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狐貉大肠杆菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌三联菌壳疫苗的制备及免疫学研究

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特产研究 2024年

作者：靳元元王奇林曹润来孙春庆胡盼刘志杰王晓旭临沂市畜牧发展促进中心吉林大学动物医学学院人兽共患病研究所教育部重点实验室中国农业科学院特产研究所

为预防狐、貉细菌性肺炎，本实验研制了针对狐、貉大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和奇异变形杆菌的菌壳疫苗。实验采用NaOH稀释法测定这些细菌的最适抑菌浓度和时间，并通过最适抑菌浓度的NaOH处理细菌，评估其裂解率，制备菌壳。利用电镜观... 详细信息

为预防狐、貉细菌性肺炎，本实验研制了针对狐、貉大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和奇异变形杆菌的菌壳疫苗。实验采用NaOH稀释法测定这些细菌的最适抑菌浓度和时间，并通过最适抑菌浓度的NaOH处理细菌，评估其裂解率，制备菌壳。利用电镜观察处理后细菌表面结构，并以甲醛灭活疫苗为对照，评估三联菌壳疫苗的安全性、IgG抗体水平和免疫保护率。结果表明，NaOH 对大肠杆菌的最适抑菌浓度和时间为2.5 mg/mL、75 min，对肺炎克雷伯菌最适抑菌浓度和时间为2.5 mg/mL、120 min，对奇异变形杆菌最适抑菌浓度和时间为2.5 mg/mL、180 min，NaOH 处理后裂解率达到100%；电镜扫描显示细菌表面形成孔洞并排出内容物形成菌壳；免疫结果显示，三联菌壳疫苗IgG抗体水平高于甲醛灭活苗，且在免疫小鼠后可获得100%保护率。综上，利用NaOH处理可成功制备狐、貉大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和奇异变形杆菌菌壳，免疫小鼠可获得高于甲醛疫苗的IgG抗体水平和保护率。

关键词：细菌性肺炎菌壳免疫氢氧化钠

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梅花鹿主要传染病研究进展

特产研究 2023年

作者：曹润来王奇林王威阳王晓旭刘志杰中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室吉林省特种动物用生物制品工程中心

梅花鹿传染病是梅花鹿高死亡率和淘汰率的主要原因之一，其中梅花鹿人畜共患病更是威胁健康养殖、产品安全和公共卫生安全的重要因素。本文对近十年有关梅花鹿传染病，包括病毒、细菌、寄生虫等进行全面综述，旨在梳理梅花鹿传染病的基... 详细信息

梅花鹿传染病是梅花鹿高死亡率和淘汰率的主要原因之一，其中梅花鹿人畜共患病更是威胁健康养殖、产品安全和公共卫生安全的重要因素。本文对近十年有关梅花鹿传染病，包括病毒、细菌、寄生虫等进行全面综述，旨在梳理梅花鹿传染病的基本情况和发展趋势，为从业人员更好地了解、认识梅花鹿传染病，采取有效防控措施、防止传染病的发生提供指导。

关键词：梅花鹿传染病病原体

不同ELISA试剂盒对梅花鹿布鲁氏菌病抗体检测效果评价

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特产研究 2023年

作者：王奇林曹润来王威阳王晓旭刘志杰中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室

梅花鹿是布鲁氏菌易感宿主。目前，市面上没有专门用于梅花鹿布鲁氏菌病（布病）抗体检测的试剂盒。本研究通过比对市面上部分商品化布病抗体ELISA检测试剂盒对梅花鹿血清学样品检测效果，旨在筛选出更适合用于梅花鹿布病抗体检测的ELIS... 详细信息

梅花鹿是布鲁氏菌易感宿主。目前，市面上没有专门用于梅花鹿布鲁氏菌病（布病）抗体检测的试剂盒。本研究通过比对市面上部分商品化布病抗体ELISA检测试剂盒对梅花鹿血清学样品检测效果，旨在筛选出更适合用于梅花鹿布病抗体检测的ELISA试剂盒。本研究以虎红平板凝集实验（Rose bengal test, RBT）和试管凝集实验（Standard tube agglutination test, SAT）为参照方法，对实验室保存的200份梅花鹿血清进行布病阴性、阳性样品的筛选。以筛选得到的96份阳性血清和88份阴性血清为标准样品，对8种ELISA抗体试剂盒进行比较。结果显示，4种iELISA（编号：A～D）布病抗体检测试剂盒的敏感性介于4.2%～100%，特异性介于79.5%～96.6%，符合率介于40.8%～90.2%,Kappa值分布在0.870～0.630;4种c ELISA（编号：E～H）布病抗体检测试剂盒的敏感性介于88.5%～98.6%，特异性介于84.1%～90.9%，符合率介于87.0%～94.0%,Kappa值分布在0.738～0.879。研究结果表明，不同ELISA试剂盒对梅花鹿布病抗体的检测结果存在一定的差异，c ELISA试剂盒的检测结果较i ELISA试剂盒敏感性和符合率更高，其中试剂盒G更适用于梅花鹿布病抗体的检测。

关键词：梅花鹿布鲁氏菌病 ELISA 评价

伊氏锥虫PFR2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

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中国兽医科学 2022年第10期52卷 1302-1307页

作者：罗文蔚罗金任巧云刘文阁王奇林张高峰刁沛文曹润来陈则宇马永华刘光远甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046

为了探究伊氏锥虫副鞭毛杆蛋白2(paraflagellar rod protein 2,PFR2)的分子特征和免疫特征,利用PCR扩增伊氏锥虫PFR2基因,将扩增产物插入p QE-80L载体,经原核表达后,将纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,利用Western-blot鉴定反... 详细信息

为了探究伊氏锥虫副鞭毛杆蛋白2(paraflagellar rod protein 2,PFR2)的分子特征和免疫特征,利用PCR扩增伊氏锥虫PFR2基因,将扩增产物插入p QE-80L载体,经原核表达后,将纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,利用Western-blot鉴定反应原性。结果表明,PFR2基因大小为1803 bp,编码含601个氨基酸残基的蛋白质,SDS-PAGE电泳显示该蛋白大小约为66 ku,主要以包涵体的形式表达。用间接ELISA方法检测小鼠抗PFR2多克隆抗体的效价为1∶25600;Western-blot检测显示重组PFR2蛋白具有较好的反应原性。本研究为进一步研究伊氏锥虫PFR2蛋白的功能奠定了基础。

关键词：伊氏锥虫 PFR2基因原核表达多克隆抗体

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牛结节皮肤病病原传播媒介及传播特征分析

中国兽医科学 2022年第4期52卷 493-498页

作者：罗金阿娜古丽·牙生张高峰罗文蔚刘佩雯刁沛文曹润来任巧云刘文阁李有全殷宏刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 乌什县畜牧兽医站新疆阿克苏843400 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

牛结节皮肤病是一种病毒性跨界流行疾病,该病可导致患畜皮肤及器官广泛性结节、淋巴肿大、精神沉郁、食欲不振、高热等。研究显示,该病可短时间内在局部区域或者跨区域长距离传播,这其中媒介和非媒介因素起着关键作用。因此,厘清牛结节... 详细信息

牛结节皮肤病是一种病毒性跨界流行疾病,该病可导致患畜皮肤及器官广泛性结节、淋巴肿大、精神沉郁、食欲不振、高热等。研究显示,该病可短时间内在局部区域或者跨区域长距离传播,这其中媒介和非媒介因素起着关键作用。因此,厘清牛结节皮肤病的生物媒介或者非生物媒介对于该病的防控和流行病学调查有着重要的指导意义。本研究着重就牛结节皮肤病的生物媒介和非生物载体做一综述,为后期该病流行特征的研究以及防控措施的制定提供参考。

关键词：牛结节皮肤病媒介防控流行病学

长角血蜱Flotillin-1基因的原核表达及生物信息学分析

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中国兽医科学 2022年第7期52卷 892-900页

作者：王奇林刘文阁罗金任巧云刁沛文张高峰曹润来罗文蔚刘佩雯齐萌李静李文向莉关贵全罗建勋殷宏刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃兰州730046 塔里木大学动物科学学院新疆生产建设兵团塔里木畜牧科技重点实验室新疆阿拉尔843300 青海省动物疫病防控中心青海西宁810000 哈密市畜牧工作站新疆哈密839000 温宿县畜牧兽医站新疆阿克苏843000

为了研究蜱源性Flotillin-1基因的结构、生物学特性及组织分布特征,以长角血蜱为研究对象,通过基因克隆、原核蛋白表达及生物信息学方法分析Flotillin-1蛋白的分子特性,同时结合RT-qPCR技术分析该蛋白在长角血蜱不同发育阶段和不同组织... 详细信息

为了研究蜱源性Flotillin-1基因的结构、生物学特性及组织分布特征,以长角血蜱为研究对象,通过基因克隆、原核蛋白表达及生物信息学方法分析Flotillin-1蛋白的分子特性,同时结合RT-qPCR技术分析该蛋白在长角血蜱不同发育阶段和不同组织中的表达情况。结果显示,Flotillin-1基因的长度为1051 bp,约编码375个氨基酸残基,其蛋白质大小约41 ku,经超声破碎发现重组蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中。生物信息学分析显示,该蛋白为亲水性蛋白,由α-螺旋(77.31%)、延伸链(9.80%)、β-转角(2.52%)和无规则卷曲(10.36%)4种结构组成,有44个磷酸化位点,其中丝氨酸位点19个、苏氨酸位点16个、酪氨酸位点9个,无信号肽区域和跨膜结构域。RT-qPCR分析结果显示,Flotillin-1在长角血蜱不同发育阶段中,在卵中表达丰度最高,在饱血若蜱体内表达丰度最低;在不同组织中,在卵巢中的表达丰度最高,在中肠中的表达丰度最低。本次研究结果不仅有助于了解该蛋白的基因结构和组织分布,还为后续研究该蛋白的功能提供了依据。

关键词：长角血蜱 Flotillin-1基因蛋白表达生物信息学

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新疆边境地区蜱携带梨形虫种类的分子鉴定

动物医学进展 2022年第1期43卷 31-37页

作者：仇晓飞林汉亮罗金马力克·艾则孜康逢义倪军罗毅刘文阁马站任巧云曹润来谭阳春张高峰刁沛文王奇林刘佩雯关贵全罗建勋殷宏徐庚全刘光远甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所/家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室甘肃兰州730046 新疆维吾尔自治区动物卫生监督所新疆乌鲁木齐830011 兰州市经济作物试验推广站甘肃兰州730083 扬州大学江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心江苏扬州225009

为了调查新疆边境地区梨形虫在当地蜱中的携带情况,对采集于2019年4月份和5月份的新疆边境地区共25个县(市)的蜱进行形态学鉴定,提取DNA,利用梨形虫套式引物进行扩增并测序,并采用IQ-Tree软件的ML法构建不同地理株的进化关系。结果显示... 详细信息

为了调查新疆边境地区梨形虫在当地蜱中的携带情况,对采集于2019年4月份和5月份的新疆边境地区共25个县(市)的蜱进行形态学鉴定,提取DNA,利用梨形虫套式引物进行扩增并测序,并采用IQ-Tree软件的ML法构建不同地理株的进化关系。结果显示,采集到的1516只蜱包括4个属9个种,分别为森林革蜱(Dermacentor silvarum)、草原革蜱(D.nuttalli)、胫距革蜱(D.pavlovskyi)、边缘革蜱(D.marginatus)、亚洲璃眼蜱(Hyalomma asiaticum)、麻点璃眼蜱(H.rufipes)、小亚璃眼蜱(H.anatolicum)、血红扇头蜱(Rhipicephalus sanguineus)和刻点血蜱(Haemaphysalis punctate);对上述蜱种携带梨形虫种类的分子检测结果显示,共检出3种泰勒虫和6种巴贝斯虫,分别为绵羊泰勒虫(Theileria ovis)、马泰勒虫(T.equi)、泰勒虫未定种(Theileria sp.)、驽巴贝斯虫(Babesia caballi)、粗糙巴贝斯虫(B.crassa)、隐藏巴贝斯虫(B.occultans)、犬巴贝斯虫(B.canis canis)、莫氏巴贝斯虫(B.motasi)及巴贝斯虫未定种(Babesia sp.)。结果表明,蜱中梨形虫的平均携带率为27.77%,且新疆边境不同地区的蜱梨形虫的携带率不同。研究结果为梨形虫病的进一步防控以及相关措施的制定提供了依据。

关键词：蜱梨形虫分子鉴定

黑龙江省三地蜱体内Q热病原的感染情况和分子特征

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中国兽医科学 2021年第11期51卷 1385-1391页

作者：罗金李静张高峰刘佩雯罗文蔚苏小玲任巧云刘文阁曹润来刁培文孙世弟关贵全罗建勋殷宏李祥瑞刘光远中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室甘肃省动物寄生虫病重点实验室农业部草食动物疫病重点开放实验室甘肃兰州730046 南京农业大学动物医学院教育部动物健康与食品安全国际合作联合实验室江苏南京210095 中农威特生物科技股份有限公司青海西宁8100001 甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730046 甘肃省兰州新区农林水务局甘肃兰州730300 青海省动物疫病预防控制中心甘肃兰州7300701

为了解贝氏柯克斯体伴随蜱活动的流行特征以及该病原的分子特征,采用布旗法收集黑龙江省伊春、鹤岗及佳木斯等地共计461份饥饿蜱,并通过形态学鉴定其种类。经PCR扩增病原的16S rRNA基因,并测序,分析统计不同蜱种感染贝氏柯克斯体阳性率... 详细信息

为了解贝氏柯克斯体伴随蜱活动的流行特征以及该病原的分子特征,采用布旗法收集黑龙江省伊春、鹤岗及佳木斯等地共计461份饥饿蜱,并通过形态学鉴定其种类。经PCR扩增病原的16S rRNA基因,并测序,分析统计不同蜱种感染贝氏柯克斯体阳性率。采用Neighbor-Joining方法构建遗传进化树,分析不同地域不同蜱种来源贝氏柯克斯体的遗传进化关系。形态学鉴定结果表明,收集的蜱种主要包括日本血蜱(n=102)、全沟硬蜱(n=97)、森林革蜱(n=150)以及嗜群血蜱(n=112)。其中,日本血蜱的贝氏柯克斯体感染率高达12%,嗜群血蜱的贝氏柯克斯体感染率为6%,而全沟硬蜱及森林革蜱的贝氏柯克斯体感染率均为4%。基于16S rRNA序列分析表明,贝氏柯克斯体是一类高度保守的病原,不同地方株之间序列差异不显著。且贝氏柯克斯体与多个变形菌有着较近的亲缘关系,特别是G-变形菌在长期的进化过程中,有一支分化为贝氏柯克斯体,另外一支依然保持了G-变形菌的分子特征。基于上述分析,贝氏柯克斯体作为一种重要的人兽共患病原,可在多种蜱体内广泛存在,但其感染率略有不同。该病原的存在会给当地家畜及人的活动造成潜在的危害,为该病原的防控提出了挑战。因此,加强当地家畜饲养管理将成为首要解决的问题。其次,杀蜱也是防控Q热病原极其有效的方法。

关键词：蜱贝氏柯克斯体 Q热流行病学调查

融合Res3D、BiLSTM和注意力机制的羊只行为识别方法

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农业机械学报 2024年第4期55卷 221-230页

作者：袁洪波曹润柳程曼河北农业大学机电工程学院保定071001

识别动物行为可以为疾病预防和合理喂养提供重要依据,从而有助于更好地关注动物的健康和福利。本文提出了一种融合三维残差卷积神经网络、双向长短期记忆网络和注意力机制的深度学习网络模型(AdRes3D-BiLSTM)。AdRes3D-BiLSTM模型可以... 详细信息

识别动物行为可以为疾病预防和合理喂养提供重要依据,从而有助于更好地关注动物的健康和福利。本文提出了一种融合三维残差卷积神经网络、双向长短期记忆网络和注意力机制的深度学习网络模型(AdRes3D-BiLSTM)。AdRes3D-BiLSTM模型可以直接针对视频流进行识别,在AdRes3D部分引入了深度可分离卷积和注意力机制,不但减少了浮点运算量,提升了网络轻量化程度,还提高了时间和空间两个维度的特征提取能力;提取的特征被输入BiLSTM模块后,从前后2个方向对时序特征向量进行筛选和更新,最后对羊只行为进行准确识别。试验结果表明,AdRes3D-BiLSTM对羊只站立、躺卧、进食、行走和反刍5种行为的综合识别准确率达到了98.72%,帧速率达到52.79 f/s,模型内存占用量为28.03 MB。研究结果为基于视频流的动物行为识别提供了新的方法和思路。

关键词：羊只行为识别视频流 Res3D BiLSTM 注意力机制