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中国农业大学学报 2013年第1期18卷 1-9页

作者：杨刚柱未金花吕迅程水红梁静南李学兵中国科学院微生物研究所/中国科学院病原微生物与免疫学重点实验室北京100101 中国科学院微生物研究所/大型仪器中心北京100101

为了构建简单高效的病原微生物分离纯化方法,首先制备了双金属磁性纳米粒子Au-Fe3O4,然后在Au组份的表面修饰了可特异性结合凝集素及病原微生物的的乳糖基(Lac),获得了糖基化磁性纳米粒子Lac-Au-Fe3O4,并进一步研究了Lac-Au-Fe3O4与蓖... 详细信息

为了构建简单高效的病原微生物分离纯化方法,首先制备了双金属磁性纳米粒子Au-Fe3O4,然后在Au组份的表面修饰了可特异性结合凝集素及病原微生物的的乳糖基(Lac),获得了糖基化磁性纳米粒子Lac-Au-Fe3O4,并进一步研究了Lac-Au-Fe3O4与蓖麻凝集素(RCA120)之间的反应及其对RCA120分离效率的影响,结果表明:1)Au-Fe3O4纳米粒子尺寸均一(8+14nm),呈哑铃状,Au和Fe3O4组份分别位于哑铃的两端;2)Lac-Au-Fe3O4具有良好的水溶性和磁学性质,在30min之内可特异性地与RCA120充分结合;3)在外加磁场作用下,Lac-Au-Fe3O4对水溶液中RCA120的分离效率约为70%,可有效分离微量样品(1nmol/L)。通过本实验,笔者对糖基化磁性纳米粒子的制备及其与凝集素的反应有了较为深入的了解,为进一步发展简单、快速的病原微生物分离方法奠定了基础。

关键词：磁性纳米粒子糖基化凝集素病原微生物

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牛磺熊去氧胆酸和熊胆粉对神经炎症的保护效果评价

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中国生物工程杂志 2024年第9期44卷 14-22页

作者：葛紫霏李瑞莲未金花张毓宸杜昱光王倬王冰广西大学医学院南宁530004 中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室生物药制备与递送重点实验室(中国科学院)北京100190

熊胆粉是从黑熊胆囊中提取的一种传统中药,牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)被认为是熊胆粉中发挥活性的主要成分及重要药物质量标准。但TUDCA在熊胆粉中的含量只占20%~30%,这引起了对熊胆粉其他成分功能活性以及其与TUDCA在生物活性上是否存在差... 详细信息

熊胆粉是从黑熊胆囊中提取的一种传统中药,牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)被认为是熊胆粉中发挥活性的主要成分及重要药物质量标准。但TUDCA在熊胆粉中的含量只占20%~30%,这引起了对熊胆粉其他成分功能活性以及其与TUDCA在生物活性上是否存在差异的疑问。探讨熊胆粉和TUDCA对神经炎症的改善作用,分别用不同浓度的TUDCA和熊胆粉对小胶质细胞BV-2进行预处理,再通过脂多糖(LPS)诱导BV-2的炎症反应,通过qRT-PCR和蛋白质印迹法检测BV-2细胞中炎症因子和相关炎症通路中关键蛋白质表达的变化。在动物实验中,分别用TUDCA和熊胆粉连续灌胃处理C57BL/6J小鼠21天,用LPS连续腹腔注射7天,通过对小鼠脑组织病理切片和炎症因子表达水平的检测评价TUDCA和熊胆粉对小鼠神经炎症的抑制作用。实验结果显示,TUDCA和熊胆粉都能有效抑制神经炎症。在相同剂量作用下,TUDCA和熊胆粉在抑制神经炎症的效力没有显著差异,这表明熊胆粉的其他活性成分可能与TUDCA共同在抑制神经炎症过程中发挥了不可替代的作用。因此,熊胆粉中不同成分的具体功效以及它们之间的协同作用关系值得进一步深入研究。研究不仅拓展了对熊胆粉作用机制的认识,也为开发新型抗神经炎症药物提供了有价值的参考。

关键词：熊胆粉牛磺熊去氧胆酸脂多糖神经炎症

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奶牛与水牛初乳中乳寡糖组分比较研究

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生物化学与生物物理进展 2017年第10期44卷 942-948页

作者：孟宪璞焦思明秦胜旗杨贤蓓李建设未金花王倬杜昱光首都医科大学附属北京友谊医院北京100050 中国科学院过程工程研究所北京100190

乳寡糖是由乳汁中含量丰富的固体物质组成.研究结果表明,乳寡糖有提高免疫、益生元及抗感染等作用,已发现与婴儿肠道发育、神经智力发育等多方面关系密切.水牛奶是除牛奶外的第二大奶源,国际上公认其为营养含量高、口感好的优质乳制品,... 详细信息

乳寡糖是由乳汁中含量丰富的固体物质组成.研究结果表明,乳寡糖有提高免疫、益生元及抗感染等作用,已发现与婴儿肠道发育、神经智力发育等多方面关系密切.水牛奶是除牛奶外的第二大奶源,国际上公认其为营养含量高、口感好的优质乳制品,但目前针对水牛乳寡糖的研究多以美洲水牛为研究对象,尚无中国水牛的相关研究.本研究利用固相萃取对已脱脂和除去蛋白质的广西水牛初乳乳汁样品进行纯化,并采用苯胺(aniline,Bn)衍生化试剂对其进行衍生化处理,通过UPLC-ESI-Q-TOF-MS液相质谱进行优化后,对水牛初乳中的寡糖组分进行测定并与牛乳进行了对比,最终测得奶牛初乳中19种及水牛初乳中的9种乳寡糖组分,并对二者的种类及含量进行比较,发现在两种初乳的乳寡糖中,中性糖二糖m/z385.15和中性糖三糖m/z 547.21以及酸性糖m/z 635.23均为其主要寡糖成分,与其他乳寡糖相比含量相对较高.总体而言水牛初乳中的中性寡糖占比比奶牛初乳高,二者中性糖占乳寡糖总量的比例分别为88.88%和63.16%.

关键词：乳寡糖初乳奶牛水牛 UPLC-ESI-Q-TOF-MS

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基于器官芯片模型的功能寡糖吸收、代谢及活性评价

基于器官芯片模型的功能寡糖吸收、代谢及活性评价

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中国生物工程学会第十一届学术年会暨2017年全国生物技术大会

作者：荆柏林程功未金花王倬杜昱光中国科学院过程工程研究所

功能寡糖作为一种低度聚合糖,一般是由2-10个单糖通过糖苷键连接而成,功能寡糖因其生理作用的多样性和特异性而备受关注;不仅对抑制肿瘤转移、抑制肥胖等相关疾病有显著地效果,同时能提高免疫力、促进肠道有益菌群生长。为使这些功能寡...

功能寡糖作为一种低度聚合糖,一般是由2-10个单糖通过糖苷键连接而成,功能寡糖因其生理作用的多样性和特异性而备受关注;不仅对抑制肿瘤转移、抑制肥胖等相关疾病有显著地效果,同时能提高免疫力、促进肠道有益菌群生长。为使这些功能寡糖开发成相应的功能产品,使这些功能产品得到充分利用,对其吸收代谢规律的研究和功能活性的评价就显得尤为重要。但由于动物与人存在根本差异,体外细胞系缺乏生理相关性,使得药物的研发周期长、花费高,功能寡糖的开发也处于瓶颈期。

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抗生素糖修饰与病原细菌菌膜耐药性关系

抗生素糖修饰与病原细菌菌膜耐药性关系

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2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会

作者：王倬未金花刘洪涛杜昱光中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室

＜正＞抗生素普遍应用于医疗、农业及畜牧业。伴随着抗生素的广泛使用,其耐药性问题越来越严重,目前几乎所有抗生素均已发现耐药性。在大多数的人类细菌感染疾病中,病原菌形成菌膜抵御宿主免疫系统和药物治疗,是细菌产生抗生素耐药性的...

＜正＞抗生素普遍应用于医疗、农业及畜牧业。伴随着抗生素的广泛使用,其耐药性问题越来越严重,目前几乎所有抗生素均已发现耐药性。在大多数的人类细菌感染疾病中,病原菌形成菌膜抵御宿主免疫系统和药物治疗,是细菌产生抗生素耐药性的重要原因之一。菌膜是自然界中细菌的常见形态,有助于细菌抵御恶劣环

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壳寡糖抗生素偶联物破坏生物被膜活性及机制研究

壳寡糖抗生素偶联物破坏生物被膜活性及机制研究

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中国生物工程学会第十一届学术年会暨2017年全国生物技术大会

作者：王倬未金花李瑞莲张夏菲杜昱光中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室

伴随抗生素的大量应用,现代医学也面临着两项重大挑战:其一,抗生素耐受菌,尤其是多重耐药菌的高频出现,对抗生素用于疾病治疗的效果产生极大挑战。目前几乎所用抗生素均已发现药物耐受性。而另一方面,易于复发的慢性病原菌感染,也给相... 详细信息

伴随抗生素的大量应用,现代医学也面临着两项重大挑战:其一,抗生素耐受菌,尤其是多重耐药菌的高频出现,对抗生素用于疾病治疗的效果产生极大挑战。目前几乎所用抗生素均已发现药物耐受性。而另一方面,易于复发的慢性病原菌感染,也给相关疾病治疗带来很大困难,往往无法根治。随着相关研究的逐步深入,耐药性感染出现的原因被发现多与病原菌在宿主体内形成有耐药性的生物被膜(Biofilm)相关,根据美国国立卫生研究院2008年报告,超过80%的人类细菌感染与生物被膜相关。生物被膜又称菌膜,是具有特殊微环境的细菌群落及其胞外基质复合体。生物被膜中的细菌可以更好抵御抗生素药物的杀菌效用。研究表明,生物被膜态细菌比游离态细菌对抗生素的抵御能力增强10-1000倍生物被膜。生物被膜极大阻碍了抗生素治疗对细菌感染的影响,针对生物被膜态病原菌的特效治疗药物有待开发。壳聚糖是自然界中唯一带正电荷阳离子的聚糖,其分子由两种单糖组成:葡萄糖胺和N-乙酰氨基葡萄糖。壳寡糖(COS)是壳聚糖的低分子量降解产物。据报道COS具有抗菌作用,且脱乙酰度较高,聚合度较低的COS具有较强的抗菌活性。我们近期使用壳寡糖与链霉素物理混合或化学偶合,研究其清除病原菌成熟生物被膜的效果。实验结果表明,壳寡糖-链霉素混合物和偶合物均可有效清除病原菌成熟生物被膜。COS的抗生物被膜活性与COS的结构有关,包括脱乙酰化程度和聚合度。进一步对COS和链霉素偶合物的抗生物被膜活性机制研究发现,,COS-链霉素偶合物通过干扰药物泵出系统以及调控生物被膜多糖生物合成相关基因的表达水平,发挥其抗生物被膜活性。因此,这项工作提出了治疗顽固性细菌感染的创新策略,初步研究了壳寡糖-抗生素偶合物抑制、清除菌膜机制,为未来进行壳寡糖及其它寡糖修饰抗生素研究及医学应用的可行性提供理论依据。

关键词：壳寡糖抗生素修饰生物被膜耐药性

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猪乳功能寡糖与哺乳期仔猪生长发育水平的相关性研究

猪乳功能寡糖与哺乳期仔猪生长发育水平的相关性研究

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2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会

作者：未金花王倬刘洪涛许青松杜昱光中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室中国科学院大连化学物理研究所生物技术研究部

如何提高仔猪的生长性能是生猪养殖业中面临的首要问题。基于人乳及牛乳的研究表明,乳汁是影响哺乳期动物生长发育的关键因素,而乳汁中功能乳寡糖的组份及含量则是决定婴幼儿健康与否的重要因子之一。与人乳相比,猪乳功能寡糖的研究要...

如何提高仔猪的生长性能是生猪养殖业中面临的首要问题。基于人乳及牛乳的研究表明,乳汁是影响哺乳期动物生长发育的关键因素,而乳汁中功能乳寡糖的组份及含量则是决定婴幼儿健康与否的重要因子之一。与人乳相比,猪乳功能寡糖的研究要远滞后于前者。目前关于猪乳寡糖的种类组成、表达水平、结构解析及功能活性等均不甚清楚,其潜在的作用机制亦为空白。鉴于猪乳寡糖与人乳寡糖的较大差异,深入研究其对仔猪生长发育的影响将具有相当的必要性与紧迫性。针对上述科学问题,本项目旨在通过分析不同猪乳中寡糖的组份及相对含量,建立猪乳的功能寡糖库,并将其与相应仔猪的健康指标相关联,以发现猪乳功能寡糖与仔猪生长性能之间的潜在联系。目前我们对母猪乳汁进行了粗处理、寡糖的柱纯化富集、苯胺衍生以及液质联用分析（见图1）,共发现了55种不同结构的乳寡糖。与之前的研究报道相比,本研究发现了27种新的寡糖结构。此外,我们对比了饲喂壳寡糖添加剂和对照组的母猪乳寡糖,以及产生腹泻仔猪和正常对照组的母猪乳寡糖,分别发现了健康状态下和疾病状态下猪乳寡糖组分的变化（图2）,初步验证了猪乳功能寡糖与仔猪生长发育水平的正相关性。

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O-GlcNAc转移酶降解所致血管内皮炎症反应的研究

O-GlcNAc转移酶降解所致血管内皮炎症反应的研究

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2015中国酶工程与糖生物工程学术研讨会

作者：刘洪涛郑军平李琼瑜王淖未金花杜昱光中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室糖生物工程课题组

目的缺氧所致血管炎症反应的分子机制目前尚不清楚。研究表明,O-乙酰氨基葡萄(O-GlcNAc)转移酶(OGT)在炎症反应中可能起着非常重要的调控作用。本研究旨在探讨OGT在缺氧所致血管内皮炎症反应中的作用。方法缺氧模型细胞为暴露于1%O或氯...

目的缺氧所致血管炎症反应的分子机制目前尚不清楚。研究表明,O-乙酰氨基葡萄(O-GlcNAc)转移酶(OGT)在炎症反应中可能起着非常重要的调控作用。本研究旨在探讨OGT在缺氧所致血管内皮炎症反应中的作用。方法缺氧模型细胞为暴露于1%O或氯化钴(Cobalt,200μg/ml)后的血管内皮细胞。研究发现,缺氧刺激后内皮细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)的蛋白表达迅速上调,相关炎症因子(IL-6、IL-8、MCP-1及E-选择素)在转录及翻译水平上的表达亦显著增加,但OGT的蛋白表达水平则显著下降。反之,当内皮细胞经OGT腺病毒过表达处理后,可有效抵制缺氧所致的炎症反应。进一步研究表明,蛋白酶体抑制剂可逆转缺氧所致的OGT蛋白表达下调,表明蛋白酶体参与了OGT的蛋白降解调控;针对泛素化连接酶β-TrCP1的siRNA干扰可稳定OGT的蛋白表达水平,表明前者可能是介导OGT降解的主要泛素化连接酶。体内实验表明,当小鼠(C57BL/6J)经缺氧处理后,肺组织中的蛋白酶体活性、HIF-1α的蛋白表达水平及炎症反应水平均显著增加,而OGT的蛋白表达水平则明显下调。相反,OGT激活剂葡萄糖胺处理(1 mg/g/d,连续腹腔注射5天)可有效抑制小鼠因缺氧所致的炎症反应。结论上述研究表明,OGT可能是治疗缺氧所致炎症反应的新靶点。

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基于液质联用技术进行头胎和多胎母猪乳寡糖在哺乳期内的变化研究

基于液质联用技术进行头胎和多胎母猪乳寡糖在哺乳期内的变化研究

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中国生物工程学会第十一届学术年会暨2017年全国生物技术大会

作者：未金花王倬 Marefa Jahan 王仲孚 Frederic ATroy II 王冰杜昱光中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室查尔斯特大学格雷厄姆农业创新中心西北大学糖生物学与糖工程研究中心加利福尼夜大学生化和分子医学系戴维斯

游离寡糖是在哺乳动物乳汁中一种非常重要的成分。基于人乳及牛乳的研究表明,乳汁是影响哺乳期动物生长发育的关键因素,而乳汁中功能乳寡糖的组份及含量则是决定婴幼儿健康与否的重要因子之一。猪作为一种非常重要的家畜动物,因其与人...

游离寡糖是在哺乳动物乳汁中一种非常重要的成分。基于人乳及牛乳的研究表明,乳汁是影响哺乳期动物生长发育的关键因素,而乳汁中功能乳寡糖的组份及含量则是决定婴幼儿健康与否的重要因子之一。猪作为一种非常重要的家畜动物,因其与人类在消化系统方面的相似性,同时也是人类生物医学和营养研究的首要模型。然而目前猪乳寡糖(pMO)的研究刚刚起步,特别是对于pMO在哺乳期结构与含量的变化规律,个体间差异的关键影响因素等方面的研究仍比较缺乏。鉴于猪在营养研究方面的重要作用,研究pMO与胎次的关系可以为人类孕婴营养研究提供参考,因而具有相当的必要性。针对上述科学问题,本研究选取了不同胎次(头胎7个和多胎10个)的母猪在不同哺乳阶段(初乳、中乳和末乳)的乳汁样品共51个。我们对母猪乳汁进行了粗处理、寡糖的柱纯化富集、苯胺衍生以及液质联用分析,共发现了55种不同结构的乳寡糖。与之前的研究报道相比,本研究发现了27种新的寡糖结构。对pMO的结构和含量在不同哺乳期和胎次间的变化进行分析后,我们发现随着哺乳期的进行,头胎和多胎pMO存在一些不同:在结构方面,初乳中pMO在不同胎次间的结构数量相似(头胎53 vs.多胎54),而在中乳和末乳中,头胎pMO结构数量迅速减少,其数量显著小于多胎pMO(中乳:头胎48 vs.多胎53;末乳:头胎41 vs.多胎47)。在含量方面,初乳中头胎pMO的总量,包括中性(N-OS)、酸性(S-OS)和岩藻(F-OS)寡糖,高于多胎pMO,但是在中乳和末乳中除了S-OS之外,头胎pMO的含量均少于多胎pMO。这些结果表明,随着哺乳期的进行,相对于头胎pMO在结构和含量上的显著变化,多胎pMO维持得更加稳定。这种pMO在头胎和多胎间的非显著区别也许可以解释在生猪生产中为什么多胎母猪更容易产出健康的仔猪。对于此问题的进一步研究也许有助于阐释为什么人类生产二胎时其健康水平往往更优于头胎。

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硫酸化壳寡糖对猪蓝耳病灭活疫苗的免疫佐剂活性研究

硫酸化壳寡糖对猪蓝耳病灭活疫苗的免疫佐剂活性研究

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中国生物工程学会第十一届学术年会暨2017年全国生物技术大会

作者：贾培媛张贵强未金花程功郑军平刘洪涛杜昱光中国科学院过程工程研究所生化工程国家重点实验室

目的传统兽用疫苗中常用的佐剂有铝盐佐剂和油佐剂。铝盐佐剂存在着细胞免疫很弱,应答反应迟缓,持续时间有限,不能冻干,保存及运输困难,副作用较大等缺点;油佐剂皮下注射会引起炎症、溃疡和肉芽肿,长期潴留于组织中不易代谢。有必要开... 详细信息

目的传统兽用疫苗中常用的佐剂有铝盐佐剂和油佐剂。铝盐佐剂存在着细胞免疫很弱,应答反应迟缓,持续时间有限,不能冻干,保存及运输困难,副作用较大等缺点;油佐剂皮下注射会引起炎症、溃疡和肉芽肿,长期潴留于组织中不易代谢。有必要开发起效早、刺激特异性抗体滴度高、免疫效应持续时间长、安全可靠的新型免疫佐剂。壳寡糖具有分子量低、水溶性好、纯天然、易吸收以及良好的生物相容性,更为值得关注的是它能够有效激活机体细胞免疫和体液免疫,将其开发为疫苗佐剂具有良好的应用前景。研究发现,不同聚合度、不同脱乙酰度的壳寡糖其佐剂活性有所不同。然而硫酸化修饰对壳寡糖疫苗佐剂活性产生影响目前还未见研究报道。本研究旨在测定带有不同个数硫酸根壳寡糖对猪蓝耳病灭活疫苗的免疫佐剂活性,探讨硫酸化修饰与壳寡糖佐剂活性的构效关系,为进一步开发具有良好生物相容性的高效、低毒、经济的疫苗佐剂奠定理论基础。方法通过化学方法获得6-OH选择性修饰的壳寡糖硫酸酯(COSS)及其氨基硫酸化产物(SCOSS),将未经修饰的壳寡糖(COS)、COSS、SCOSS分别与猪蓝耳病灭活疫苗(PRRSV)配伍,以肌肉注射的方式免疫BalB/C小鼠,同时以生理盐水作为空白对照,以单独PRRSV疫苗作为抗原对照,以市售油乳佐剂ISA206作为阳性对照,初次免疫四周后进行加强免疫,试验中共免疫3次,每次免疫两周后ELISA法检测小鼠血清中PRRSV抗体的滴度及亚型、亚类;最后一次免疫两周后MTT法测定免疫小鼠脾脏淋巴细胞增殖反应,ELISA试剂盒测定鼠脾脏淋巴细胞分泌的IL-4、IFN-γ、TNF-α的含量。结果加强免疫后,COS、COSS、SCOSS和ISA206均能显著提高免疫小鼠血清中PRRSV抗体的滴度,其中SCOSS对抗体滴度的增强作用明显强于COSS和COS,但其作用比ISA206较弱;MTT法的结果表明,与ISA206油乳佐剂相比较,COSS、SCOSS均能明显增强免疫小鼠脾脏T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖反应;SCOSS促进免疫小鼠脾脏细胞分泌IL-4分泌的作用强于ISA206;COSS、SCOSS和ISA206均可以明显促进免疫小鼠脾脏细胞分泌IFN-γ和TNF-α,其中SCOSS对IFN-γ分泌的促进作用强于ISA206。结论硫酸化修饰可以增强壳寡糖对猪蓝耳病灭活疫苗的佐剂活性,硫酸根数目较多的壳寡糖佐剂活性更好,可以作为该疫苗的新型免疫佐剂进行应用开发。

关键词：壳寡糖硫酸酯猪蓝耳病疫苗免疫佐剂

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