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作者：曲学彬山东师范大学

学位级别：硕士

干细胞(Stem cell,SC)是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,有很高的可塑性。在一定条件下,SCs可以分化成多种功能细胞,具有再生各种组织器官的潜在功能,医学界称之为“万用细胞”。胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)是受精卵分裂发... 详细信息

干细胞(Stem cell,SC)是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,有很高的可塑性。在一定条件下,SCs可以分化成多种功能细胞,具有再生各种组织器官的潜在功能,医学界称之为“万用细胞”。胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESC)是受精卵分裂发育成囊胚时,内层细胞团(Inner cell mass)来源的细胞,其发育受多种内在机制和微环境因素的影响,大量的细胞因子通过复杂的网络联系对细胞的增值和分化进行调控,使之向指定的方向发展。目前,科学家已经能够在体外鉴别、分离、纯化、扩增和培养多种动物的ESC,建立了相应的细胞系。ESC模型的建立,为体外研究胚胎发育过程中各种因子的作用机制奠定了基础。Sox(SRY-related HMG-box gene)因子属于HMG(high mobility group)-box转录因子家族的成员,在脊椎动物中高度保守,并在胚胎发育过程中发挥重要作用。作为Sox家族的一员,Sox17在内胚层发育过程中必不可少。利用基因打靶技术制备的Sox17基因突变(Sox17-/-)小鼠原肠发育严重受阻,并导致胚胎致死。在非洲爪蟾(Xenopus laevis)胚胎外胚层异位表达Sox17基因,可引起其向内胚层分化。然而,目前对Sox17的研究还不深入(尤其在哺乳动物中),其在内胚层分化过程中的作用机制尚不明确。研究表明,在爪蟾中Sox17与Wnt信号通路中的关键因子β-catenin相互作用,从而引起下游基因的特异性转录。综上所述,针对Sox17因子的生物学功能及其作用机理的深入研究,将对阐明胚胎发育的基因调控机制,多种组织器官的发生发育过程和调控机制,以及临床多种畸形表型的发生机制等都具有十分重要的意义。本实验以小鼠ESC为研究对象,将鼠外源Sox17基因转入该细胞中,制备Sox17过表达模型,体外培养该细胞。以该细胞为研究对象,通过细胞形态特征、半定量RT-PCR和免疫组织化学等手段检测其分化过程中的各项指标(细胞水平、分子水平),研究Sox17在ESC分化过程中的功能,以期进一步探讨其影响内胚层分化的作用机制。本实验结果显示:1.带有鼠源Sox17基因的质粒载体pPyCAGIP通过Lipofectamine 2000转染小鼠ESC E14/T,外源Sox17基因的转染率大约为40%-50%。2.与阴性对照(空载体转染的细胞)相比,Sox17转染的细胞在有白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)存在的培养基中逐渐分化:细胞群落由集中变为分散;干细胞多能性标志基因Oct4,Rex-1表达水平明显下降。3.与阴性对照相比,Sox17转染的细胞原始内胚层标志基因Gata4,Gata6,Hnf1β,体壁内胚层标志基因LamininB1(LamB1),Thrombomodulin(TM),Disabled homolog2(Dab2),Sparc表达上升。表明Sox17诱导ESC向原始内胚层分化。***在去除LIF的培养基中悬浮培养形成拟胚体(Embryoid body,EB)。在EBs的第二天、第六天及第十天,与对照组细胞相比,转染了Sox17的EBs中原始内胚层标志基因Gata4,Gata6,Chicken ovalbumin upstream promoter transcription factorⅡ(Coup-tfⅡ),体壁内胚层标志基因LamB1,TM,Dab2,Sparc和脏壁内胚层标志基因Alpha fetoprotein(Afp),Bone morphogenetic protein 2(Bmp2)表达上调。终末内胚层标志基因Intestinal fatty acid binding protein(Ifabp),Pancreatic and duodenal homeobox 1(Pdx-1),中胚层标志基因Actc表达上升。另外,Wnt信号通路关键因子β-catenin表达水平增加。说明Sox17诱导EBs向原始内胚层及终末内胚层分化。综上所述,Sox17可能与β-catenin共同作用,在ESC发育过程中发挥着双重的作用:初期可诱导ESC向原始内胚层分化;随着ESC发育到EB阶段,Sox17不仅促进原始内胚层分化,而且还诱导终末内胚层的分化,从而影响内胚层起源的器官(如肝脏、胰腺等)的形成。

关键词： Sox17因子小鼠胚胎干细胞细胞分化原始内胚层终末内胚层

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旋弧式SF_(6)/N_(2)混合气体触发间隙开关电弧仿真与实验研究

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高电压技术 2023年第5期49卷 2111-2120页

作者：王永兴曲学彬王雯李志兵黄印董恩源大连理工大学电气工程学院大连116024 中国电力科学研究院有限公司北京100192

江苏—白鹤滩±800 kV特高压混合直流输电工程中,采用触发间隙开关作为400 kV母线消能装置开关。开关主电极采用了带有螺旋槽结构的平板型横磁旋弧电极。文中使用了三维MHD电弧模型对触发间隙开关主电极的旋弧特性进行了研究,仿真获得... 详细信息

江苏—白鹤滩±800 kV特高压混合直流输电工程中,采用触发间隙开关作为400 kV母线消能装置开关。开关主电极采用了带有螺旋槽结构的平板型横磁旋弧电极。文中使用了三维MHD电弧模型对触发间隙开关主电极的旋弧特性进行了研究,仿真获得了不同电极结构对电极控弧性能的影响。仿真结果显示电弧在横向磁场的作用下,整体沿电极边界进行高速旋转,降低了电弧对主电极的烧蚀程度。电弧转速随着电极旋弧瓣数的增加而增加,随着极板直径的增加而减小。通过与通流实验中拍摄的主电极旋弧过程进行对比,综合仿真和实验的结果,确定了工程应用的电极结构具体参数。

关键词： MHD模型 SF_(6)/N_(2)混合气体触发间隙电弧旋转横磁

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慢性粒细胞白血病肿瘤干细胞的免疫调节功能

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基础医学与临床 2011年第4期31卷 404-408页

作者：王椋曲学彬赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院组织工程中心北京100005

目的研究慢性粒细胞白血病(CML)骨髓来源的肿瘤干细胞的免疫学特征,比较其与正常人来源的间充质干细胞(MSC)是否存在免疫功能的异常。方法分离正常人和CML患者骨髓中的MSC,MLR法检测其对T细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对T细胞周期、... 详细信息

目的研究慢性粒细胞白血病(CML)骨髓来源的肿瘤干细胞的免疫学特征,比较其与正常人来源的间充质干细胞(MSC)是否存在免疫功能的异常。方法分离正常人和CML患者骨髓中的MSC,MLR法检测其对T细胞增殖的影响,流式细胞术检测其对T细胞周期、凋亡的作用情况。结果 CML和正常志愿者骨髓来源的MSC的细胞形态和表型没有差异,CML患者来源的MSC抑制T细胞增殖能力和抑制T细胞停留在G0/G1期的作用均减弱(CML MSC组74.5%±1.2%,BMSC组94.0%±1.9%,P<0.05),CML患者抑制T细胞凋亡的作用增强(CMLMSC组8.36%±1.31%,BMSC组14.10%±0.65%,P<0.05)。结论 CML患者骨髓来源的MSC存在明显的免疫调节功能缺陷,如果使用CML患者自体的MSC移植治疗可能不是一种很好的选择,对于CML患者最好是选用异基因的MSC移植。

关键词：慢性粒细胞白血病间充质干细胞免疫调节

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人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的低血清诱导法的建立

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基础医学与临床 2016年第8期36卷 1130-1134页

作者：冯年花曲学彬首都医科大学附属北京朝阳医院医学研究中心北京100020 徐州医学院神经生物学教研室江苏徐州221009

目的建立人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的低血清诱导方法。方法用低血清培养体系培养人胚胎干细胞，每3d半量换液，7-10d后消化成单细胞用扩增培养基培养，每3d传代1次。结果人胚胎干细胞呈克隆样增殖，边缘呈锯齿状，表达多能干细胞... 详细信息

目的建立人胚胎干细胞向间充质干细胞分化的低血清诱导方法。方法用低血清培养体系培养人胚胎干细胞，每3d半量换液，7-10d后消化成单细胞用扩增培养基培养，每3d传代1次。结果人胚胎干细胞呈克隆样增殖，边缘呈锯齿状，表达多能干细胞标志OCT4、SOX2和NANOG。诱导3d后，克隆间隙出现体积较小的成纤维样细胞，增殖能力强，经两次传代后可获得形态一致的长梭形细胞。这些细胞表达间质细胞标志VIMENTIN，细胞均表达CD105、CD90、CD73、CD44和HLA-ABC，不表达CD34、CD45和HLA-DR，且具有成脂和成骨分化能力。结论用低血清诱导法能快速获得较高纯度的人胚胎干细胞源性间充质干细胞。

关键词：间充质干细胞胚胎干细胞低血清诱导

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白介素10抑制幼稚T细胞分化为辅助性T细胞17的研究

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神经解剖学杂志 2015年第4期31卷 423-427页

作者：韩晶晶周骏王婷曲学彬徐州医学院临床学院神经病学实验室徐州221002徐州221009 徐州医学院基础医学院细胞生物学与神经生物学教研室徐州221009

目的:研究白介素10(interleukin,IL-10)在辅助性T细胞17(helper T cell,Th17)体外诱导分化中的作用。方法:分选小鼠脾脏CD4+幼稚T(nave T)细胞,在经典的Th17诱导条件中加入不同浓度的IL-10中和抗体(0、1、5、10μg/ml NA-IL-10),流式... 详细信息

目的:研究白介素10(interleukin,IL-10)在辅助性T细胞17(helper T cell,Th17)体外诱导分化中的作用。方法:分选小鼠脾脏CD4+幼稚T(nave T)细胞,在经典的Th17诱导条件中加入不同浓度的IL-10中和抗体(0、1、5、10μg/ml NA-IL-10),流式细胞术检测各组CD4+IL-17+细胞的生成比率,ELISA法检测各组培养上清中Th17特异细胞因子IL-17A和IL-17F的浓度,qRT-PCR及Western Blot检测各组细胞中表达转录因子维甲酸相关孤核受体γt(retinoid-related orphan nuclear receptor gamma t,Rorγt)的表达水平。结果:在经典的诱导CD4+nave T细胞分化为Th17的过程中,IL-10的浓度随诱导天数的增加而逐渐上升。加入NA-IL-10后,IL-17+细胞的诱导比例随NA-IL-10浓度的增加而逐渐上升,在10μg/ml的NA-IL-10条件下,诱导生成的IL-17+细胞可达22.1%±4.5%,与无NA-IL-10组8.1%±1.9%相比差异有统计学意义(P<0.05)。10μg/ml NA-IL-10组IL-17A和IL-17F的浓度以及Rorγt的表达水平均明显高于无NA-IL-10组(P<0.05)。结论:降低培养条件中IL-10的水平能够有效地促进Th17的体外诱导分化,也进一步验证了IL-10对Th17分化的抑制作用。

关键词：辅助性T细胞17 白介素-10 幼稚T细胞中和抗体

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小鼠脑组织Luxol Fast Blue染色的几种不同处理条件的比较

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解剖学杂志 2014年第3期37卷 407-409页

作者：郭瑞董富兴王贝罗梦娇曲学彬于红丽姚瑞芹徐州医学院生物学教研室徐州221004

髓鞘是包裹在神经细胞轴突外面的管状鞘,由髓鞘磷脂构成,成节段性.髓鞘染色是一种用来观察正常和病理情况下髓鞘是否完整、有无变性、坏死及修复情况的方法[1],在神经组织的病理诊断和研究中具有重要的应用价值.髓鞘染色方法有多种,基... 详细信息

髓鞘是包裹在神经细胞轴突外面的管状鞘,由髓鞘磷脂构成,成节段性.髓鞘染色是一种用来观察正常和病理情况下髓鞘是否完整、有无变性、坏死及修复情况的方法[1],在神经组织的病理诊断和研究中具有重要的应用价值.髓鞘染色方法有多种,基于不同的原理,可利用媒染剂、油溶性染料或锇酸与类脂质的特殊反应[2].Luxol Fast Blue(LFB)是一种油溶性染料,是国际上认可的髓鞘染色剂,经LFB染色,髓磷脂被染成蓝色,据此观察染色阳性纤维的深浅和多少,还可用来定量分析脱髓鞘病变及髓鞘再生等有关髓鞘改变情况[3].但目前已报道的LFB染色的操作步骤不完全一致,有的步骤多且烦琐,有的实验周期较长.为此,我们通过比较不同的处理条件摸索了一种更为简便、有效、节时的LFB染色方法.

关键词：小鼠脑组织髓鞘染色髓鞘磷脂

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骨髓Sca-1^+间充质干细胞移植减轻小鼠迟发型超敏反应

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基础医学与临床 2012年第2期32卷 133-137页

作者：曲学彬曾洋刘星霞赵春华中国医学科学院北京协和医学院基础医学研究所组织工程中心北京100005

目的探讨骨髓Sca-1+间充质干细胞(BMSCs)在迟发型超敏反应(DTH)小鼠中的免疫调控作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组及MSCs注射组。注射组于0、2及6 d腹腔注射Sca-1+BMSCs,对照组注射0.9%氯化钠注射液。所有小鼠在7和14 d时分别于背... 详细信息

目的探讨骨髓Sca-1+间充质干细胞(BMSCs)在迟发型超敏反应(DTH)小鼠中的免疫调控作用。方法 BALB/c小鼠随机分为对照组及MSCs注射组。注射组于0、2及6 d腹腔注射Sca-1+BMSCs,对照组注射0.9%氯化钠注射液。所有小鼠在7和14 d时分别于背部皮下与足跖注射C57BL/6小鼠脾细胞。24 h后用千分尺测量小鼠足跖的肿胀,ELISA法测外周血细胞因子及FACS法测脾脏免疫细胞比例。结果注射组小鼠足跖的肿胀程度[(0.368±0.126)mm]显著轻于对照组[(0.731±0.111)mm,P<0.01]。注射组外周血中IL-10和TGF-β含量显著高于对照组(P<0.05);而IL-12和TNF-α水平显著低于对照组(P<0.05)。注射组小鼠脾脏调节型T细胞和树突细胞的比例均明显高于对照组(P<0.05)。结论 BMSC通过上调抑炎因子和调节型免疫细胞的数量而减轻DTH小鼠的免疫反应。

关键词：间充质干细胞迟发型超敏反应免疫反应

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敲除toll样受体4基因对小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

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神经解剖学杂志 2022年第3期38卷 287-292页

作者：韩晶晶张英姚瑞芹曲学彬徐州医科大学附属医院神经内科徐州221000 徐州医科大学第一临床医学院神经内科学教研室徐州221000 徐州医科大学生命科学学院细胞生物学与神经生物学教研室徐州221000

目的:研究toll样受体4(TLR4)在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用。方法:C57BL/6野生型(WT)和Tlr4敲除(Tlr4)小鼠注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG)建立EAE模型。定期记录神经功能评分及体重变化;苏木素-伊红(HE)和劳... 详细信息

目的:研究toll样受体4(TLR4)在小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用。方法:C57BL/6野生型(WT)和Tlr4敲除(Tlr4)小鼠注射髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG)建立EAE模型。定期记录神经功能评分及体重变化;苏木素-伊红(HE)和劳克坚牢蓝(LFB)染色观察脊髓组织内炎症细胞浸润及髓鞘脱失情况;免疫荧光染色检测髓鞘碱性蛋白(MBP)的表达。结果:MOG免疫后,与WT组相比,Tlr4小鼠体重下降程度较轻、发病时间延迟、神经功能评分降低、炎性细胞浸润减少、髓鞘脱失减轻、MBP表达增加。结论:敲除Tlr4可减轻EAE小鼠的病理症状。

关键词：多发性硬化实验性自身免疫性脑脊髓炎脱髓鞘病变 toll样受体4 小鼠

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IL-2抑制小鼠CD4^+ CD62L^+ T细胞分化为Th17细胞

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基础医学与临床 2016年第1期36卷 19-23页

作者：周骏王婷姚瑞芹曲学彬徐州医学院基础医学院细胞生物学与神经生物学教研室江苏徐州221009

目的研究IL-2对小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞在体外向Th17细胞分化的作用。方法免疫磁珠法分选C57BL/6小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,于抗体包被的培养板中培养3 d,实验分为对照组和IL-2处理组。对照组为经典Th17诱导分化培养基,IL-2处理组在对... 详细信息

目的研究IL-2对小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞在体外向Th17细胞分化的作用。方法免疫磁珠法分选C57BL/6小鼠脾脏CD4+CD62L+T细胞,于抗体包被的培养板中培养3 d,实验分为对照组和IL-2处理组。对照组为经典Th17诱导分化培养基,IL-2处理组在对照组基础上于培养体系中添加IL-2。CFSE染色检测细胞增殖,Annexin V-PI法检测细胞凋亡,ELISA检测培养上清中IL-17A的浓度,荧光定量PCR检测Rorγt mRNA的表达,流式细胞术检测CD4^+IL-17^+Th17的生成比例以及Rorγt的表达。结果磁珠分选的小鼠脾脏CD4+CD62L+nave T细胞纯度高于95%。与对照组相比,IL-2处理组细胞数目明显增多,增殖能力明显增强(P<0.05),细胞凋亡比例降低(P<0.05);IL-2处理组培养上清中IL-17A的浓度明显降低(P<0.05),且CD4+IL-17+细胞比例下降,其特异性转录因子Rorγt的表达水平也显著降低(P<0.05)。结论 IL-2在CD4+CD62L+T细胞分化为Th17的过程中,能够促进T细胞的增殖并且抑制Th17的分化。

关键词： IL-2 Th17 增殖分化

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稳定过表达Olig2的小鼠胚胎干细胞系的建立

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神经解剖学杂志 2014年第4期30卷 425-430页

作者：王贝罗梦娇郭瑞董富兴陈彦王会平曲学彬姚瑞芹徐州医学院生物学教研室徐州221009

目的:建立稳定过表达Olig2的小鼠胚胎干细胞(mESCs)系。方法:从含有Olig2的质粒中利用PCR技术克隆Olig2基因编码序列,酶切连接入GV218载体,形成Olig2-GV218重组载体。将构建好的Olig2-GV218载体与两种病毒辅助包装原件载体质粒共转染293... 详细信息

目的:建立稳定过表达Olig2的小鼠胚胎干细胞(mESCs)系。方法:从含有Olig2的质粒中利用PCR技术克隆Olig2基因编码序列,酶切连接入GV218载体,形成Olig2-GV218重组载体。将构建好的Olig2-GV218载体与两种病毒辅助包装原件载体质粒共转染293T细胞,制备并浓缩慢病毒颗粒,侵染mESCs,嘌呤霉素筛选的阳性克隆传代培养10代后鉴定细胞内Olig2的表达。结果:PCR扩增得到含Olig2基因编码序列的特异性条带。重组的Olig2-GV218载体中Olig2编码序列与目标序列几乎一致。携带有Olig2-GV218载体的慢病毒能够正常感染mESCs,表达Olig2-GFP融合蛋白,并稳定遗传。结论:成功建立了稳定过表达Olig2的小鼠胚胎干细胞系。

关键词：小鼠胚胎干细胞 Olig2 过表达

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