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作者：曾繁浩昆明医科大学

学位级别：硕士

[目的]本研究旨在分析RPS15A基因在前列腺癌细胞DU-145、PC3、LNCAP三株细胞中的表达;研究RPS15A基因在裸鼠皮下移植瘤生长中的作用;揭示RPS15A基因对前列腺癌细胞周期的影响及作用机制;并初步探讨RPS15A抑制前列腺癌细胞凋亡的相关分... 详细信息

[目的]本研究旨在分析RPS15A基因在前列腺癌细胞DU-145、PC3、LNCAP三株细胞中的表达;研究RPS15A基因在裸鼠皮下移植瘤生长中的作用;揭示RPS15A基因对前列腺癌细胞周期的影响及作用机制;并初步探讨RPS15A抑制前列腺癌细胞凋亡的相关分子机制。有助于进一步了解RPS15A在前列腺癌发生发展中的作用。[方法]1.RT-qPCR检测RPS15A在前列腺癌细胞DU-145、PC3、LNCAP细胞系中的表达,分析比较其表达水平在三株细胞中的差异。2.实验分成两组,对照组（感染阴性对照慢病毒,RPS15A基因未敲低组,sh Ctrl组）,实验组（感染RPS15A基因靶点慢病毒,RPS15A基因敲低组,sh RPS15A组）。利用携带GFP荧光的DU-145细胞构建BALB/C裸鼠皮下移植瘤模型进行动物实验,监测肿瘤生长过程中重量、体积的变化情况,绘制肿瘤生长曲线并进行裸鼠活体成像实验;取裸鼠瘤体组织进行免疫组化染色,观察Ki-67表达情况。3.流式细胞术检测RPS15A基因被敲低后前列腺癌细胞DU-145的细胞周期变化情况。4.敲低RPS15A基因的表达后,WB实验检测DU-145细胞中相关细胞周期蛋白的变化。5.磷酸化激酶芯片和WB实验检测敲低RPS15A基因的表达后,前列腺癌细胞DU-145中蛋白磷酸化水平的变化情况。6.敲低RPS15A基因的表达后,凋亡抗体芯片检测前列腺癌细胞DU-145中凋亡相关基因的表达。7.WB实验检测调控凋亡相关信号通路PI3K/AKT中通路蛋白的表达变化。[结果]1.RT-qPCR结果显示,RPS15A基因在前列腺癌细胞DU-145、PC3、LNCAP三株细胞中的表达无差异,P＞0.05。2.BALB/C裸鼠皮下成瘤实验结果显示,抑制RPS15A基因的表达后,与shCt rl组裸鼠皮下移植瘤的质量相比,shRPS15A组中的裸鼠瘤体质量明显减少（P＜0.001）,肿瘤的生长速度下降明显;裸鼠活体成像实验结果显示,shR PS15A组中裸鼠瘤体区域内总荧光表达量明显减少,P＜0.001;观察裸鼠瘤体组织免疫组化染色结果,显示shRPS15A组中Ki-67的核染百分比明显减少。3.RPS15A基因表达被RNA干扰后,流式细胞术检测前列腺癌细胞DU-145的细胞周期变化,结果显示,与shCtrl组相比,shRPS15A组的G1期细胞占比无明显变化（P＞0.05）,S期细胞占比明显下降（P＜0.05）,G2期细胞占比明显增多（P＜0.05）。4.WB实验检测DU-145细胞相关细胞周期蛋白CCNB1和周期蛋白依赖性激酶CDK6的表达,结果显示,同shCtrl组相比,shRPS15A组中CCNB1和CDK6蛋白的表达显著降低。5.磷酸化激酶芯片检测前列腺癌细胞DU-145中蛋白磷酸化的结果显示,RNA干扰 RPS15A 基因后,CREB（S133）、GSK-3α/β（S21/S9）、GSK-3β（S9）、STA T3（S727）、Lck（Y394）、Lyn（Y397）、PRAS40（T246）、PDGF Rβ（Y751）、PLC-γl（Y783）、PYK2（Y402）、RSK1/2（S221/S227）、RSK1/2/3（S380/S386/S377）、STAT5a/b（Y694/Y699）、WNK1（T60）和p53（S392）等蛋白的磷酸化水平显著降低,P＜0.05。6.凋亡抗体芯片检测前列腺癌细胞DU-145中Human Apoptosis信号通路中相关基因的表达,结果显示,RNA干扰RPS15A基因后,基因Bcl-2、CD40、HSP27、HSP60、IGF-I、sTNF-R1、TNF-α、TNF-β、TRAILR-3、XIAP 的表达明显减少,P＜0.05。7.WB实验检测DU-145细胞中PI3K/AKT通路中蛋白的表达,结果显示,相比shCtrl组,shRPS15A组中AKT蛋白的磷酸化水平及PIK3CA蛋白表达下降,但AKT蛋白无明显变化。[结论]本研究发现,RPS15A在前列腺癌发生发展中发挥着重要作用。敲低RPS15 A的表达能够抑制前列腺癌细胞DU-145在裸鼠皮下移植瘤实验中肿瘤的生长。对于RPS15A促进前列腺癌细胞的增殖机制研究中发现,敲低RPS15A基因的表达后,可通过抑制CREB蛋白和GSK-3α/β蛋白的磷酸化水平来调节前列腺癌细胞DU-145的细胞周期蛋白的表达,使得前列腺癌细胞DU-145的细胞周期阻滞在G2/M期。同时,敲低RPS15A基因的表达后能够抑制前列腺癌细胞DU-145中PI3K/AKT信号通路中PI3KCA蛋白的表达以及抑制AKT蛋白的磷酸化水平来促进前列腺癌细胞DU-145的凋亡。

关键词：前列腺癌 RPS15A 细胞周期细胞凋亡

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外泌体在膀胱癌诊断和治疗中的应用及研究进展

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现代肿瘤医学 2023年第21期31卷 4078-4082页

作者：倪茂张克曾繁浩李祥孟唐振华颜汝平昆明医科大学第二附属医院泌尿外科云南昆明650101

外泌体是一种直径约为30~200纳米的分泌性细胞器,它具有与细胞相同的拓扑结构,富含蛋白质、脂类、核酸等。外泌体分布在人体体液中,如血液和尿液。大量研究表明,外泌体在细胞间通讯中发挥着不可忽视的作用,并参与了多种癌症的发展,包括... 详细信息

外泌体是一种直径约为30~200纳米的分泌性细胞器,它具有与细胞相同的拓扑结构,富含蛋白质、脂类、核酸等。外泌体分布在人体体液中,如血液和尿液。大量研究表明,外泌体在细胞间通讯中发挥着不可忽视的作用,并参与了多种癌症的发展,包括癌症的侵袭和转移。其中,外泌体也在膀胱癌的发展中发挥重要作用,研究发现,外泌体可通过各种途径来影响膀胱癌的增殖、侵袭、转移等恶性生物学行为,并有可能成为膀胱癌早期诊断和治疗中的一种新的生物标志物。本文就外泌体在膀胱癌诊断和治疗中的应用及研究进展作一综述。

关键词：外泌体膀胱癌诊断治疗新型生物标志物

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176例泌尿系结石成分特点及临床特征分析

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中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生 2022年第9期 180-184页

作者：李朝阳曹正国钟苏权曾繁浩广东医科大学第一临床学院广东湛江524000 广东省韶关市粤北人民医院泌尿外科广东韶关512000

分析韶关市泌尿系结石成分及临床特征的关系,为本市泌尿系结石的诊断、治疗及预防复发提供临床医学参考资料。方法选取2021年12月至2022年4月在本院收治的176例泌尿系结石患者的结石,均采用红外线光谱分析仪分析成分。根据患者的临床... 详细信息

分析韶关市泌尿系结石成分及临床特征的关系,为本市泌尿系结石的诊断、治疗及预防复发提供临床医学参考资料。方法选取2021年12月至2022年4月在本院收治的176例泌尿系结石患者的结石,均采用红外线光谱分析仪分析成分。根据患者的临床特征及参数分析与结石成分之间的关系。结果共5类结石;患者主要分布于30~59年龄段,尿酸结石随年龄增大占比逐渐增高(P<0.05);男女发病率比约为1.9:1,女性患者无水尿酸结石、草酸钙结石患病率低于男性,女性患者碳酸磷灰石患病率高于男性患者(P<0.05);草酸钙结石的发病率最高(56.82%);武江区地区的结石患病人数最多(42.05%);肾结石数量最多(57.39%);尿液呈酸性患者中草酸钙结石及无水尿酸结石比例较高;尿液呈碱性、尿路感染和血脂异常患者中碳酸磷灰石比例较高。结论通过分析本市尿路结石成分及临床特征,为本市泌尿系结石的诊断、治疗及预防复发提供临床医学参考资料。

关键词：泌尿系结石结石成分分析年龄性别生化指标

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荧光膀胱镜在尿路上皮膀胱癌中的诊断价值

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现代肿瘤医学 2023年第14期31卷 2699-2702页

作者：李祥孟曾繁浩唐振华倪茂夏成兴杨德林王剑松颜汝平昆明医科大学第二附属医院泌尿外科云南昆明650101

目的:评估以5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)作为荧光剂的荧光膀胱镜检查对非肌层浸润性膀胱癌的诊断价值。方法:按照筛除纳入标准,纳入97名研究对象,膀胱灌注50 mL浓度为3%的5-ALA溶液,保留1小时后,排空膀胱后置入膀胱镜... 详细信息

目的:评估以5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)作为荧光剂的荧光膀胱镜检查对非肌层浸润性膀胱癌的诊断价值。方法:按照筛除纳入标准,纳入97名研究对象,膀胱灌注50 mL浓度为3%的5-ALA溶液,保留1小时后,排空膀胱后置入膀胱镜,分别在普通白光和荧光下观察,对白光和/或荧光下显示阳性或可疑区域取组织做病理活检,同时行电切术。结果:97例患者中,19例患者普通白光膀胱镜及荧光膀胱镜下检查均为阴性,剩余78例患者取156处组织进行活检,平均每例患者取2块组织。结果显示97处病理报告为尿路上皮癌。经计算得出荧光膀胱镜的敏感性为91.75%(89/97),特异性为64.41%(38/59);普通白光膀胱镜的敏感性为71.13%(69/97),特异性55.93%(33/59);P<0.05,差异具有统计学意义。结论:荧光膀胱镜在诊断尿路上皮膀胱癌上的敏感性和特异性均显著高于普通白光膀胱镜,具有较高的临床应用价值。

关键词：荧光膀胱镜光动力学诊断非肌层浸润性膀胱癌

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从“跟不上世界潮流”所想到的

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中国陶瓷 1962年第4期 27-29页

作者：曾繁浩

从朋友处听到一些关于外销日用瓷的意见。认为在造型设计和纹样装饰方面:陈旧不新,跟不上世界的潮流。这个提法似乎拢统一些,但是确值我们从事陶瓷生产工作,特别是搞陶瓷艺术工作的同志们深思熟虑的,我就这个意见,有一些想法,但很片断,

关键词：陶瓷艺术消费者制瓷工艺世界潮流日用瓷陶瓷制品西方生活方式

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无底柱分段崩落法悬顶下出矿方案的实践

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金属矿山 1980年第1期 29-31页

作者：王佐栋齐振宇曾繁浩齐俊秀河北古冶矾土矿技术科河北古冶矾土矿开平采区

我矿开平采区系生产硬质耐火粘土矿的一座中小型矿井,于1968年正式投产。井下有A、A0两层矿体分别进行开采。其矿量各占50％左右。我矿对A0层矿体正式规划开采还算首次。在这种急倾斜、薄矿体、顶板不稳固的地质条件下进行开采,我们毫... 详细信息

我矿开平采区系生产硬质耐火粘土矿的一座中小型矿井,于1968年正式投产。井下有A、A0两层矿体分别进行开采。其矿量各占50％左右。我矿对A0层矿体正式规划开采还算首次。在这种急倾斜、薄矿体、顶板不稳固的地质条件下进行开采,我们毫无经验,就沿用了在A层矿体所使用的浅孔留矿法,结果是矿石回采率低,质量波动大等。十余年来,虽经改革,但矿石回采率在二水平也仅达50.6％。这就引起了要改变这种采矿方法的强烈愿望。为

关键词：无底柱分段崩落法端部放矿分段崩落法薄矿体悬顶矿石回采率浅孔留矿法无底柱分段崩落采矿法溜矿井顶板管理

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LncRNA在膀胱癌发生发展中的作用机制及其应用研究进展

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山东医药 2020年第16期60卷 88-91页

作者：曾繁浩雷容张克李祥孟颜汝平昆明医科大学第二附属医院昆明650000

近年来,由于膀胱癌的发病率逐年攀升,已成为泌尿系常见的肿瘤之一。长链非编码RNA(LncRNA)能够干扰细胞的生长周期、参与各种信号通路以及诱导细胞的增殖、侵袭、迁移,从而介导膀胱癌的发生发展。因此可将LncRNA应用于膀胱癌的诊断、治... 详细信息

近年来,由于膀胱癌的发病率逐年攀升,已成为泌尿系常见的肿瘤之一。长链非编码RNA(LncRNA)能够干扰细胞的生长周期、参与各种信号通路以及诱导细胞的增殖、侵袭、迁移,从而介导膀胱癌的发生发展。因此可将LncRNA应用于膀胱癌的诊断、治疗及预后监测中。lncRNA可作为诊断膀胱癌及其预后监测的无创生物学标记物,采用多种lncRNA联合检测的方式,可大大提高诊断的精确性及特异度;根据其在膀胱癌发病中的分子机制作为治疗的靶点。

关键词：膀胱癌长链非编码RNA 生物学标记物

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负压吸引鞘在感染性肾结石PCNL术中的应用体会

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云南医药 2021年第5期42卷 407-409,433页

作者：曾繁浩颜汝平张克李祥孟昆明医科大学第二附属医院泌尿外科二病区云南昆明650101

目的分析负压吸引鞘在经皮肾镜取石术中治疗感染性肾结石的安全性和有效性。方法回顾性分析260例行经皮肾镜治疗感染性肾结石的患者的临床资料,将患者分为2组,负压吸引鞘组(A组)和Peel-away组(B组),比较2组结石清除率、手术时长、术后发... 详细信息

目的分析负压吸引鞘在经皮肾镜取石术中治疗感染性肾结石的安全性和有效性。方法回顾性分析260例行经皮肾镜治疗感染性肾结石的患者的临床资料,将患者分为2组,负压吸引鞘组(A组)和Peel-away组(B组),比较2组结石清除率、手术时长、术后发热(T>38.5℃)情况、炎症指标(白细胞、感染三项)、术后住院时间。结果手术时长A组(40.2±2.1)min,B组(60.7±3.6)min;A组住院时间(5.4±0.7)d,B组(6±0.9)d;术后发热A组9例,B组23例;术后A组炎症指标均低于B组;A组结石清除率为97.1%,B组结石清除率为90.3%。差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论负压吸引鞘在经皮肾镜治疗感染性肾结石中,具有安全、有效、结石清除率高、手术时间短、术后并发症少、术后恢复快等优点,具有很高的临床应用价值,值得在临床推广。

关键词：感染性肾结石经皮肾镜取石术负压吸引

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mTOR在膀胱癌治疗中的研究进展

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医学综述 2021年第8期27卷 1523-1527,1533页

作者：曾繁浩雷容张克李祥孟夏成兴颜汝平昆明医科大学第二附属医院泌尿外科昆明650101

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其相关通路作为膀胱癌治疗的新靶点之一,正逐渐受到关注。作用于mTOR靶点,可诱导膀胱癌细胞发生凋亡、自噬以及干扰细胞周期对膀胱癌起到治疗作用,同时具有安全、不良反应少、高效且不易继发耐药等优点... 详细信息

哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)及其相关通路作为膀胱癌治疗的新靶点之一,正逐渐受到关注。作用于mTOR靶点,可诱导膀胱癌细胞发生凋亡、自噬以及干扰细胞周期对膀胱癌起到治疗作用,同时具有安全、不良反应少、高效且不易继发耐药等优点。但目前利用该靶点治疗膀胱癌的作用机制研究大多只是靶向于单一通路或靶点,其疗效尚不令人满意。而膀胱癌等肿瘤性疾病属于异质性疾病,其发病机制往往涉及多条通路。因此,若将与mTOR靶点相关的两条或以上通路整合在一起,开启多通路治疗膀胱癌,将大大提高膀胱癌的治疗效果,改善患者预后。

关键词：膀胱癌哺乳动物雷帕霉素靶蛋白自噬细胞凋亡

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RPS15A在肿瘤中作用的研究进展

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医学综述 2021年第6期27卷 1106-1111页

作者：张克夏成兴雷容李祥孟曾繁浩颜汝平昆明医科大学第二附属医院泌尿外科云南省泌尿外科研究所昆明650101

除组成核糖体、促进蛋白质的生物合成外,核糖体蛋白(RP)S15A还可作为一种新型致癌基因,参与肿瘤细胞生物学功能的调节,包括肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡。此外,RPS15A在调控肿瘤发生发展相关的信号通路中也起着重要作用。RPS15A在... 详细信息

除组成核糖体、促进蛋白质的生物合成外,核糖体蛋白(RP)S15A还可作为一种新型致癌基因,参与肿瘤细胞生物学功能的调节,包括肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡。此外,RPS15A在调控肿瘤发生发展相关的信号通路中也起着重要作用。RPS15A在肿瘤细胞及组织中呈过表达状态,且多数肿瘤组织及细胞中的RPS15A表达水平明显高于癌旁组织,抑制肿瘤细胞中的RPS15A表达可延缓肿瘤细胞的生长及转移,故可将其作为一种潜在的新型肿瘤治疗靶标。

关键词：肿瘤核糖体蛋白S15A 信号通路细胞生物学功能

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