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橡胶树树皮HbbHLH基因三端序列的克隆及表达分析

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安徽农业科学 2008年第26期36卷 11253-11256,11259页

作者：陈霞吴华玲罗世巧曾日中白先权段翠芳中国热带农业科学院橡胶研究所海南儋州571737

[目的]为今后深入了解茉莉酸诱导橡胶树乳管分化的分子机理奠定基础。[方法]根据bHLH转录因子基因保守区设计引物,以橡胶树树皮RNA反转录第一链cDNA为模板,获得橡胶树树皮组织bHLH基因的EST序列,以此序列设计巢式引物,应用3′RACE技术... 详细信息

[目的]为今后深入了解茉莉酸诱导橡胶树乳管分化的分子机理奠定基础。[方法]根据bHLH转录因子基因保守区设计引物,以橡胶树树皮RNA反转录第一链cDNA为模板,获得橡胶树树皮组织bHLH基因的EST序列,以此序列设计巢式引物,应用3′RACE技术对其三端序列进行克隆,并利用半定量RT-PCR分析该基因在茉莉酸处理后4 h、8 h、1 d、2 d、3 d的表达情况。[结果]克隆共得到1 084 bp的HbbHLH基因3端序列,序列分析发现该基因属于MYC型HLH结构域。表达分析结果显示,茉莉酸处理后,bHLH基因在8 h内表达逐渐增强,1 d、2 d时表达稳定最高,3 d时表达水平开始减弱。[结论]茉莉酸对HbbHLH基因的表达具有调控作用。

关键词：橡胶树茉莉酸 HbbHLH基因克隆表达

包埋厌氧氨氧化同步脱硫除氮菌B16对天然橡胶加工废水的处理研究

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热带作物学报 2015年第9期36卷 1714-1718页

作者：王莹汪航曾日中黄茂芳桂红星中国热带农业科学院农产品加工研究所广东湛江524001 华中农业大学资源与环境学院湖北武汉430070 中国热带农业科学院橡胶研究所海南儋州571737

天然橡胶加工废水具有水质、水量变化大的特点,冲击负荷下厌氧生物处理通常效果不佳。针对这一问题,利用海藻酸钙(SA)、聚乙烯醇(PVA)复合材料对本实验室筛选到的同步脱硫除氮菌B16进行包埋,利用包埋固定化后的菌处理天然橡胶加工废水... 详细信息

天然橡胶加工废水具有水质、水量变化大的特点,冲击负荷下厌氧生物处理通常效果不佳。针对这一问题,利用海藻酸钙(SA)、聚乙烯醇(PVA)复合材料对本实验室筛选到的同步脱硫除氮菌B16进行包埋,利用包埋固定化后的菌处理天然橡胶加工废水。结果表明:14 d后包埋菌株对实际废水氨氮、总氮及硫酸盐的去除效果分别为44.05%、46.29%和26.06%,并且氨氮去除速率最高可达110.59 mg/(L·d),硫酸盐平均去除速率为13.8 mg/(L·d),均高于游离菌株。包埋小球存在一个物料内外传递的时间差,可提供细菌对环境变化适应的一个缓冲的时间,使得包埋固定化后的菌对于水质的变化具有更好的适应性,非常适用于处理天然橡胶加工废水。

关键词：包埋固定化同步脱硫除氮菌天然橡胶加工废水处理

橡胶树胶乳cDNA文库的构建及其EST序列的功能分析

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热带作物学报 2007年第3期28卷 46-51页

作者：段翠芳曾日中聂智毅黎瑜魏小弟中国热带农业科学院橡胶研究所农业部热带作物生物学重点开放实验室海南儋州571737

为了分离和克隆橡胶树胶乳中与胶乳代谢、橡胶生物合成和茉莉酸生物合成等途径相关的功能基因,以橡胶树无性系热研7-33-97品系新开割树的胶乳为材料,用SDS裂解法提取胶乳总RNA,磁珠法纯化mRNA,逆转录合成第1链cDNA,并合成双链cDNA,经电... 详细信息

为了分离和克隆橡胶树胶乳中与胶乳代谢、橡胶生物合成和茉莉酸生物合成等途径相关的功能基因,以橡胶树无性系热研7-33-97品系新开割树的胶乳为材料,用SDS裂解法提取胶乳总RNA,磁珠法纯化mRNA,逆转录合成第1链cDNA,并合成双链cDNA,经电泳检测,双链cDNA的大小主要在1.0～2.0kb之间,收集大于500bp的cDNA片段,以DH10B为宿主菌,pBluescriptII为载体,构建未经扩增的橡胶树胶乳cDNA初级文库。该文库的库容大于5.0×105Pfu/mL,重组率大于90%。随机对文库的3200个克隆进行了EST测序,用所测序列与GenBank非冗余蛋白质数据库进行BlastX比对,并将比对上的基因进行生物学功能注释和分类。研究结果表明,所构建的胶乳cDNA初级文库质量较高,适合包括低丰度表达基因在内的橡胶树胶乳功能基因的筛选,是研究橡胶树胶乳中重要功能基因的最主要资源和开展橡胶树胶乳代谢与橡胶生物合成的分子机制研究的基础。

关键词：橡胶树胶乳 cDNA 文库 EST

橡胶树胶乳WRKY家族转录因子HbWRKY27基因的克隆与表达分析

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热带作物学报 2016年第3期37卷 517-524页

作者：闫栋陈晓丽孙丽娜曾日中杨礼富海南大学农学院海南海口570228 中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点开放实验室省部共建国家重点实验室培育基地海南儋州571737 山东大学生命科学学院山东济南250100

从巴西橡胶树无性系热研7-33-97的胶乳中克隆了1个WRKY转录因子家族成员基因,命名为HbWRKY27,该基因含有1个1 266 bp的开放阅读框(ORF),编码422个氨基酸。生物信息学分析结果表明,HbWRKY27含有1个WRKY保守结构域和1个C2H2锌指结构基序,... 详细信息

从巴西橡胶树无性系热研7-33-97的胶乳中克隆了1个WRKY转录因子家族成员基因,命名为HbWRKY27,该基因含有1个1 266 bp的开放阅读框(ORF),编码422个氨基酸。生物信息学分析结果表明,HbWRKY27含有1个WRKY保守结构域和1个C2H2锌指结构基序,属于II类WRKY家族成员,与大豆、油棕、麻风树、葡萄和拟南芥的WRKY27蛋白的同源性分别为81%、74%、63%、62%和58%。酵母转化试验表明,HbWRKY27具有转录激活活性。实时荧光定量RT-PCR分析显示,HbWRKY27基因在健康橡胶树树皮组织中表达量最高,但在死皮橡胶树树皮组织中的表达量随着死皮程度的增加而下降,而在死皮橡胶树胶乳中HbWRKY27基因表达量则随着死皮程度的增加而升高;割胶、乙烯利和茉莉酸甲酯刺激都可显著促进胶乳HbWRKY27基因上调表达。转录因子HbWRKY27可能在割胶和乙烯等调控橡胶树胶乳代谢中发挥重要作用,并且还可能与橡胶树死皮病的发生相关。

关键词：橡胶树胶乳死皮 HbWRKY27转录因子转录激活活性基因表达

橡胶树胶乳均一化全长cDNA文库的构建与EST测序分析

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中国农业科学 2011年第4期44卷 683-690页

作者：曾日中段翠芳聂智毅代龙军黎瑜中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学重点开放实验室/省部共建国家重点实验室培育基地

【目的】构建橡胶树胶乳均一化全长cDNA文库,降低胶乳中存在的高丰度表达基因的拷贝数,提高胶乳表达基因的分离鉴定和EST测序分析效率。【方法】以橡胶树无性系热研7-33-97的胶乳为材料,将胶乳全长cDNA与Gateway供体载体pDONR222重组,... 详细信息

【目的】构建橡胶树胶乳均一化全长cDNA文库,降低胶乳中存在的高丰度表达基因的拷贝数,提高胶乳表达基因的分离鉴定和EST测序分析效率。【方法】以橡胶树无性系热研7-33-97的胶乳为材料,将胶乳全长cDNA与Gateway供体载体pDONR222重组,构建了橡胶树胶乳的非剪切型全长cDNA原始文库,经检测原始文库的滴度为6.0×106 cfu/mL,平均插入片段长度大于1.5 kb,重组率约为100%,全长cDNA比例约为76%;利用基因组DNA饱和杂交技术对胶乳原始cDNA文库进行均一化处理,构建橡胶树胶乳的均一化全长cDNA文库。【结果】胶乳均一化全长cDNA文库的总库容量(总CFU)为1.87×105,重组率大于95%。定量RT-PCR检测表明,橡胶树胶乳2个高丰度表达基因,即小橡胶粒子蛋白(SRPP)和橡胶延长因子(REF)基因,在均一化cDNA文库中的表达量均下降了约1 000倍。【结论】构建了均一化效果良好的橡胶树胶乳全长cDNA文库,并对文库中随机的12 000个克隆进行了测序,获得高质量的有效EST(expressed sequence tag)序列为11 951条,经拼接共获得单一基因(unigene)为3 394个,其中包括片段重叠群(contig)2 061个和单一EST序列(singlet)1 333个。此cDNA文库将可用于橡胶树功能基因组研究、新基因筛选、高通量EST测序以及橡胶树胶乳cDNA芯片的制备。

关键词：橡胶树胶乳均一化全长cDNA文库

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植物蛋白质组学研究

植物蛋白质组学研究

巴西橡胶树小橡胶粒子蛋白(SRPP)基因启动子的克隆及其功能分析

中国蛋白质组学第三届学术大会

作者：孟慧段翠芳曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所、华南热带农业大学

植物蛋白质组学作为蛋白质组学研究中的重要组成部分仍处于起步阶段,它的研究远落后于单细胞原核生物和真核生物蛋白质组学。主要原因是由于单细胞有机体的全基因序列得到较早,而且它们的蛋白质组比较简单。目前,已在十多种植物中开展...

植物蛋白质组学作为蛋白质组学研究中的重要组成部分仍处于起步阶段,它的研究远落后于单细胞原核生物和真核生物蛋白质组学。主要原因是由于单细胞有机体的全基因序列得到较早,而且它们的蛋白质组比较简单。目前,已在十多种植物中开展了植物蛋白质组学的研究,除了拟南芥和水稻两种模式植物外,其他植物如玉米、大豆、大麦、小麦、紫花苜蓿、菠菜、葡萄、油菜、土豆、大麻、烟草、罂粟、以及经济作物杨树、松树、荔枝等也开展了不同程度的蛋白质组学研究。

关键词：

来源： cnki会议评论

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cnki会议

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中国农学通报 2009年第1期25卷 241-247页

作者：李先昆段翠芳聂智毅吴华玲黎瑜曾日中海南大学园艺园林学院海南儋州571737 中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室海南儋州571737

小橡胶粒子蛋白(SRPP)是巴西橡胶树中参与橡胶生物合成的重要蛋白因子之一。SRPP的氨基酸序列与橡胶延长因子(REF)和菜豆胁迫相关蛋白(PVSRP)的同源性分别为72%和68%。为了进一步研究SRPP基因表达及其调控的机制,作者采用接头连接介导的... 详细信息

小橡胶粒子蛋白(SRPP)是巴西橡胶树中参与橡胶生物合成的重要蛋白因子之一。SRPP的氨基酸序列与橡胶延长因子(REF)和菜豆胁迫相关蛋白(PVSRP)的同源性分别为72%和68%。为了进一步研究SRPP基因表达及其调控的机制,作者采用接头连接介导的PCR散步法(ligation-mediated PCR),克隆了SRPP基因的启动子。序列分析表明,SRPP基因启动子中与光诱导相关的顺式元件占39%,可能属于光诱导型启动子,因此,SRPP基因的表达可能受光信号的调控。此外,SRPP基因启动子还具有热激响应元件(HSE)、干旱胁迫响应元件(MBS)、防卫和胁迫响应元件(TC-richrepeats)、脱落酸响应元件(ABRE)、赤霉素响应元件(GARE)和激发子响应元件(EIRE,Wbox)等,这表明橡胶树SRPP基因不仅参与调控橡胶生物合成,而且可能是橡胶树中响应逆境信号的抗性基因,在橡胶树抵御逆境胁迫的生理过程中发挥重要作用。

关键词：巴西橡胶树 SRPP基因启动子功能分析

香蕉芒果果皮中酶活性与炭疽病菌潜伏侵染的关系

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真菌学报 1995年第4期14卷 283-288页

作者：谢艺贤刘秀娟杨业铜杨少琼曾日中中国热带农业科学院植保所中国热带农业科学院热带作物生物学实验室海南儋州市571737

在树上正生长发育的香蕉果实,随着果实长大,果皮中过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性不断升高。采后的香蕉和芒果果实的果皮中,POD和PPO活性变化与呼吸代谢相关。苯丙氨酸解氨酶(PAL)主要分布在果皮中,并随着果实成熟度的提高,其活... 详细信息

在树上正生长发育的香蕉果实,随着果实长大,果皮中过氧化物酶(POD)和多酚氧化酶(PPO)活性不断升高。采后的香蕉和芒果果实的果皮中,POD和PPO活性变化与呼吸代谢相关。苯丙氨酸解氨酶(PAL)主要分布在果皮中,并随着果实成熟度的提高,其活性呈极显著下降趋势。感病果实的果皮中三种酶活性均比健康果皮高。说明果皮中三种酶活性的变化与炭疽菌的潜伏侵染有关。

关键词：植物真菌炭疽菌潜伏侵染酶活性香蕉芒果

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植物NAC转录因子的研究进展

生物技术通报 2012年第11期28卷 21-26页

作者：康桂娟曾日中聂智毅黎瑜代龙军段翠芳中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室儋州571737

NAC(NAM、ATAF1、ATAF2和CUC2)转录因子是植物特有的一类转录因子,在多种陆生植物基因组中发现有超过100个成员,是植物基因组中最大的转录因子家族之一。该家族转录因子的共同特点是其N端具有保守的NAC结构域,C端则为高度变异和具有转... 详细信息

NAC(NAM、ATAF1、ATAF2和CUC2)转录因子是植物特有的一类转录因子,在多种陆生植物基因组中发现有超过100个成员,是植物基因组中最大的转录因子家族之一。该家族转录因子的共同特点是其N端具有保守的NAC结构域,C端则为高度变异和具有转录激活功能的调控区。具有多种生物功能NAC家族转录因子在植物生长发育、胁迫应答和激素调节等过程中具有重要作用。就植物NAC转录因子的基本结构特征和生物学功能最新研究进展进行综述。

关键词： NAC转录因子结构特征生物功能