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稳定分泌抗牛γ-干扰素杂交瘤细胞株的建立与鉴定

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稳定分泌抗牛γ-干扰素杂交瘤细胞株的建立与鉴定

作者：曹黎黎东北农业大学

学位级别：硕士

γ-干扰素(IFN-γ)主要是在特定的抗原、有丝分裂原的刺激下由活化T淋巴细胞或NK细胞产生的一类具有广谱抗病毒免疫调节等多种生物学活性的糖蛋白。国内外在牛IFN-γ的研究和应用方面的工作已经开展很多,但不论是对免疫细胞功能及机体... 详细信息

γ-干扰素(IFN-γ)主要是在特定的抗原、有丝分裂原的刺激下由活化T淋巴细胞或NK细胞产生的一类具有广谱抗病毒免疫调节等多种生物学活性的糖蛋白。国内外在牛IFN-γ的研究和应用方面的工作已经开展很多,但不论是对免疫细胞功能及机体细胞免疫应答方面的研究,还是对疾病状态下IFN-γ产生水平的判定,都需要一种简便、快速的检测手段。应用牛IFN-γ单克隆抗体作为研究、检测IFN-γ的手段,在免疫机制的研究、免疫功能检测等领域具有广泛的应用。本研究用原核表达的重组牛IFN-γ(rHis-BoIFN-γ)免疫6周龄BALB/c雌性小鼠,免疫3次后取其脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用建立的间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经3次亚克隆,最终获得12株能稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株。亚类鉴定结果显示12株杂交瘤细胞均为IgG,其中5株为IgG1,3株为IgG2a,4株为IgG2b。12株杂交瘤细胞在体外具有稳定分泌抗BoIFN-γ单克隆抗体的能力。Western-blot及间接ELISA证明12株单抗均可特异性的结合rBoIFN-γ蛋白。通过间接免疫荧光显示,12株单抗均与真核细胞BHK21表达的rBoIFN-γ反应产生荧光反应,证明了单抗能够与真核细胞产生的BoIFN-γ反应,证实了单抗的特异性。ELISA叠加试验表明,3C2与1H4、1G6与1G4针对不同表位,1A10、1B2、2B9、3C4 4株和1C1与1G6、1G4与3C2、1A10与1G8针对相同或相近的表位。为利用单克隆抗体建立检测BoIFN-γ抗原捕获ELISA方法诊断牛疫病,及重组BoIFN-γ的亲和层析纯化提供了物质材料,为深入研究BoIFN-γ单抗在牛临床免疫学方面的应用奠定了基础。

关键词：牛IFN-γ 单克隆抗体特性鉴定

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牛IFN-γ单克隆抗体的制备及鉴定

中国兽医科学 2011年第7期41卷 741-746页

作者：曹黎黎刘丹丹卫娜高明春王君伟东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为进一步研究牛IFN-γ(BoIFN-γ)单克隆抗体在牛免疫学以及牛疫病诊断中的应用,用原核表达的重组牛IFN-γ(rHis-BoIFN-γ)免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,免疫3次后取其脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用建立的间接ELISA方法筛选阳性杂交... 详细信息

为进一步研究牛IFN-γ(BoIFN-γ)单克隆抗体在牛免疫学以及牛疫病诊断中的应用,用原核表达的重组牛IFN-γ(rHis-BoIFN-γ)免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,免疫3次后取其脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行融合。用建立的间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞,经3～5次亚克隆,最终获得12株能稳定分泌抗体的阳性杂交瘤细胞株。Ig亚类鉴定结果显示这12株杂交瘤细胞均为IgG,其中5株为IgG1,3株为IgG2a,4株为IgG2b。这12株杂交瘤细胞在体外具有稳定分泌抗牛IFN-γ单克隆抗体的能力。Western-blot及间接ELISA证明这12株单克隆抗体均可特异性地结合rBoIFN-γ蛋白。间接免疫荧光试验显示,这12株单抗均与真核细胞BHK-21表达的rBoIFN-γ产生荧光反应,证明这些单抗能够与接近天然的BoIFN-γ反应,证实了单抗的特异性。ELISA叠加试验表明,3C2与1H4、1G6与1G4针对不同表位,1A10、1B2、2B9、3C4四株和1C1与1G6、1G4与3C2、1A10与1G8针对相同或相近的表位。

关键词：牛γ干扰素单克隆抗体特异性鉴定

血清IL-6、干扰素-γ、表皮生长因子在鼻咽癌患者中的表达及价值

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中国卫生工程学 2022年第3期21卷 450-452页

作者：曹黎黎枣庄矿业集团滕南医院耳鼻咽喉科山东枣庄277606

目的探讨血清白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ、表皮生长因子在鼻咽癌患者中的表达及意义。方法选取2017年1月至10月本院收治的鼻咽癌患者43例为鼻咽癌组,同期健康志愿者32例为对照组。放疗前采集两组受试者外周静脉血4 ml,检测血清IL-6... 详细信息

目的探讨血清白细胞介素-6(IL-6)、干扰素-γ、表皮生长因子在鼻咽癌患者中的表达及意义。方法选取2017年1月至10月本院收治的鼻咽癌患者43例为鼻咽癌组,同期健康志愿者32例为对照组。放疗前采集两组受试者外周静脉血4 ml,检测血清IL-6、干扰素-γ、表皮生长因子水平。放疗结束后3个月复查鼻咽癌患者的鼻咽部磁共振成像,评估放疗敏感性。对鼻咽癌患者进行为期3年的随访,记录生存情况。结果鼻咽癌组患者放疗前、放疗结束后3个月血清IL-6、干扰素-γ水平均明显低于对照组,表皮生长因子水平明显均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。放疗敏感组不同分期鼻咽癌患者血清IL-6、干扰素-γ水平均明显高于放疗耐受组对应分期患者,表皮生长因子水平均明显低于放疗耐受组对应分期患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。随访期中存活14例归入存活组,死亡29例归入死亡组。死亡组患者血清IL-6、干扰素-γ水平明显低于存活组,表皮生长因子水平明显高于存活组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Cox比例回归模型分析显示,血清IL-6、干扰素-γ水平升高是鼻咽癌患者预后的保护因素,表皮生长因子水平升高是鼻咽癌患者预后的危险因素(均P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清IL-6、干扰素-γ、表皮生长因子联合检测预测鼻咽癌患者预后水平的AUC值高于各指标单独检测,灵敏度和特异度均高于各指标单独检测。结论血清IL-6、干扰素-γ、表皮生长因子表达与鼻咽癌患者放疗敏感性和预后密切相关,联合检测上述指标对制订治疗方案有较高参考价值。

关键词：鼻咽癌白细胞介素-6 干扰素-γ 表皮生长因子预后

修正性鼻内镜手术治疗难治性慢性鼻窦炎鼻息肉的治疗价值研究

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中外医疗 2022年第6期41卷 62-65页

作者：曹黎黎枣庄矿业集团滕南医院耳鼻咽喉科山东济宁277606

目的分析难治性慢性鼻窦炎鼻息肉行修正性鼻内镜手术治疗的效果。方法方便选择2020年8月—2021年8月该院94例难治性慢性鼻窦炎鼻息肉患者,入院后均行抽签处理,分为修正组和一般组,每组47例,修正组行修正性鼻内镜手术,一般组行一般性手术... 详细信息

目的分析难治性慢性鼻窦炎鼻息肉行修正性鼻内镜手术治疗的效果。方法方便选择2020年8月—2021年8月该院94例难治性慢性鼻窦炎鼻息肉患者,入院后均行抽签处理,分为修正组和一般组,每组47例,修正组行修正性鼻内镜手术,一般组行一般性手术,比较两组鼻腔病变症状积分、并发症、治疗有效性、鼻腔恢复情况。结果术后,修正组鼻腔恢复情况优于一般组,差异有统计学意义(P0.05);术后,修正组病变的症状积分及总分均低于一般组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论修正性鼻内镜手术可推广,能加速鼻腔功能的恢复,可减轻鼻腔不适感,还能预防各鼻腔并发症,对鼻腔病变的有效性高。

关键词：慢性鼻窦炎鼻息肉治疗价值恢复情况症状积分有效性修正性鼻内镜手术

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对本土广告业发展的思考

广告大观（综合版） 2008年第1期 40-41页

作者：曹黎黎同路传播机构媒介部

2007年6月,本刊《危局下的焦虑》专题提出了中国广告业处在转型的焦虑中,广告精英表示担忧的声音也越来越高。这期专题在学术界与广告实务界中引起了共鸣。广告业有识之士发表看法,真实地反映了广告业现状,强烈地发出直面危机的声音。其... 详细信息

2007年6月,本刊《危局下的焦虑》专题提出了中国广告业处在转型的焦虑中,广告精英表示担忧的声音也越来越高。这期专题在学术界与广告实务界中引起了共鸣。广告业有识之士发表看法,真实地反映了广告业现状,强烈地发出直面危机的声音。其中,央视十佳广告代理公司——同路传播机构,组织公司所有员工阅读了本期杂志,公司员工有感而发,写出了一组很有专业水平的读后感,现选登其中几篇,以飨读者。

关键词：广告业发展广告代理公司本土公司员工中国广告业传播机构学术界读后感

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血清素分子对DNA作用的原子力显微镜研究

生物物理学报 2009年第S1期25卷 301-302页

作者：曹黎黎朱单田田王海涛黄宁平肖忠党东南大学生物医学工程学院生物电子学国家重点实验室南京市四牌楼2号210096

复杂多变的生命现象源于微观分子间的相互作用。DNA作为生命信息的载体,在其复制、转录和修复等过程中,无时无刻不在与各种蛋白、RNA等生物分子发生相互作用。近年来。

关键词：原子力显微镜血清素 DNA

基于质子转移反应飞行时间质谱走航分析的鲁南某城市初夏大气VOCs污染特征及对二次污染生成的贡献分析

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环境科学研究 2022年第3期35卷 707-718页

作者：陈立郑明明曹黎黎田一平王珂陈楠湖北省行政许可技术评审中心湖北武汉430071 武汉轻工大学化学与环境工程学院湖北武汉430023 北京雪迪龙科技股份有限公司北京102206 湖北省生态环境监测中心站湖北武汉430072

为探究鲁南地区大气中VOCs污染情况及二次生成转化特征,采用PTR-ToF-MS(质子转移反应飞行时间质谱仪)对鲁南某城市下辖6个行政区初夏(2021年5月19—27日)大气中挥发性有机物(VOCs)进行走航观测,研究该城市不同区域的VOCs浓度水平、组成... 详细信息

为探究鲁南地区大气中VOCs污染情况及二次生成转化特征,采用PTR-ToF-MS(质子转移反应飞行时间质谱仪)对鲁南某城市下辖6个行政区初夏(2021年5月19—27日)大气中挥发性有机物(VOCs)进行走航观测,研究该城市不同区域的VOCs浓度水平、组成特征以及对臭氧和SOA的生成贡献.结果表明:①该市大气VOCs平均浓度为190.96μg/m^(3),主要由含氧化合物、烃类、卤代烃、苯系物和含硫化合物组成,其中对VOCs组成贡献最大的物种包括乙酸乙烯酯、丙醛、环己酮、戊烯等.②含氧化合物和烃类是该城市(除A区外)最主要的臭氧前体有机物,对OFP的贡献率分别达50%和40%.③除甲苯是C区SOAFP(二次有机气溶胶生成潜势)贡献最大的VOCs物种外,二甲苯是其他各区SOAFP贡献最大的VOCs物种,贡献率在30%以上.④因存在较多大型化工企业,A区与其他区大气VOCs组成差异较大,乙酸乙烯酯和二甲苯是其VOCs主要组分,苯系物、含氧有机物、卤代烃和烃类等四类物种OFP贡献相当,均约占25%;A区大气中VOCs的SOAFP较高,约是其他区的1.5~2.0倍.⑤通过特征物种比值及走航观测分析发现,A区大气VOCs主要来源于溶剂挥发及燃烧过程,C区VOCs主要源于交通,其他区VOCs主要源于燃烧及工业生产过程;同时,食物加工过程(如油烟)排放也是该市大气VOCs的重要来源.研究显示,降低大气中含氧有机物、烃类、苯系物浓度是控制该市大气臭氧、二次有机气溶胶生成的有效途径.

关键词：挥发性有机物(VOCs) 反应活性来源分析

克拉霉素治疗慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉的疗效观察

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中国实用医药 2015年第22期10卷 141-142页

作者：曹黎黎王芳张海燕枣庄矿业集团滕南医院 277519 枣庄矿业(集团)有限责任公司生活卫生管理中心

目的对比观察慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者小剂量、长期克拉霉素治疗和先手术后再克拉霉素治疗的效果。方法 48例慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者,按是否接受鼻息肉手术治疗分为两组,直接药物治疗组28例直接给予克拉霉素片治疗,维持3个月。手... 详细信息

目的对比观察慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者小剂量、长期克拉霉素治疗和先手术后再克拉霉素治疗的效果。方法 48例慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者,按是否接受鼻息肉手术治疗分为两组,直接药物治疗组28例直接给予克拉霉素片治疗,维持3个月。手术后药物治疗组20例首先行功能性内镜鼻窦手术单纯切除鼻息肉,伤口愈合后治疗同直接药物治疗组。应用视觉模拟量表评分(VAS)和Lund-Mackey鼻窦CT评分评价和对比两组治疗前后疗效。结果治疗后两组VAS评分及鼻窦CT评分与治疗前对比均显著改善(P均0.05)。结论小剂量、长期克拉霉素治疗慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉有较好疗效,先手术切除鼻息肉再口服克拉霉素治疗对改善临床症状更显著。

关键词：慢性鼻-鼻窦炎鼻息肉克拉霉素治疗结果

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小分子药物与DNA分子作用的AFM研究

电子显微学报 2011年第2期30卷 147-152页

作者：曹黎黎朱单田田王海涛黄宁平肖忠党东南大学生物电子学国家重点实验室生物科学与医学工程学院江苏南京210096

本文运用原子力显微镜(AFM)研究小分子药物作用于环状双链DNA分子所引起的DNA结构和构象变化。不同浓度药物与DNA分子作用前后的AFM图像显示:长春新碱作用于DNA分子,通过嵌入DNA双螺旋结构的临近碱基对之间,使DNA分子缠绕形成螺旋圈;随... 详细信息

本文运用原子力显微镜(AFM)研究小分子药物作用于环状双链DNA分子所引起的DNA结构和构象变化。不同浓度药物与DNA分子作用前后的AFM图像显示:长春新碱作用于DNA分子,通过嵌入DNA双螺旋结构的临近碱基对之间,使DNA分子缠绕形成螺旋圈;随药物浓度升高,DNA链被切割成片段,且长度不断减小;至浓度达到一定值,长春新碱化学结构改变,而不与DNA片段发生作用。阿司匹林与DNA分子作用,通过大沟或小沟的碱基对边缘作用叠加在DNA链上,使DNA链的某些部位变构,空间自由度受限而缠绕,随药物浓度升高,缠绕收缩加剧直至形成棒状细丝状,甚至断裂。5-羟色胺作用于DNA分子,DNA链变构缠绕;随药物浓度升高,缠绕程度增强,甚至缠绕成粗棒,其DNA链结构改变与阿司匹林作用下产生的变化基本一致,推测其作用也为插入到大小沟槽中。

关键词：原子力显微镜长春新碱阿司匹林 5-羟色胺 DNA构象变化