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蒙古绵羊Brachyury基因的克隆与生物信息学分析

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中国畜牧兽医 2015年第5期42卷 1056-1062页

作者：任丽欣智达夫李琦曹贵方内蒙古农业大学生命科学学院呼和浩特010000

为了对蒙古绵羊Brachyury基因DNA序列进行研究,试验主要利用PCR技术对蒙古绵羊Brachyury基因序列进行扩增并克隆,首次获得了完整的Brachyury基因序列。利用NCBI网站上的BLAST功能将测序结果同已发表绵羊Brachyury基因序列进行比对,结果... 详细信息

为了对蒙古绵羊Brachyury基因DNA序列进行研究,试验主要利用PCR技术对蒙古绵羊Brachyury基因序列进行扩增并克隆,首次获得了完整的Brachyury基因序列。利用NCBI网站上的BLAST功能将测序结果同已发表绵羊Brachyury基因序列进行比对,结果显示同源性高达99%,大部分序列完全一致。将该序列与GenBank数据库中登录的牛、人、大鼠、小鼠、山羊、猴和蝾螈等10个不同物种的Brachyury分子序列进行了比对分析。结果显示,蒙古绵羊Brachyury氨基酸序列与牛Brachyury氨基酸序列同源性最高,为96.30%;最低的则是来源于蝾螈的Brachyury氨基酸序列,仅为58.45%。遗传进化分析进一步证实蒙古绵羊与牛的Brachyury亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。此外,序列分析发现蒙古绵羊Brachyury基因高度保守,仅个别碱基发生突变。研究结果表明,蒙古绵羊Brachyury基因序列与其他脊椎动物的Brachyury基因序列也具有高度的保守性。

关键词： Brachyury基因脊椎动物克隆序列分析

LPS通过TLR4影响绵羊输卵管上皮细胞SBD-1的表达

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畜牧兽医学报 2016年第1期47卷 79-84页

作者：李琦智达夫延沁刘默宁郑欣欣曹贵方内蒙古农业大学兽医学院动物组织胚胎与发育生物学研究室呼和浩特010018

旨在研究脂多糖(LPS)对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)表达的影响及其调控途径,本研究设置不同浓度(10ng·mL-1、50ng·mL-1、100ng·mL-1、200ng·mL-1、1mg·mL-1)LPS,分别作用不同时间(0、1、3、6、12和24h),检测绵羊输卵管... 详细信息

旨在研究脂多糖(LPS)对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)表达的影响及其调控途径,本研究设置不同浓度(10ng·mL-1、50ng·mL-1、100ng·mL-1、200ng·mL-1、1mg·mL-1)LPS,分别作用不同时间(0、1、3、6、12和24h),检测绵羊输卵管上皮细胞SBD-1和Toll样受体-4(TLR4)mRNA表达水平,通过免疫组化检测SBD-1表达定位,并进一步通过TLR4阻断试验来证实TLR4介导LPS引起SBD-1表达。结果表明,SBD-1蛋白表达于输卵管上皮细胞。LPS以浓度和时间依赖方式影响绵羊输卵管上皮细胞中SBD-1的表达,且100ng·mL-1 LPS在作用12h后,SBD-1的表达水平达到最高。阻断试验表明,TLR4介导LPS对SBD-1的表达调控。综上表明,LPS可以影响绵羊输卵管上皮细胞表达SBD-1,且该过程通过TLR4介导。

关键词：输卵管脂多糖绵羊β-防御素-1 Toll样受体-4

草原短尾羊Brachyury蛋白多克隆抗体制备

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2022年第4期50卷 1-7,16页

作者：杨光霍雨佳苏红智达夫刘默凝窦傲蕾王家业曹贵方内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区基础兽医学重点实验室内蒙古呼和浩特010018

【目的】克隆草原短尾羊Brachyury基因(即T基因)编码区(CDS),并制备Brachyury蛋白特异性多克隆抗体,为草原短尾羊短尾表型机制研究提供重要的试验材料。【方法】提取草原短尾羊16 d胚胎的组织RNA,反转成cDNA,以cDNA为模板,采用PCR方法... 详细信息

【目的】克隆草原短尾羊Brachyury基因(即T基因)编码区(CDS),并制备Brachyury蛋白特异性多克隆抗体,为草原短尾羊短尾表型机制研究提供重要的试验材料。【方法】提取草原短尾羊16 d胚胎的组织RNA,反转成cDNA,以cDNA为模板,采用PCR方法克隆草原短尾羊Brachyury基因CDS全长序列。将Brachyury基因CDS全长序列连接至pEASY■-Blunt E1载体,构建原核表达载体pEASY■-Blunt E1-Brachyury,并进行NheⅠ和EcoRⅠ双酶切鉴定。将原核表达载体导入RosettagamiB(DE3)大肠杆菌,并进行IPTG诱导表达,对表达产物进行回收纯化。利用纯化后的表达产物免疫6周龄日本大耳白兔,用间接ELISA(iELISA)法测定血清多克隆抗体效价。以制备的多克隆抗体为一抗,采用Western blot法检测草原短尾羊16,20,25和30 d胚胎中Brachyury蛋白的表达水平。【结果】克隆了1335 bp的草原短尾羊Brachyury基因CDS全长序列,成功构建了原核表达载体pEASY■-Blunt E1-Brachyury,表达获得了49.16 ku的重组Brachyury蛋白。成功制备了重组Brachyury蛋白多克隆抗体,抗体效价达1∶1500,该多克隆抗体可以特异性识别草原短尾羊胚胎中的Brachyury蛋白。草原短尾羊16 d胚胎中Brachyury蛋白的表达量最高。【结论】成功制备草原短尾羊Brachyury蛋白兔血清多克隆抗体,抗体效价为1∶1500,该多克隆抗体可以特异性识别草原短尾羊胚胎中的Brachyury蛋白。

关键词：草原短尾羊胚胎 Brachyury基因多克隆抗体制备

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LPS对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-1表达的影响及其机制研究

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中国预防兽医学报 2015年第6期37卷 477-480页

作者：李琦曹贵方智达夫任丽欣延沁刘默宁郑欣欣内蒙古农业大学兽医学院动物组织胚胎与发育生物学研究室内蒙古呼和浩特010018

为研究脂多糖(LPS)对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)表达的影响及其分子机制,本研究通过荧光定量PCR检测不同浓度LPS作用不同时间对绵羊输卵管上皮细胞SBD-1 m RNA的相对表达量的影响,通过western blot检测经LPS处理后P38 MAPK... 详细信息

为研究脂多糖(LPS)对绵羊输卵管上皮细胞β-防御素-1(SBD-1)表达的影响及其分子机制,本研究通过荧光定量PCR检测不同浓度LPS作用不同时间对绵羊输卵管上皮细胞SBD-1 m RNA的相对表达量的影响,通过western blot检测经LPS处理后P38 MAPK通路的活化情况,通过荧光定量PCR检测经P38 MAPK通路抑制剂(SB203580和SB202190)处理后LPS对SBD-1 m RNA相对表达量的影响。结果表明,LPS呈浓度和时间依赖方式诱导绵羊输卵管上皮细胞中SBD-1的表达,100 ng/m L的LPS在12 h诱导效果最佳。进一步研究显示,100 ng/m L的LPS可以显著激活P38 MAPK通路,而其抑制剂SB203580和SB202190可以阻断LPS对SBD-1的诱导作用。这些结果表明,LPS可以诱导绵羊输卵管上皮细胞表达SBD-1,并且P38 MAPK参与调控这个过程。本实验结果为进一步研究β-防御素的调控机制,探索输卵管炎发病机理以及合理开发输卵管炎相关药物提供了实验依据。

关键词：脂多糖 β-防御素-1 P38 MAPK

草原短尾羊TBXT基因RACE克隆及胚胎各个时期表达量分析

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中国畜牧杂志 2022年第4期58卷 104-110页

作者：杨光霍雨佳智达夫苏红杨宏新窦傲蕾曹贵方内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区基础兽医学重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为鉴定草原短尾羊TBXT mRNA在胚胎发育中的表达趋势,分析其TBXT cDNA全长序列。本研究使用实时荧光定量PCR(Quantitative Real time PCR)方法对草原短尾羊14、16、20 d和25 d胚胎中TBXT mRNA相对表达量进行分析,之后使用RACE(Rapid Ampl... 详细信息

为鉴定草原短尾羊TBXT mRNA在胚胎发育中的表达趋势,分析其TBXT cDNA全长序列。本研究使用实时荧光定量PCR(Quantitative Real time PCR)方法对草原短尾羊14、16、20 d和25 d胚胎中TBXT mRNA相对表达量进行分析,之后使用RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends)技术克隆TBXT cDNA全长。结果显示:TBXT mRNA在16 d胚胎中相对表达量最高,草原短尾羊TBXT cDNA全长为2426 bp(GenBank登录号:MZ146381),其中开放阅读框(ORF)为1335 bp,编码444个氨基酸,3’非编码区(3’UTR)和ployA尾长度为763 bp,5’非编码区(5’UTR)长度为328 bp;系统进化树显示草原短尾羊Brachyury与山羊进化关系最近,与羊驼关系最远,氨基酸同源性比对结果显示不同物种之间Brachyury同源性很高,表明在脊索动物进化过程中Brachyury功能相对保守。

关键词：草原短尾羊实时荧光定量 RACE TBXT基因

鉴别牛羊布鲁菌实时荧光定量PCR方法的建立

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畜牧与饲料科学 2013年第5期34卷 7-12页

作者：苏娇王艳杰智达夫关平原内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

[目的]建立准确、快速检测布鲁菌、羊种布鲁菌、牛种布鲁菌的方法。[方法]以BCSP31作为布鲁菌菌属特异性基因,以IS711插入元件作为布鲁菌菌种特异性标志,设计引物和Taqman探针;分别构建标准阳性质粒模板,将其10倍倍比稀释作多重实时荧... 详细信息

[目的]建立准确、快速检测布鲁菌、羊种布鲁菌、牛种布鲁菌的方法。[方法]以BCSP31作为布鲁菌菌属特异性基因,以IS711插入元件作为布鲁菌菌种特异性标志,设计引物和Taqman探针;分别构建标准阳性质粒模板,将其10倍倍比稀释作多重实时荧光定量PCR标准曲线,评价多重实时荧光定量PCR反应体系的敏感性、特异性、重复性。[结果]建立了鉴别牛种、羊种布鲁菌的实时荧光定量PCR方法,并用该方法对临床样品进行检测。[结论]所建立的多重实时荧光定量PCR诊断方法能够快速、准确地鉴别牛种和羊种布鲁菌。

关键词：实时荧光定量PCR 布鲁菌牛种布鲁菌羊种布鲁菌 Taqman探针

17β-雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞Ghrelin表达量的影响

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中国兽医科学 2017年第8期47卷 1056-1061页

作者：李秀男高甜智达夫王鑫刘默凝魏薇张钰堃宝淑英曹贵方内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区基础兽医学重点实验室内蒙古呼和浩特010018 赤峰市喀喇沁旗锦山河南街道办事处内蒙古赤峰024000

为了研究17β-雌二醇对Ghrelin表达量的影响,根据绵羊Ghrelin基因mRNA的保守序列设计特异性引物,通过体外培养绵羊输卵管上皮细胞,提取经17β-雌二醇处理的绵羊输卵管上皮细胞总RNA,并反转录成cDNA,以β-actin基因为内参,采用SYBR Gree... 详细信息

为了研究17β-雌二醇对Ghrelin表达量的影响,根据绵羊Ghrelin基因mRNA的保守序列设计特异性引物,通过体外培养绵羊输卵管上皮细胞,提取经17β-雌二醇处理的绵羊输卵管上皮细胞总RNA,并反转录成cDNA,以β-actin基因为内参,采用SYBR GreenⅠ染料法进行实时荧光定量PCR检测。结果显示,绵羊输卵管上皮细胞经17β-雌二醇处理后,Ghrelin基因的表达量有显著性增加,在处理后第6小时表达量达到最高。结论,17β-雌二醇对绵羊输卵管上皮细胞表达Ghrelin有显著的促进作用,这为后续试验研究打下了良好基础。

关键词：绵羊输卵管上皮细胞 17β-雌二醇 Ghrelin

Brachyury基因在胚胎发育过程中的重要作用相关研究进展

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畜牧与饲料科学 2020年第2期41卷 13-17页

作者：苏红智达夫杨光王彤田志鹏曹贵方内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018 内蒙古自治区基础兽医学重点实验室内蒙古呼和浩特010018 内蒙古农业大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010018

Brachyury(T)基因是T-box家族中第一个被鉴定出来的基因,该家族也因此得名。科学家们一直在探索Brachyury基因和T-box家族各成员的分子结构和生理功能,研究发现,Brachyury基因在多种动物中同源性都比较高,这说明T基因在进化过程中高度保... 详细信息

Brachyury(T)基因是T-box家族中第一个被鉴定出来的基因,该家族也因此得名。科学家们一直在探索Brachyury基因和T-box家族各成员的分子结构和生理功能,研究发现,Brachyury基因在多种动物中同源性都比较高,这说明T基因在进化过程中高度保守;Brachyury基因在哺乳动物胚胎发育过程中对脊索、尾芽和尿囊的形成起到不可或缺的作用,而导致胚胎发育出现障碍的原因极有可能是Brachyury基因的改变引起了与Wnt和FGF信号通路相关因子表达的上调或下调;后来的研究还发现,动物短尾表型的形成似乎也与Brachyury基因在胚胎发育期间的表达有密切关系。基于国内外对Brachyury基因的研究现状,对Brachyury基因同源性和其在胚胎发育期间所起到的调控作用进行整理归纳,以期为相关研究提供参考。

关键词： Brachyury基因胚胎发育短尾表型研究进展

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抗菌肽在动物生产上的应用

畜牧与饲料科学 2015年第12期36卷 92-94页

作者：严沁张传强智达夫刘默凝李琦曹贵方内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010018

抗菌肽作为新型环保抗菌药物,具有广谱抗菌活性,能有效抑制寄生虫、病毒的生长且不易产生耐药性,有良好的应用前景。综述了抗菌肽分类、作用机理、在动物生产上的应用及展望。

关键词：抗菌肽分类作用机理生产应用