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免疫复合物对单核巨噬细胞调节及其机制的实验研究

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免疫复合物对单核巨噬细胞调节及其机制的实验研究

作者：曲芸芸山东大学

学位级别：硕士

研究背景系统性红斑狼疮（SLE）是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫病,其血清具有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体。临床表现复杂多样,以病情缓解和急性发作交替为特点。患者的自身抗原主要是细胞核内的不溶性（... 详细信息

研究背景系统性红斑狼疮（SLE）是一种临床表现有多系统损害症状的慢性系统性自身免疫病,其血清具有以抗核抗体为主的大量不同的自身抗体。临床表现复杂多样,以病情缓解和急性发作交替为特点。患者的自身抗原主要是细胞核内的不溶性（如组蛋白、DNA）和可溶性（如核糖核蛋白）成分、细胞膜成分（如红细胞、血小板表面抗原）、细胞内其他成分（如磷脂）等。患者体内的自身抗体主要有抗核抗体（ANA）、抗双链DNA（dsDNA）抗体、抗单链DNA（ssDNA）抗体、抗Sm抗体、抗RNP抗体、抗SSA（Ro）抗体、抗SSB（La）抗体、抗rRNP抗体、抗磷脂抗体等。 SLE的病因和发病机制尚不明确,可能与遗传、环境、雌激素等因素有关。研究证明SLE的易感性与多个基因有关。多个基因在某种条件（坏境）下相互作用而改变了正常免疫耐受性而致病。外来抗原（如病原体、药物等）引起B细胞活化。在易感者因免疫耐受性减弱,B细胞通过交叉反应与模拟外来抗原的自身抗原相结合,并将抗原递呈给T细胞,使之活化,在T细胞活化刺激下,B细胞得以产生大量不同类型的自身抗体,造成大量组织损伤。所以B细胞的活化在SLE发病中起重要作用。 SLE中细胞因子存在表达和应答异常,影响细胞免疫和体液免疫,组成一个复杂的免疫调控网络。多种细胞因子（如TNF-α、IL-α、IFN-α）在炎症和组织损伤中起主要作用。但大多数细胞因子的来源还不很清楚。 SLE是一种免疫复合物病。免疫复合物由自身抗体和相应的自身抗原结合而成。当免疫复合物生成过多或清除有障碍时,就会沉积于皮肤、关节和肾脏等组织器官,引起炎性反应和免疫损伤。单核巨噬细胞系统（mononuclear phygocyte system, MPS）由人体重要的免疫细胞组成,在固有免疫应答中发挥重要作用,并参与特异性免疫应答。MPS通过吞噬异物、细菌、衰老和突变的细胞以及免疫复合物,维持机体的免疫稳态,同时活化的单核巨噬细胞能分泌大量趋化因子和炎症因子,参与机体固有和获得性免疫调节。由于SLE患者MPS的吞噬功能下降引起循环免疫复合物增高,因此易导致免疫复合物在组织器官沉积而引起免疫损伤。免疫复合物不仅参与组织损坏而且能刺激树突细胞产生细胞因子和活化B细胞。在狼疮的发生发展中,免疫复合物的清除障碍和MPS功能异常起重要作用,但免疫复合物和MPS的相互关系尚未有研究。在本研究中,我们着眼于免疫复合物对MPS功能的调节作用,探讨免疫复合物和MPS在SLE免疫病理中的作用及其机制。目的：通过研究免疫复合物对U937细胞和U937细胞诱导产生的巨噬细胞的增殖、分泌、吞噬功能的影响以及发挥作用的机制,全面观察免疫复合物对单核巨噬细胞系统潜在调节作用,从而探讨免疫复合物在SLE的发病和病情进展中可能发挥的作用。方法：U937细胞按常规方法培养和传代,状态良好的U937细胞直接用于检测增殖和分泌功能实验以及机制的研究。PMA诱导U937细胞成巨噬细胞后用于检测吞噬功能实验。实验共分六组。免疫复合物组：细胞坏死上清+系统性红斑狼疮（SLE）患者血清;对照组有五组：（坏死上清+正常人血清）组、坏死上清组、SLE血清组、正常人血清组和培养基组,以上分别作用于U937细胞和U937细胞诱导产生的巨噬细胞。24h后,用CCK-8法检测U937细胞的增殖,RT-PCR法检测U937细胞分泌肿瘤坏死因子α（TNF-α）和B细胞活化因子（BAFF）的变化,中性红比色法检测诱导产生的巨噬细胞的吞噬功能。RAGE抗体和HMGB1Abox阻断实验研究作用机制。结果：1免疫复合物能促使单核细胞的增殖,但使其吞噬能力降低表明单核巨噬细胞是一种异常活化状态。 2免疫复合物增加单核巨噬细胞的BAFF的分泌,表明免疫复合物通过表达大量BAFF从而活化B细胞产生大量自身抗体。 3免疫复合物可使单核细胞TNF-α分泌增加。表明在狼疮体内单核细胞是大量TNF-a的来源。 4抗RAGE抗体和HMGBlAbox拮抗免疫复合物的作用表明免疫复合物通过HMGBl-RAGE通路发挥作用。结论：（1）免疫复合物促进单核巨噬细胞的增殖,增加细胞因子的分泌,抑制吞噬功能,（2）HMGB1-RAGE通路在这一过程中发挥重要作用,从而参与了系统性红斑狼疮发生发展。

关键词：红斑狼疮免疫复合物单核巨噬细胞增殖分泌吞噬功能

脑心通胶囊调节急性脑梗死患者Th17/Treg平衡及相关细胞因子水平的价值

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国际检验医学杂志 2019年第17期40卷 2092-2095页

作者：亓敏曲芸芸山东中医药大学第二附属医院检验科

目的分析脑心通胶囊调节急性脑梗死患者辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡及相关细胞因子水平的价值。方法选取该院2016年2月至2018年5月收治的急性脑梗死患者104例,根据治疗方法不同分为对照组( n =52)和观察组( n =52)。对... 详细信息

目的分析脑心通胶囊调节急性脑梗死患者辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)平衡及相关细胞因子水平的价值。方法选取该院2016年2月至2018年5月收治的急性脑梗死患者104例,根据治疗方法不同分为对照组( n =52)和观察组( n =52)。对照组采用抗凝、降脂等对症治疗,观察组在对照组基础上联合脑心通胶囊治疗,分析2组患者治疗后的临床疗效。结果观察组总有效率为90.38%,对照组为 73.08 %,观察组患者总有效率高于对照组,差异有统计学意义( P 0.05 )。观察组治疗后Treg比例、Ang-2高于对照组,Th17比例、Th17/Treg、肽素、hs-CRP水平低于对照组( P 0.05)。观察组治疗后MMSE评分、ADL评分高于对照组,差异有统计学意义( P <0.05)。结论脑心通胶囊可调节急性脑梗死患者外周血Th17/Treg平衡,降低肽素、hs-CRP的表达,提高Ang-2的表达,改善患者认知功能和生活能力。

关键词：脑心通胶囊急性脑梗死辅助性T细胞17 调节性T细胞认知功能

原因不明复发性流产患者Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体检查价值分析

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中国医药科学 2019年第17期9卷 117-119,157页

作者：亓敏曲芸芸山东中医药大学第二附属医院检验科

目的观察Th1/Th2型细胞因子、M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)、封闭抗体检查在原因不明复发性流产患者中的价值。方法临床资料采集2017年10月~2018年10月妇产科诊治的80例URSA患者(设观察组),另选取我院80例正常妊娠女性(设正常妊娠组),... 详细信息

目的观察Th1/Th2型细胞因子、M-CSF(巨噬细胞集落刺激因子)、封闭抗体检查在原因不明复发性流产患者中的价值。方法临床资料采集2017年10月~2018年10月妇产科诊治的80例URSA患者(设观察组),另选取我院80例正常妊娠女性(设正常妊娠组),对两组Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体进行检测,比较两组检测情况。结果观察组治疗后URSA的TNF-α(27.69±8.96)pg/mL、INF-γ(28.16±5.25)pg/mL、IL-2(25.76±8.56)pg/mL均高于正常妊娠组、治疗后正常妊娠水平,IL-4(2.19±0.86)pg/mL、IL-6(4.09±1.14)pg/mL、IL-10(1.35±0.33)pg/mL及M-CSF(89.77±8.68)pg/mL均低于正常妊娠组、治疗后正常妊娠水平,差异有统计学意义(P<0.05);观察组治疗前BA阳性率11.25%比正常妊娠组85.00%低,差异有统计学意义(P<0.05),观察组治疗后URSA的BA阳性率52.50%低于正常妊娠组85.00%、治疗后正常妊娠87.50%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Th1/Th2型细胞因子、M-CSF、封闭抗体与原因不明复发性流产存在密切联系,其中Th1细胞因子表达高,Th2细胞因子及M-CSF表达性低,封闭抗体阳性率低时,易引起流产。

关键词：原因不明复发性流产 Th1型细胞因子 Th2型细胞因子 M-CSF 封闭抗体

重组人HMGB1 A box的表达纯化及对单核细胞的抑制作用

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细胞与分子免疫学杂志 2010年第4期26卷 333-336页

作者：朱敏崔彬焦玉莲王来城曲芸芸孙新平刘晓雯徐洁赵跃然山东大学附属省立医院中心实验室山东济南250021

目的:克隆人高迁移率族B1Abox(HMGB1 A box)基因,构建高效稳定的大肠杆菌(***)表达菌株,并探讨其对免疫复合物(IC)刺激单核细胞活化的抑制作用。方法:根据本室优化合成的HMGB1基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段并插入克隆载体pMD19... 详细信息

目的:克隆人高迁移率族B1Abox(HMGB1 A box)基因,构建高效稳定的大肠杆菌(***)表达菌株,并探讨其对免疫复合物(IC)刺激单核细胞活化的抑制作用。方法:根据本室优化合成的HMGB1基因序列设计引物,PCR扩增目的基因片段并插入克隆载体pMD19-T,菌落PCR、酶谱分析及DNA测序鉴定阳性克隆。重组克隆载体经NdeⅠ和XhoⅠ酶切,琼脂糖凝胶电泳分离目的基因,插入表达载体pQE-T7-2的相应位点,菌落PCR鉴定重组表达载体。重组菌株经IT-PG诱导,SDS-PAGE分析及Western blot鉴定重组蛋白。Ni2+-NTA层析柱纯化重组人HMGB1 A box,RT-PCR检测其对IC刺激单核细胞活化的抑制作用。结果:获得重组人HMGB1 A box的表达菌株,目的蛋白占菌体总蛋白的40%左右。Western blot显示重组蛋白能与抗人HMGB1多克隆抗体和抗His-Tag多克隆抗体特异反应。目的蛋白纯度高达90%以上,并能有效抑制IC诱导单核细胞分泌BAFF、IFN-γ及TNF-α。结论:成功构建了重组人HMGB1 A Box的表达载体,纯化的重组蛋白能有效抑制IC刺激单核细胞活化后细胞因子的分泌。

关键词：高迁移率族B1 A box 大肠杆菌表达纯化活性测定

心理干预对早期带状疱疹后神经痛患者生存质量的影响

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保健医学研究与实践 2019年第1期16卷 58-60页

作者：康继徐岩赵振宇曲芸芸 71939部队山东省济南市济南军区总医院神经外科山东中医药大学第二附属医院检验科

目的本研究探讨了心理干预对早期带状疱疹后神经痛患者生存质量的影响,旨在为临床治疗提供参考依据。方法本研究选取2015年3月-2017年3月济南市某医院收治的80例早期带状疱疹后神经痛患者为研究对象,采用随机数字表法将患者分为对照组... 详细信息

目的本研究探讨了心理干预对早期带状疱疹后神经痛患者生存质量的影响,旨在为临床治疗提供参考依据。方法本研究选取2015年3月-2017年3月济南市某医院收治的80例早期带状疱疹后神经痛患者为研究对象,采用随机数字表法将患者分为对照组与研究组,每组40例。对照组患者采取常规治疗。研究组患者在对照组患者治疗基础上采取心理干预。比较2组患者治疗前、治疗7d及治疗1个月时的视觉模拟评分法(VAS)评分、生存质量测定量表简表(QOL)评分;比较2组患者治疗1年时并发症发生情况。结果治疗前,2组患者VAS评分比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗7d及治疗1个月时,2组患者VAS评分均低于治疗前,且研究组患者低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。治疗7d及治疗1个月时,2组患者QOL评分均高于治疗前,且研究组患者高于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论心理干预在早期带状疱疹后神经痛的治疗中发挥着重要作用,其可有效缓解患者疼痛,同时提高患者的生存质量,临床效果显著,值得临床推广应用。

关键词：带状疱疹后神经痛心理干预水痘-带状疱疹病毒

shRNA沉默RAGE基因表达对前列腺癌细胞增殖的抑制作用

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肿瘤 2010年第3期30卷 199-204页

作者：孙新平马春燕焦玉莲曲芸芸朱敏刘晓雯徐洁赵跃然山东大学附属省立医院中心实验室

目的:构建针对人晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)基因的特异性短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体,探讨其对前列腺癌细胞DU145增殖的抑制作用。方法:设计并合成4种针对RAGE基因的特... 详细信息

目的:构建针对人晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)基因的特异性短发夹RNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体,探讨其对前列腺癌细胞DU145增殖的抑制作用。方法:设计并合成4种针对RAGE基因的特异性短链寡核苷酸,构建含shRNA RAGE的表达载体,转染高表达RAGE的亚克隆细胞株sub DU145-2C1。荧光显微镜下观察细胞转染后的情况,实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative-PCR,RFQ-PCR)检测转染shRNA后对RAGE mRNA表达的影响,Western印迹法检测对RAGE蛋白表达的影响,CCK-8法检测对细胞增殖的影响,划痕实验观察对细胞迁移能力的影响。结果:构建获得的shRNA RAGE表达载体能够有效抑制RAGE基因的表达(P<0.05),其中以shRNA RAGE-1(R1)的抑制作用最强,其对RAGE mRNA表达的抑制率为84%,对蛋白表达的抑制率为27%。细胞增殖结果显示,转染shRNA RAGE后细胞增殖能力明显降低;而细胞迁移能力则无明显变化。结论:shRNARAGE能有效下调RAGE基因的表达水平,抑制细胞增殖。

关键词：前列腺肿瘤糖基化终产物,高级 RNA,小分子干扰细胞,DU145

脑心通胶囊对急性脑梗死患者细胞免疫功能的影响

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中国医药科学 2018年第5期8卷 16-18页

作者：曲芸芸康继亓敏沈超王金鹏山东中医药大学第二附属医院检验科山东济南250001

目的探讨脑心通胶囊能否改善急性脑梗死患者的细胞免疫功能。方法选择我院2016年6月~2017年6月收治的100例急性脑梗死患者为研究对象,按入院的先后顺序分为对照组和观察组,并设立健康组。两组治疗组均给予西医常规治疗,观察组在西医治... 详细信息

目的探讨脑心通胶囊能否改善急性脑梗死患者的细胞免疫功能。方法选择我院2016年6月~2017年6月收治的100例急性脑梗死患者为研究对象,按入院的先后顺序分为对照组和观察组,并设立健康组。两组治疗组均给予西医常规治疗,观察组在西医治疗的基础上加服脑心通胶囊,疗程为2周,观察脑心通胶囊治疗前后CD4、CD8、CD4/CD8水平的变化。结果急性脑梗死患者与健康者比较,CD4、CD4/CD8水平降低,CD8升高。急性脑梗死患者CD4含量(36.05±3.32)比健康组(42.27±3.84)降低,差异有统计学意义(P<0.05),急性脑梗死患者CD4/CD8(2.01±0.25)比健康组(2.46±0.39)降低,差异有统计学意义(P<0.05),急性脑梗死患者CD8(23.97±3.48)比健康组(20.29±3.26)升高,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后CD4/CD8(2.23±0.27)比治疗前(2.01±0.25)升高,差异有统计学意义(P<0.05)。观察组CD4/CD8(2.33±0.12)比对照组(2.13±0.19)升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脑心通胶囊能够改善患者的细胞免疫功能,提高患者免疫力。

关键词：脑心通胶囊急性脑梗死 CD4 CD8

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免疫复合物对单核巨噬细胞的调节作用

山东大学学报（医学版） 2010年第4期48卷 54-58页

作者：曲芸芸马春燕朱敏刘晓雯孙新平徐洁赵跃然山东大学附属省立医院中心实验室济南250021

目的研究免疫复合物对单核巨噬细胞的增殖、细胞因子的分泌及吞噬功能的调节作用。方法免疫复合物组:细胞坏死上清+系统性红斑狼疮(SLE)患者血清;对照组有5组:坏死上清+正常人血清组、坏死上清组、SLE血清组、正常人血清组和培养基组,... 详细信息

目的研究免疫复合物对单核巨噬细胞的增殖、细胞因子的分泌及吞噬功能的调节作用。方法免疫复合物组:细胞坏死上清+系统性红斑狼疮(SLE)患者血清;对照组有5组:坏死上清+正常人血清组、坏死上清组、SLE血清组、正常人血清组和培养基组,以上分别作用于U937细胞和U937细胞诱导产生的巨噬细胞。24h后,用CCK-8法检测U937细胞的增殖,RT-PCR法检测U937细胞分泌肿瘤坏死因子α(TNF-α)和B细胞活化因子(BAFF)的变化,中性红比色法检测诱导产生的巨噬细胞的吞噬功能。结果与对照组相比,免疫复合物能明显促进U937细胞的增殖(P<0.05),TNF-α和BAFF的mRNA表达水平明显增加(P<0.05),并明显抑制巨噬细胞的吞噬功能(P<0.05)。结论在免疫复合物作用下,单核巨噬细胞系统(MPS)处于异常活化状态,使免疫复合物的形成增多而清除减少,从而参与了SLE的发生发展。

关键词：红斑狼疮免疫复合物单核巨噬细胞增殖分泌吞噬功能

2023/2024年冬季北半球大气环流特征及对我国天气气候的影响

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气象 2024年第7期50卷 887-896页

作者：章大全刘芸芸中国气象局气候研究重点开放实验室国家气候中心北京100081 南京信息工程大学气象灾害预报预警与评估协同创新中心南京210044

利用国家气象信息中心整编发布的中国台站观测资料和全球大气再分析资料,分析了2023/2024年冬季我国气候异常特征和可能成因。2023/2024年冬季,全国平均气温较常年同期偏高0.3℃,气温冷暖起伏大,总体呈现“前冬暖、后冬冷”的季节内变... 详细信息

利用国家气象信息中心整编发布的中国台站观测资料和全球大气再分析资料,分析了2023/2024年冬季我国气候异常特征和可能成因。2023/2024年冬季,全国平均气温较常年同期偏高0.3℃,气温冷暖起伏大,总体呈现“前冬暖、后冬冷”的季节内变化特征。全国平均降水量较常年同期偏多19.8%,中东部大部地区降水偏多。东亚冬季风和西伯利亚高压强度接近常年,东亚槽偏弱。欧亚中高纬500 hPa位势高度场呈西低东高的分布形势,并具有显著的阶段性变化特征,2023年12月和2024年1月以纬向环流为主,2月转为异常经向型环流,有利于中高纬冷空气南下入侵我国。受赤道中东太平洋厄尔尼诺、热带印度洋和大西洋海温异常偏暖以及北太平洋年代际涛动负位相等因子的协同影响,冬季西太平洋副热带高压偏强、偏西,菲律宾及南海上空异常反气旋阶段性活跃,欧亚对流层高层出现沿西风急流传播的波列,有利于热带水汽向我国中东部输送,配合中高纬冷空气南下,导致该地区发生多次大范围雨雪冰冻天气过程。

关键词：东亚冬季风冷空气厄尔尼诺西太平洋副热带高压季节内变化