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抗丝状支原体丝状亚种单克隆抗体的制备及竞争ELISA抗体检测方法的初步建立

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抗丝状支原体丝状亚种单克隆抗体的制备及竞争ELISA抗体检测方法...

作者：曾金红中国农业科学院

学位级别：硕士

牛传染性胸膜肺炎(Contagious bovine pleuropneumonia,CBPP)是由丝状支原体丝状亚种(Mycoplasma mycoides ***,Mmm)引起的一种感染性和高度传染性的牛呼吸道疾病。由于它能迅速传播并导致牲畜大量死亡而造成重大经济损失,被世界动物卫... 详细信息

牛传染性胸膜肺炎(Contagious bovine pleuropneumonia,CBPP)是由丝状支原体丝状亚种(Mycoplasma mycoides ***,Mmm)引起的一种感染性和高度传染性的牛呼吸道疾病。由于它能迅速传播并导致牲畜大量死亡而造成重大经济损失,被世界动物卫生组织(OIE)列为“A”类传染病中唯一需要紧急报告的细菌性疾病。该病于20世纪末在我国成功消灭,为保持我国CBPP无疫状态,每年都在全国重点地区开展CBPP血清学监测。但目前我国尚无可用的国产化检测试剂,一直依赖进口试剂盒,来源受限且成本较高。为提高我国对CBPP的诊断和监测能力,本研究拟建立一种特异、敏感、快速的CBPP竞争ELISA抗体检测方法,为我国CBPP大规模监测和应急防控提供一种经济有效的技术手段。基于本团队前期测序获得的Mmm Ben-1株的5个不同传代株的全基因组序列,通过比较不同代次菌株的基因组差异,筛选发现13个差异膜蛋白。本研究选取Mmm 0071(M0071)蛋白作为研究对象,将原核表达、纯化的可溶性重组蛋白M0071(r M0071)作为免疫抗原,筛选获得抗Mmm的特异性单克隆抗体(Monoclonal antibody,MAb),并以HRP标记的酶标单抗作为竞争抗体,建立了一种特异的、敏感的检测CBPP抗体的竞争ELISA方法,主要结果如下:1.抗Mmm特异性单克隆抗体的制备和筛选成功构建p ET-32a-M0071重组质粒,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)获得可溶性表达,将制备的具有良好免疫反应性的r M0071蛋白免疫BALB/c小鼠。细胞融合后,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆和有限稀释法亚克隆,成功获得1株针对r M0071蛋白的特异性阳性杂交瘤细胞株,将其分泌的抗体命名为MAb 3C4A1。进一步制备腹水并纯化,获得腹水单抗,抗体效价为1:1.28×10～5。2.单克隆抗体MAb 3C4A1的鉴定经鉴定MAb 3C4A1属于Ig G1亚类、轻链为κ链。Western blot分析显示该单抗仅与Mmm发生特异性反应,而不与山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体、leachii支原体以及牛A型巴氏杆菌等发生反应。将其应用于间接免疫荧光试验(IFA)可成功检测出感染EBL细胞的Mmm,表明该单抗具有良好的特异性和反应性,可作为Mmm诊断的检测抗体。3.竞争ELISA(c ELISA)抗体检测方法的建立及性能评估通过条件优化,建立了以2μg/m L的r M0071蛋白作为包被抗原,以1:2000稀释的HRP标记MAb 3C4A1作为检测抗体的CBPP竞争ELISA抗体检测方法。通过检测已确定的578份临床牛血清,确定该方法的cut-off值为44.77%。检测经IDEXX-c ELISA测定的CBPP阴性血清(500份)和CBPP阳性血清(70份),确定了该方法的特异性为97.6%,敏感性为81.4%。该方法与其他8种常见的牛源性呼吸道疾病的标准阳性血清,包括牛传染性鼻气管炎、牛病毒性腹泻、牛结核、牛副结核、牛支原体、无乳支原体、牛鼻支原体、leachii支原体等无交叉反应。此外,该方法对阳性血清的最小检出量为1:160,灵敏度较高;批内、批间变异系数均小于10%,重复性良好。利用该方法对商品化c ELISA试剂盒检出的46份阳性血清样品和1362份阴性血清样品进行检测,阳性符合率为80.43%,阴性符合率为94.13%,总体符合率为93.68%。综上所述,本研究成功制备抗Mmm特异性单克隆抗体MAb 3C4A1,并基于该单抗建立了检测CBPP抗体的竞争ELISA方法,该方法特异性良好,可为我国CBPP检测及流行病学监测提供一种经济有效的技术手段。

关键词：丝状支原体丝状亚种 M0071蛋白单克隆抗体竞争ELISA 抗体检测

兰索拉唑为主三联疗法治疗胃溃疡患者效果及对血清胃泌素的影响

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基层医学论坛 2022年第32期26卷 10-12页

作者：陈欣曾金红新干县人民医院江西新干331300

目的探究兰索拉唑为主三联疗法治疗胃溃疡患者的效果及对血清胃泌素的影响。方法采用信封法将新干县人民医院2018年2月—2021年2月收治的60例胃溃疡患者分为对比组和研究组,研究组30例,采用兰索拉唑联合阿莫西林、克拉霉素治疗;对比组30... 详细信息

目的探究兰索拉唑为主三联疗法治疗胃溃疡患者的效果及对血清胃泌素的影响。方法采用信封法将新干县人民医院2018年2月—2021年2月收治的60例胃溃疡患者分为对比组和研究组,研究组30例,采用兰索拉唑联合阿莫西林、克拉霉素治疗;对比组30例,采用奥美拉唑联合阿莫西林、克拉霉素治疗。对比2组患者临床治疗效果、溃疡面积、症状改善时间、血清胃泌素、相关因子表达[血管活性肠肽(VIP)、表皮生长因子(EGF)、血管内皮生长因子(VEGF)]以及不良反应发生率。结果治疗前2组患者溃疡面积、临床症状评分、血清胃泌素水平、VIP、EGF、VEGF水平差异无统计学意义(P>0.05);治疗后研究组治疗总有效率较对比组更高,且溃疡面积更小,炎症消退时间、胃痛消退时间、住院时间更短,血清胃泌素水平更低,VIP、EGF、VEGF水平更高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论兰索拉唑为主三联疗法可有效提高胃溃疡患者的临床治疗效果,促进症状康复,降低胃泌素水平,促进胃黏膜修复,且安全性高,值得临床推广。

关键词：胃溃疡三联疗法兰索拉唑血清胃泌素治疗效果

抗丝状支原体丝状亚种单克隆抗体的制备及初步应用

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畜牧兽医学报 2022年第7期53卷 2290-2299页

作者：曾金红徐青元沙玮萍吴爽李媛辛九庆王秀梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室哈尔滨150069

旨在制备抗丝状支原体丝状亚种(Mmm)的特异性单克隆抗体(MAb),为牛传染性胸膜肺炎(CBPP)病原诊断的免疫学方法提供特异性抗体。本研究利用生物信息学技术分析了Mmm国内分离株Ben-1不同传代株的全基因组序列,选取M0071蛋白作为研究对象... 详细信息

旨在制备抗丝状支原体丝状亚种(Mmm)的特异性单克隆抗体(MAb),为牛传染性胸膜肺炎(CBPP)病原诊断的免疫学方法提供特异性抗体。本研究利用生物信息学技术分析了Mmm国内分离株Ben-1不同传代株的全基因组序列,选取M0071蛋白作为研究对象。将原核表达的可溶性重组蛋白M0071(rM0071)作为免疫原免疫BALB/c小鼠,通过有限稀释法和间接ELISA方法筛选得到能稳定分泌抗rM0071蛋白的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。进一步制备单抗腹水并纯化,利用Western blot方法对该单抗进行特异性鉴定,同时测定其抗体效价和抗体亚类。随后利用间接免疫荧光试验(IFA)评价该单抗对细胞感染Mmm的检测能力。结果表明成功获得1株单克隆细胞株3C4A1,将其分泌抗体命名为MAb 3C4A1。特异性结果表明,MAb 3C4A1能与Mmm的分离株和标准株发生特异性反应,而不与山羊支原体山羊肺炎亚种、丝状支原体山羊亚种、牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体、leachii支原体和牛A型巴氏杆菌等发生反应。抗体亚类鉴定MAb 3C4A1属于IgG1亚类、轻链为κ链。经间接ELISA测定其抗体效价为1∶256000。IFA试验结果表明,MAb 3C4A1仅与感染EBL细胞的Mmm发生绿色荧光反应,而与牛鼻支原体、无乳支原体、牛支原体感染的细胞不发生荧光反应,特异性良好。本研究制备的MAb 3C4A1具有良好的特异性和免疫反应性,可作为CBPP病原免疫学诊断的工具,为进一步研制CBPP病原鉴别诊断试剂盒提供了基础材料。

关键词：丝状支原体丝状亚种 M0071蛋白单克隆抗体间接免疫荧光检测

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硒蛋白S的生物学功能

化学进展 2009年第7期21卷 1494-1499页

作者：曾金红张功臣黄开勋华中科技大学化学系武汉430074

硒蛋白S是一种新发现的内质网和细胞膜驻留硒蛋白。以往的研究结果揭示硒蛋白S可以保护细胞拮抗氧化损伤及内质网应激诱导的细胞凋亡;参与脂蛋白代谢、精子发育过程、炎症反应及将错误折叠蛋白从内质网腔逆向转移到细胞质中然后降解的过... 详细信息

硒蛋白S是一种新发现的内质网和细胞膜驻留硒蛋白。以往的研究结果揭示硒蛋白S可以保护细胞拮抗氧化损伤及内质网应激诱导的细胞凋亡;参与脂蛋白代谢、精子发育过程、炎症反应及将错误折叠蛋白从内质网腔逆向转移到细胞质中然后降解的过程(即内质网相关蛋白降解)。硒蛋白S基因多态性与糖尿病、冠状动脉心脏病或先兆子痫等疾病密切相关。本文结合本课题组的工作对硒蛋白S的最新研究进展,尤其是硒蛋白S功能的研究成果作了较为详细的介绍,并对未来的研究方向作了展望。

关键词：硒蛋白S 氧化损伤内质网应激炎症

传统手工黄酒发酵过程中常见游离氨基酸和γ-氨基丁酸的变化研究

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中国食品学报 2017年第5期17卷 232-238页

作者：龚金炎单之初潘兴祥黄俊毛建卫曾金红李博斌浙江大学生物系统工程与食品科学学院杭州310029 浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室浙江科技学院生物与化学工程学院杭州310023 绍兴市质量技术监督检测院浙江绍兴312002 浙江塔牌绍兴酒有限公司浙江绍兴312032

本文研究传统手工黄酒发酵过程中常见游离氨基酸、γ-氨基丁酸以及总糖、酒精度和总酸的变化过程。结果表明,传统手工黄酒发酵过程中常见游离氨基酸和γ-氨基丁酸在前发酵和后发酵前期增加缓慢,在后发酵后期增加迅速;总糖在前发酵期间... 详细信息

本文研究传统手工黄酒发酵过程中常见游离氨基酸、γ-氨基丁酸以及总糖、酒精度和总酸的变化过程。结果表明,传统手工黄酒发酵过程中常见游离氨基酸和γ-氨基丁酸在前发酵和后发酵前期增加缓慢,在后发酵后期增加迅速;总糖在前发酵期间下降明显,后发酵期间先上升后缓慢下降;酒精度和总酸在前发酵结束时已达到发酵终点的一半左右,随后均缓慢上升。随着后发酵时间的延长,总糖不断下降,酒精度和总酸不断增加,发酵醪中的酵母不断发生自溶,导致常见游离氨基酸和γ-氨基丁酸含量迅速增加。后发酵结束时,发酵醪中GABA 120.555 mg/L,游离必需氨基酸2 825.656 mg/L,游离总氨基酸7 397.065 mg/L,总糖(葡萄糖计)6.757g/L,酒精度18.417%,总酸(乳酸计)6.16 g/L。

关键词：游离氨基酸 γ-氨基丁酸手工黄酒

冠心病合并糖尿病患者的血脂水平观察及临床意义研究

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中国实用医药 2022年第20期17卷 29-32页

作者：彭友海李忠萧飞曾金红陶庆枢东莞市石排医院检验科 523330 广东省茂名市人民医院检验科 525000

目的观察冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,CAD)合并糖尿病(DM)患者的血脂水平,并分析其临床意义。方法100例CAD患者,根据是否合并DM分为单纯CAD组和CAD合并DM组,每组50例。比较两组患者血脂指标[总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL... 详细信息

目的观察冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病,CAD)合并糖尿病(DM)患者的血脂水平,并分析其临床意义。方法100例CAD患者,根据是否合并DM分为单纯CAD组和CAD合并DM组,每组50例。比较两组患者血脂指标[总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)]、血糖指标(空腹血糖)、炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)]和心功能指标[左房内径(LAD)、右房内径(RAD)、左室射血分数(LVEF)];分析CAD合并DM患者血脂指标与血糖指标、炎症因子、心功能指标的相关性。结果CAD合并DM组患者的TC(5.88±1.35)mmol/L、LDL-C(2.45±0.63)mmol/L、TG(1.38±0.32)mmol/L、空腹血糖(6.98±1.34)mmol/L高于单纯CAD组患者的(4.01±1.02)、(1.83±0.34)、(0.99±0.13)、(4.71±1.02)mmol/L,HDL-C(1.08±0.27)mmol/L低于单纯CAD组患者的(1.41±0.59)mmol/L,差异具有统计学意义(P<0.05)。CAD合并DM组患者的TNF-α(28.45±4.02)ng/L、IL-1β(11.53±2.07)pg/ml高于单纯CAD组患者的(10.38±3.15)ng/L、(5.42±0.98)pg/ml,差异具有统计学意义(P<0.05)。CAD合并DM组患者的LAD(30.92±3.11)mm、RAD(28.10±3.24)mm长于单纯CAD组患者的(22.45±2.04)、(20.12±2.15)mm,LVEF(52.02±3.46)%低于单纯CAD组患者的(58.34±3.01)%,差异具有统计学意义(P<0.05)。CAD合并DM患者的TC、LDL-C、TG水平与TNF-α、IL-1β水平呈正相关(P<0.05),HDL-C与TNF-α、IL-1β水平呈负相关(P<0.05)。结论CAD合并DM患者的TC、LDL-C、TG水平较高,HDL-C水平较低,且与患者炎症因子TNF-α、IL-1β水平相关。

关键词：冠状动脉粥样硬化性心脏病糖尿病血脂心功能炎症因子相关

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浅析金融经济分析中经济数学的应用

吉林广播电视大学学报 2015年第4期 7-8页

作者：曾金红延安大学经管学院陕西延安716000

近年来,现代金融经济飞速发展,经济数学作为重要的分析工具,在金融经济领域中发挥着十分重要的作用。为更好地适应现代金融经济的发展趋势,通过经济定性与定量相结合,快速高效地解决金融经济分析的实际问题,从而有效地预测和规避金融市... 详细信息

近年来,现代金融经济飞速发展,经济数学作为重要的分析工具,在金融经济领域中发挥着十分重要的作用。为更好地适应现代金融经济的发展趋势,通过经济定性与定量相结合,快速高效地解决金融经济分析的实际问题,从而有效地预测和规避金融市场经营与发展风险,将经济学理论及其研究成果精准地表达出来,确保金融市场与环境的安全性,需要合理地使用经济数学,根据金融市场实际情况,采用不同的经济分析方式,从而更加快速准确地解决金融经济问题,实现资产合理配置,积极促进我国金融市场稳步向前。

关键词：金融经济经济数学应用

加强护理安全管理对提高乡镇基层卫生院护理质量的效果分析

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2021年第9期 67-68页

作者：曾金红广西贺州市钟山县清塘中心卫生院广西贺州542617

对乡镇基层卫生院患者加强安全管理,比较具体护理质量。方法:选取护理人员共计人数10例,采取数字随机分组法进行分组,每组5例。试验组采用安全管理模式,随后比较综合评分(护理技能、观察判断、应变能力以及思维能力、沟通能力),并对安... 详细信息

对乡镇基层卫生院患者加强安全管理,比较具体护理质量。方法:选取护理人员共计人数10例,采取数字随机分组法进行分组,每组5例。试验组采用安全管理模式,随后比较综合评分(护理技能、观察判断、应变能力以及思维能力、沟通能力),并对安全管理效果评定分析。结果:试验组护理人员中护理技能、观察判断、应变能力以及思维能力、沟通能力整体评分优于常规组,二组护理综合能力评分有统计学差异(P<0.05)。对于试验组护理人员参与意识、医院感染消除、满意度、分析能力优于常规组(P<0.05) 。结论:采用护理安全管理能够提升基层卫生院护理质量,效果显著。

关键词：安全护理安全应用研究老年患者

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浅谈我国企业财务风险与防范对策

赤峰学院学报（自然科学版） 2015年第18期31卷 108-109页

作者：曾金红延安大学陕西延安716000

随着时代的发展,全球经济一体化趋势逐步加强,中国积极的参与国际竞争与合作,对于企业而言是一把双刃剑,既是难得的机遇也面临着严峻的考验.在一个企业中财务风险问题是需要企业管理者高度重视的,面对风云诡谲的复杂环境,只有对财务风... 详细信息

随着时代的发展,全球经济一体化趋势逐步加强,中国积极的参与国际竞争与合作,对于企业而言是一把双刃剑,既是难得的机遇也面临着严峻的考验.在一个企业中财务风险问题是需要企业管理者高度重视的,面对风云诡谲的复杂环境,只有对财务风险具有良好的把控力,并防患于未然做好各种防范措施,才能为企业在激烈的市场竞争中生存与发展奠定基础.本文对企业财务风险相关概念加以阐释,并深入剖析企业财务风险的成因,最后提出行之有效的防范对策.

关键词：企业财务财务风险成因:防范对策