朱买勋唐红梅付文贵重庆市畜牧科学院重庆402460 重庆市养猪工程技术研究中心重庆402460

将60只健康罗曼粉鸡随机分为正常组和模型组,每组30只,模型组灌服1×10^(4)个孢子化卵囊进行人工复制鸡球虫病模型,正常组灌服等体积生理盐水,感染5 d,剖杀试验鸡,无菌采集鸡盲肠内容物,并通过Illumina PE250型高通量测序仪对肉鸡盲肠... 详细信息

将60只健康罗曼粉鸡随机分为正常组和模型组,每组30只,模型组灌服1×10^(4)个孢子化卵囊进行人工复制鸡球虫病模型,正常组灌服等体积生理盐水,感染5 d,剖杀试验鸡,无菌采集鸡盲肠内容物,并通过Illumina PE250型高通量测序仪对肉鸡盲肠内菌群进行16SrDNA基因V3~V4可变区检测,对肠道菌群可操作分类单元(OTUs)数、α多样性、β多样性及差异菌门与菌属进行综合性分析与评价,探究柔嫩艾美耳球虫感染对鸡盲肠菌群结构和多样性的影响。结果表明:与正常组相比,感染柔嫩艾美耳球虫后鸡肠道菌群的OTUs数、Chao1指数极显著降低,Shannon指数显著降低,Simpson指数显著升高;门水平上,模型组变形菌门的相对丰度极显著升高,而厚壁菌门的相对丰度显著降低,拟杆菌门和柔膜菌门的相对丰度显著降低;属水平上,正常组的优势菌属为拟杆菌属、瘤胃菌属-UCG014、副拟杆菌属,而模型组瘤胃球菌属-uncultured、球藻菌属、埃希菌-志贺菌属相对丰度极显著升高。可见,艾美耳球虫破坏了盲肠菌群的完整性,促进潜在致病菌的建立和生长,尤其使埃希菌-志贺菌属大量繁殖,快速生长。

关键词：罗曼粉鸡柔嫩艾美耳球虫肠道菌群 16S rDNA 多样性相对丰度

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壳聚糖兽用疫苗稀释液的制备及其应用

中国生物制品学杂志 2022年第1期35卷 4-10页

作者：曹政格格其木格徐晓泉翟少钦付文贵朱买勋重庆市畜牧科学院重庆402460 内蒙古阿伊萨畜牧业发展有限公司内蒙古锡林郭勒盟027200 重庆棠城畜牧科技有限公司重庆402460

目的建立一种壳聚糖稀释液的制备方法,并制备一种生物相容性较好、安全性高、可有效提高疫苗免疫效果的兽用疫苗稀释液,以用于草原牧区大规模动物免疫。方法在酸性条件下溶解壳聚糖,向上清中滴加NaOH使已溶解的可溶壳聚糖析出,制备再生... 详细信息

目的建立一种壳聚糖稀释液的制备方法,并制备一种生物相容性较好、安全性高、可有效提高疫苗免疫效果的兽用疫苗稀释液,以用于草原牧区大规模动物免疫。方法在酸性条件下溶解壳聚糖,向上清中滴加NaOH使已溶解的可溶壳聚糖析出,制备再生壳聚糖。用不同pH的0.2 mol/L磷酸-柠檬酸缓冲液、醋酸-醋酸钠缓冲液和磷酸盐缓冲液配制1%~5%的壳聚糖以及再生壳聚糖溶液,并在115℃条件下湿热灭菌。通过溶解特性以及外观等条件筛选最佳缓冲体系。利用不同浓度的可溶壳聚糖稀释液(soluble chitosan diluent,SCD)及再生壳聚糖稀释液(regenerated chitosan diluent,RCD)稀释山羊痘活疫苗,通过免疫山羊后的安全性及ELISA抗体水平筛选最佳稀释液配方,并建立最佳稀释液的制备流程。利用制备的稀释液稀释山羊痘活疫苗及猪瘟活疫苗并免疫动物,检测制备的稀释液的安全性及免疫增强作用。结果筛选得到的最佳稀释液配方及其制备过程为:0.2 mol/L pH 4.0醋酸-醋酸钠缓冲液配制3%浓度的壳聚糖溶液,离心去除杂质后,上清滴加NaOH至沉淀完全析出;收集再生壳聚糖,用0.2 mol/L pH 4.6醋酸-醋酸钠缓冲液配制成2%浓度的再生壳聚糖溶液,115℃湿热灭菌30 min;用1 mol/L无菌醋酸钠溶液调pH至6.0并稀释至终浓度0.5%,即为0.5%pH 6.0的RCD。使用该稀释液配制疫苗,仅免疫1次即可达到其他稀释液配制疫苗免疫2次后的抗体水平,免疫增强作用高于铝胶稀释液,同时具备与生理盐水一致的安全性。结论本研究利用再生壳聚糖制备了性状优良、pH接近中性、生物相容性好的兽用疫苗稀释液。基于壳聚糖良好的抗原吸附及缓释特性,稀释液可在疫苗注射剂量不足的情况下达到理想的免疫效果,较为适合大规模动物免疫时使用。

关键词：可溶壳聚糖再生壳聚糖疫苗稀释液安全性免疫原性

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养殖场科学用药210问

中药复方提取物对IBDV感染SPF鸡抗氧化和抗炎能力的影响

2020年

作者：翟少钦，李成洪，朱买勋

来源：南通市图书馆图书评论

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湖南农业大学学报（自然科学版） 2021年第4期47卷 462-466页

作者：游斌杰翟少钦朱买勋重庆市畜牧科学院重庆荣昌402460

将150羽SPF雏鸡随机分为5组,即对照组(CK)、病毒感染模型组(MC)、中药提取物高、中、低剂量组(T1、T2、T3),T1、T2、T3组试验鸡分别按照10.0、5.0、2.5g/L的剂量在饮水中添加中药提取物(由2∶2∶1∶1质量比的女贞子、黄芪、枸杞子、菟... 详细信息

将150羽SPF雏鸡随机分为5组,即对照组(CK)、病毒感染模型组(MC)、中药提取物高、中、低剂量组(T1、T2、T3),T1、T2、T3组试验鸡分别按照10.0、5.0、2.5g/L的剂量在饮水中添加中药提取物(由2∶2∶1∶1质量比的女贞子、黄芪、枸杞子、菟丝子组成),连续添加7d,CK和MC不添加任何药物,给药完成后,对照组滴鼻生理盐水,其他各组雏鸡分别通过滴鼻接种IBDV,攻毒后连续观察7 d,检测抗氧化指标(T-SOD、GSH-Px、T-AOC、MDA)和炎性因子(NO、TNF-ɑ、IL-1β、IL-6)的分泌量,检测脾淋巴细胞i NOS、NF-κB、MCP-1基因m RNA表达量。结果显示:T1和T2试验鸡抗氧化能力均提高,血清中GSH-Px活力和T-AOC极显著高于MC的(P<0.01),MDA含量显著低于MC的(P<0.05),T2试验鸡血清中T-SOD活力显著高于MC的(P<0.05);T1和T2试验鸡炎症反应明显减少,血清中NO、TNF-ɑ、IL-1β含量均极显著低于MC的(P<0.01),NO和TNF-ɑ含量显著低于T3的(P<0.05),IL-1β含量显著或极显著低于T3的,IL-6含量显著高于T3和MC的(P<0.05);T1和T2试验鸡脾淋巴细胞中i NOS m RNA表达量显著低于MC的(P<0.05),NF-κB和MCP-1 m RNA表达量极显著低于MC的(P<0.01)。表明中药提取物可能通过增强雏鸡的抗氧化能力,促进炎性相关因子的分泌和调节基因表达实现抗炎效果来抵抗IBDV。

关键词： SPF雏鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV) 中药复方提取物抗氧化炎性因子