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巴西橡胶树HbNAC33基因的克隆和表达分析

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基因组学与应用生物学 2014年第4期33卷 845-852页

作者：康桂娟黎瑜曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室和省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室儋州571737

植物特有的NAC转录因子在植物的生长发育、胁迫应答和激素调节等方面具有重要功能。本研究从橡胶树胶乳cDNA中克隆了HbNAC33基因,生物信息学分析显示该基因的完整开放阅读框（ORF）为1 092 bp,编码363个氨基酸。HbNAC33蛋白的N-端第3～... 详细信息

植物特有的NAC转录因子在植物的生长发育、胁迫应答和激素调节等方面具有重要功能。本研究从橡胶树胶乳cDNA中克隆了HbNAC33基因,生物信息学分析显示该基因的完整开放阅读框（ORF）为1 092 bp,编码363个氨基酸。HbNAC33蛋白的N-端第3～156位氨基酸之间含有一个典型的NAC结构域,酵母试验表明,HbNAC33具有转录激活活性,转录激活区在C-端,具备了NAC转录因子的基本特征。序列比对和系统进化分析表明HbNAC33蛋白属于NAC转录因子家族中的ANAC011亚族。实时荧光定量PCR分析表明,HbNAC33在叶中的表达量显著高于其他部位;割胶,乙烯利（ET）和茉莉酸（JA）处理均能诱导HbNAC33的表达上调。以上结果表明,HbNAC33可能参与植物的生长发育和胁迫应答过程。

关键词：巴西橡胶树NAC转录因子基因克隆表达分析转录激活活性

巴西橡胶树乳管高效表达焦磷酸酶基因双元表达载体的构建

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中国农学通报 2009年第24期25卷 495-500页

作者：于波吴华玲曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室海南儋州571737 广东省农业科学院茶叶研究所广州510640

巴西橡胶树橡胶生物合成过程中,焦磷酸酶(PPase)具有重要的调控作用。通过基因工程技术提高其在乳管中的表达,有可能促进橡胶的生物合成,从而提高橡胶树产量。笔者以巴西橡胶树叶片为材料提取DNA,用特异引物经PCR扩增获得了378bp的REF... 详细信息

巴西橡胶树橡胶生物合成过程中,焦磷酸酶(PPase)具有重要的调控作用。通过基因工程技术提高其在乳管中的表达,有可能促进橡胶的生物合成,从而提高橡胶树产量。笔者以巴西橡胶树叶片为材料提取DNA,用特异引物经PCR扩增获得了378bp的REF启动子片段,该片段序列与NCBI报道的REF序列间的同源性分别是98.68%和99.47%。以胶乳为材料提取总RNA,用特异引物经RT-PCR方法获得了2310bp的V-PPase基因片段,该片段序列与NCBI报道的V-PPase基因序列一致。然后通过酶切和连接,将REF启动子和V-PPase基因重组到植物表达载体pCAMBIA1301中,构建了含有潮霉素磷酸转移酶基因(hptⅡ)的乳管高效表达V-PPase基因的载体pC1301RV,然后用冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105,为进一步通过转基因技术转化橡胶树奠定了基础。

关键词：橡胶树焦磷酸酶 REF启动子表达载体根癌农杆菌

茉莉酸刺激的橡胶树胶乳cDNA消减文库的构建及其序列分析

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热带作物学报 2003年第3期24卷 1-6页

作者：曾日中段翠芳黎瑜郝秉中中国热带农业科学院橡胶研究所农业部热带作物栽培生理学重点实验室海南儋州571737

采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,构建了外源茉莉酸刺激条件下橡胶树胶乳与未处理橡胶树胶乳差异表达的cDNA消减文库,经蓝白斑筛选共得到121个含有插入片段的阳性克隆。通过菌落PCR的方法分别对阳... 详细信息

采用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术,构建了外源茉莉酸刺激条件下橡胶树胶乳与未处理橡胶树胶乳差异表达的cDNA消减文库,经蓝白斑筛选共得到121个含有插入片段的阳性克隆。通过菌落PCR的方法分别对阳性克隆的插入片段进行扩增,结果表明,95％左右阳性克隆插入片段的大小在200-600 bp之间。随机选取25个克隆进行测序,并对所得的25条表达序列标签(EST)序列用Blastn(基本局域联配搜寻工具)检索基因文库(genbank),其中10条EST片断可找到碱基序列相似性大于80％以上的同源基因序列,其余15条EST为没有任何功能线索的未知序列。外源茉莉酸刺激条件下橡胶树胶乳cDNA消减文库的构建和在此基础上克隆橡胶树胶乳中JA信号的候选应激基因,将为开展茉莉酸调控橡胶树胶乳代谢和橡胶生物合成的分子机理研究打下基础。

关键词：橡胶树胶乳抑制性消减杂交 cDNA消减文库茉莉酸乳管细胞生物合成植物激素信号转导

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酵母双杂交技术研究与应用进展

安徽农业科学 2009年第7期37卷 2867-2869,2926页

作者：李先昆聂智毅曾日中海南大学园艺园林学院海南儋州571737 中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室省部共建国家重点实验室培育基地--海南省热带作物栽培生理学重点实验室海南儋州571737

酵母双杂交是利用遗传学方法在酵母真核细胞体内研究蛋白质之间相互作用的非常有效的一种分子生物学技术,被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域,已成为分子生物学研究领域的重要实验手段之一,获得了许多有价值的... 详细信息

酵母双杂交是利用遗传学方法在酵母真核细胞体内研究蛋白质之间相互作用的非常有效的一种分子生物学技术,被广泛应用于蛋白质组学、细胞信号转导和功能基因组学等领域,已成为分子生物学研究领域的重要实验手段之一,获得了许多有价值的重要发现。随着分子生物学的发展,在酵母双杂交的基础上又建立起了酵母单杂、反向双杂交、三杂交及核外双杂交等多项技术,并已经成功地运用于蛋白质之间、蛋白质与DNA、RNA和配体之间相互作用的研究。对酵母双杂交及其相关技术与应用研究进展进行了综述。可以预见,在人类、水稻和拟南芥等模式生物基因组测序完成后,酵母双杂交及其衍生技术将在功能基因组学和蛋白质组学的研究中发挥越来越重要的作用。

关键词：酵母双杂交蛋白质相互作用功能基因组学

差异显示技术在橡胶树分子生物学研究中的应用

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植物生理学通讯 2009年第9期45卷 913-918页

作者：吴华玲于波段翠芳曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室海南儋州571737 广东省农业科学院茶叶研究所广州510640

差异显示技术是从分子水平研究细胞、组织、器官中基因结构和表达变异的手段之一,在巴西橡胶树研究中也已有应用。本文从DNA、RNA和蛋白质水平上介绍了近年来差异显示技术在橡胶树分子生物学研究中的进展,并对其前景作了展望。

关键词：差异显示巴西橡胶树基因分子标记差异表达

巴西橡胶树HbNAC1基因启动子的克隆及序列分析

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基因组学与应用生物学 2012年第5期31卷 447-454页

作者：康桂娟黎瑜夏可灿聂智毅曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所农业部橡胶树生物学重点开放实验室省部共建国家重点实验室培育基地儋州571737 海南大学农学院海口570228

NAC转录因子是植物特有的一类转录调控因子,在植物的生长发育、激素调节和境胁迫应答中具有重要的功能。为研究NAC转录因子在巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)抗逆胁迫中的功能,本项目组根据巴西橡胶树NAC转录因子-HbNAC1基因序列,通过Ge... 详细信息

NAC转录因子是植物特有的一类转录调控因子,在植物的生长发育、激素调节和境胁迫应答中具有重要的功能。为研究NAC转录因子在巴西橡胶树(Hevea brasiliensis)抗逆胁迫中的功能,本项目组根据巴西橡胶树NAC转录因子-HbNAC1基因序列,通过Genome Walking方法从巴西橡胶基因组DNA中获得了长度为1861bp的HbNAC1基因的5'调控区片段,序列分析表明该段序列含有一个典型的真核生物核心启动子区域,转录起始位点T位于起始密码子上游52bp处。该启动子序列除了含有TATA-box、CAAT-box等基本顺式作用元件外,还具有茉莉酸响应元件以及大量光顺式作用元件和逆境胁迫诱导相关的顺式调控元件,这表明HbNAC1基因在橡胶树逆境胁迫应答过程具有重要功能,其启动子可能是一个光诱导型和组织特异性启动子。

关键词：巴西橡胶树 HbNAC1启动子顺式调控元件逆境胁迫

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巴西橡胶树胶乳黄色体中的病原相关蛋白

热带农业科学 1998年第4期18卷 43-48页

作者：曾日中中国热带农业科学院橡胶所农业部热带作物生物学重点实验室

巴西橡胶树胶乳的黄色体内同时存在着两类典型的病原相关蛋白 ,几丁酶 /溶菌酶和β—13—葡聚糖酶。割胶这种持续的机械创伤产生的乙烯可在mRNA的转录水平上大量诱导胶乳几丁酶/溶菌酶和β—13—葡聚糖酶的合成。它们不仅是橡胶树防御... 详细信息

巴西橡胶树胶乳的黄色体内同时存在着两类典型的病原相关蛋白 ,几丁酶 /溶菌酶和β—13—葡聚糖酶。割胶这种持续的机械创伤产生的乙烯可在mRNA的转录水平上大量诱导胶乳几丁酶/溶菌酶和β—13—葡聚糖酶的合成。它们不仅是橡胶树防御潜在病原微生物的抗病系统的重要组成部分;;而且还参加了胶乳的凝固过程;;与橡胶树的排胶和产量具有密切的关系。

关键词：橡胶树胶乳黄色体病原相关蛋白

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橡胶树热垦525不同月份生胶质量分析

热带农业科学 2022年第7期42卷 99-103页

作者：覃怀德康桂娟聂智毅位明明曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所/农业农村部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/省部共建国家重点实验室培育基地-海南省热带作物栽培生理学重点实验室海南海口571101 海南省高性能天然橡胶材料工程重点实验室海南海口571101

分析了橡胶树品种热垦525整年不同月份间生胶质量特征(粒径、灰分含量、杂质含量、挥发分含量、氮含量、塑性初值、塑性保持率、门尼粘度等8项指标)。结果表明:热垦525橡胶粒子粒径、挥发分含量、塑性初值、门尼粘度值在4月份刚开割时... 详细信息

分析了橡胶树品种热垦525整年不同月份间生胶质量特征(粒径、灰分含量、杂质含量、挥发分含量、氮含量、塑性初值、塑性保持率、门尼粘度等8项指标)。结果表明:热垦525橡胶粒子粒径、挥发分含量、塑性初值、门尼粘度值在4月份刚开割时为整年最高值;杂质含量6、7月份较高;生胶11、12月份塑性保持率较高,灰分含量较低。综合2个指标,对于耐老化性能要求较高时,热垦525生胶取样尽量选择11、12月份。热垦525生胶门尼粘度值与塑性初值趋势一致,均呈现随月份逐渐下降趋势,在4月份开割时最高,逐月下降,9月份稍微上升;氮含量则可划分为3段,4、5月含量为0.3%,6、7、8、9月含量为0.4%,10、11、12月含量大于0.4%。本研究为精确评价热垦525生胶质量和针对性的加工利用选择采集橡胶时段提供了理论依据和实践指导。

关键词：热垦525 橡胶树采集时段生胶质量

橡胶树MSAP反应体系优化及其不同开割高度单株DNA甲基化分析

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植物研究 2016年第6期36卷 860-869页

作者：吴春太班硕黎瑜曾日中中国热带农业科学院橡胶研究所/农业部橡胶树生物学与遗传资源利用重点实验室/国家橡胶树育种中心/海南省热带作物栽培生理学重点实验室儋州571737 华中农业大学植物科学技术学院武汉430070

以‘热研7-33-97’橡胶树无性系幼嫩叶片为材料,通过利用单因素和正交试验相结合的方法,对酶切、预扩增和选择性扩增3个影响甲基化敏感扩增多态性(MSAP)分析的关键步骤的反应体系中关键影响因素进行了优化,建立橡胶树MSAP反应最佳体系,... 详细信息

以‘热研7-33-97’橡胶树无性系幼嫩叶片为材料,通过利用单因素和正交试验相结合的方法,对酶切、预扩增和选择性扩增3个影响甲基化敏感扩增多态性(MSAP)分析的关键步骤的反应体系中关键影响因素进行了优化,建立橡胶树MSAP反应最佳体系,并用于高低割线橡胶树基因组DNA甲基化差异分析。结果表明:在50μL反应体系中,750 ng基因组DNA用EcoRⅠ20 U,HpaⅡ20 U或MspⅠ10 U于37℃恒温同步酶切10 h,酶切完全。最佳预扩增体系(20μL)为:连接产物4μL,Mg Cl_2(25 mmol·L^(-1))0.15μL,d NTPs(2.5 mmol·L^(-1))0.1μL,上下游引物E-00/HM-00(10μmol·L^(-1))各0.3μL,Taq酶(5 U·μL^(-1))0.1μL,10×PCR Buffer 2μL。最佳选择性扩增反应体系(20μL)为:稀释20倍的预扩增产物2μL,Mg Cl_2(25 mmol·L^(-1))0.1μL,d NTPs(2.5 mmol·L^(-1))0.125μL,上下游引物E+3/HM+3(10μmol·L^(-1))各0.4μL,Taq酶(5 U·μL^(-1))0.1μL,10×PCR Buffer 2μL。高低割线树DNA的甲基化比例分别为37.22%和36.43%,2种开割胶树基因组CCGG位点胞嘧啶全甲基化率明显高于半甲基化率,推测橡胶树基因组甲基化主要模式可能是Cp G型。综上表明,建立的MSAP反应体系稳定可靠且重复性好,为后续橡胶树不同胁迫(割胶)程度DNA甲基化的研究奠定了基础。

关键词：高低割线橡胶树 DNA甲基化甲基化敏感扩增多态性(MSAP) 体系优化