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脂质体包裹MUC2反义核酸抑制胃癌细胞增殖的初步探讨

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癌症 2004年第7期23卷 816-820页

作者：肖春卫易永芬重庆医科大学病理学教研室重庆400016

背景与目的我们前期研究发现粘蛋白MUC2在胃癌组织中的表达与肿瘤的生物学行为密切相关。本研究拟观察MUC2反义脱氧寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)对人胃癌细胞SGC7901生长抑制作用。方法应用硫代磷酸修饰的MUC2ASODN... 详细信息

背景与目的我们前期研究发现粘蛋白MUC2在胃癌组织中的表达与肿瘤的生物学行为密切相关。本研究拟观察MUC2反义脱氧寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)对人胃癌细胞SGC7901生长抑制作用。方法应用硫代磷酸修饰的MUC2ASODN经阳离子脂质体包裹后转染入SGC7901细胞,采用MTT法、形态学观察测定MUC2ASODN对SGC7901细胞的增殖抑制作用,免疫组化检测细胞中MUC2和p16蛋白的表达情况。结果不同浓度ASODN均能抑制SGC7901细胞的增殖,在48h抑制作用最强,0.5μmol/LASODN对细胞的抑制率为55%,随时间延长抑制作用逐渐减弱。SGC7901细胞转染MUC2ASODN后,与对照组相比,光镜下观察到细胞数量减少、体积变小、核分裂明显减少、可见较多的坏死。透射电镜下见线粒体肿胀、细胞内脂滴增多、髓样结构、染色质边集等。免疫组化SP法染色显示转染ASODN后,SGC7901细胞MUC2蛋白表达水平明显降低,p16蛋白表达明显增强。结论使用人工合成MUC2ASODN能有效抑制人胃癌细胞SGC7901的增殖。

关键词：胃肿瘤 MUC2 反义寡核苷酸

MRP、GST-π、TopoⅡα和LRP在胃癌组织中的表达及意义

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癌症 2003年第5期22卷 496-499页

作者：于冬青易永芬重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

背景与目的:多药耐药相关蛋白(multidrugresistance-associatedprotein,MRP)、肺耐药蛋白(lungresistanceprotein,LRP)、谷胱甘肽转移酶(glutathione-S-transferase-π,GST-π)和拓扑异构酶Ⅱα(topoisomeraseⅡα,TopoⅡα)均在多药耐药中发挥重要作用。联合检测它们在胃癌组织中的表达,目前国内外报道极少。本研究旨在探讨联合检测MRP、GST-π、TopoⅡα、LRP在胃癌组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化SP法检测MRP、GST-π、TopoⅡα、LRP在90例胃癌标本中的表达,采用χ2检验和Fisher精确检验分析它们表达的意义。结果:(1)MRP、GST-π、TopoⅡα、LRP在胃癌组织中的阳性表达率分别为88.9%、91.1%、74.4%和87.7%,均高于在正常胃粘膜组织中的表达(P0.05)。(3)MRP、GST-π、TopoⅡα、LRP两两间均无相关性。结论:MRP、GST-π、TopoⅡα和LRP均在胃癌原发性多药耐药中起重要作用,它们在胃癌组织中的表达与肿瘤分化程度有关,而与肿瘤浸润程度及是否有淋巴结转移无关。

关键词： MRP GST-π TopoⅡα LRP 胃癌组织表达

高尔基体基质蛋白130、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义

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肿瘤 2014年第1期34卷 47-54页

作者：牟玲陈婕罗祎易永芬重庆医科大学病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆400016

目的:探讨高尔基体基质蛋白130(Golgi matrix protein 130,GM130)、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测49例卵巢上皮恶性肿瘤、30例卵巢上皮良性肿瘤和23例正常卵巢上皮组织... 详细信息

目的:探讨高尔基体基质蛋白130(Golgi matrix protein 130,GM130)、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组织化学法检测49例卵巢上皮恶性肿瘤、30例卵巢上皮良性肿瘤和23例正常卵巢上皮组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3的表达,RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测卵巢上皮恶性肿瘤、卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3 mRNA及蛋白的表达。结果:GM130、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤组织中的阳性表达率明显高于卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织,差异有统计学意义(P0.05)。卵巢上皮恶性肿瘤组织中GM130、14-3-3ζ和整合素β3 mRNA及蛋白的表达水平明显高于卵巢上皮良性肿瘤和正常卵巢上皮组织(P<0.05)。结论:GM130、14-3-3ζ和整合素β3在卵巢上皮恶性肿瘤中的高表达可能在其恶性进程中发挥重要作用,GM130有望成为判断卵巢癌患者预后的指标及治疗靶点。

关键词：卵巢肿瘤基因表达整合素β3 高尔基体基质蛋白130 14—3—3ξ

软骨同源蛋白1(CART1)敲低诱导MDA-MB-231乳腺癌细胞S期阻滞并抑制其侵袭和迁移

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细胞与分子免疫学杂志 2016年第4期32卷 474-478页

作者：管停宏苏琳茜易永芬重庆医科大学基础医学院病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的运用外源性RNA干扰技术,敲低MDA-MB-231乳腺癌细胞中软骨同源蛋白1(CART1)基因的表达,研究CART1基因沉默后对MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法采用人工合成的针对CART1基因的siRNA,用转染试剂RNAi MAX将CART1-siRNA转染MDA-MB-... 详细信息

目的运用外源性RNA干扰技术,敲低MDA-MB-231乳腺癌细胞中软骨同源蛋白1(CART1)基因的表达,研究CART1基因沉默后对MDA-MB-231细胞生物学行为的影响。方法采用人工合成的针对CART1基因的siRNA,用转染试剂RNAi MAX将CART1-siRNA转染MDA-MB-231细胞。实时定量PCR检测转染后CART1 mRNA水平,Western blot法检测转染后CART1蛋白水平,TranswellTM侵袭实验检测MDA-MB-231细胞侵袭、CCK-8法检测细胞增殖、流式细胞术检测细胞周期的变化。结果 CART1-siRNA能有效沉默CART1在MDA-MB-231细胞中的表达,CART1沉默后MDA-MB-231细胞侵袭和增殖能力明显下降,S期细胞的比率增高而G2/M细胞比率减少。结论下调MDA-MB-231细胞CART1的表达,可降低其侵袭和增殖能力、诱导S期阻滞。

关键词：乳腺癌 CART1 RNA干扰侵袭增殖周期

沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ表达对人胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移能力的影响

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肿瘤 2012年第6期32卷 402-407页

作者：杨雅莹易永芬重庆医科大学病理教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的:探讨RNA干扰沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)基因表达对人胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移的影响。方法:为沉默GMⅡ基因,构建了4个分别针对不同靶位点的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)质粒表达载体,同时合... 详细信息

目的:探讨RNA干扰沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)基因表达对人胃癌BGC-823细胞侵袭和迁移的影响。方法:为沉默GMⅡ基因,构建了4个分别针对不同靶位点的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)质粒表达载体,同时合成阴性对照质粒表达载体。应用LipofectAMINE2000将质粒转染入BGC-823细胞。分别采用RT-PCR和蛋白质印迹法检测转染后GMⅡmRNA和蛋白表达的变化,选出沉默效果最佳的质粒。应用Transwell侵袭实验和划痕损伤实验分别检测GMⅡ基因沉默对人胃癌细胞BGC-823侵袭和迁移能力的影响。结果:质粒载体pGPU6/GFP/Neo-1303沉默GMⅡ基因的效果最好。转染pGPU6/GFP/Neo-1303组穿透小室基质的细胞数明显少于空白对照组和转染阴性对照组(P<0.05)。无血清培养液培养24h后,转染pGPU6/GFP/Neo-1303组细胞的迁移能力较空白对照组和转染阴性对照组明显降低(P<0.05)。结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌BGC-823细胞中GMⅡmRNA和蛋白的表达,从而抑制BGC-823细胞的侵袭和迁移能力。GMⅡ可能成为胃癌治疗的新靶点之一。

关键词：胃肿瘤甘露糖苷酶类基因沉默肿瘤侵润细胞迁移分析

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维生素D受体与毛发疾病

临床皮肤科杂志 2016年第1期45卷 76-79页

作者：赵恒光易永芬重庆医科大学附属第一医院皮肤科重庆400016 重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)是一种细胞核受体,广泛存在于人体各组织,在配体1,25(OH)2D3作用下结合于靶基因DNA启动调节区的Vit D应答元件(vitamin D response element,VDRE),启动下游基因的转录。VDR与毛发生长密切相关。最... 详细信息

维生素D受体(vitamin D receptor,VDR)是一种细胞核受体,广泛存在于人体各组织,在配体1,25(OH)2D3作用下结合于靶基因DNA启动调节区的Vit D应答元件(vitamin D response element,VDRE),启动下游基因的转录。VDR与毛发生长密切相关。最近研究显示,VDR参与了cWnt、Shh、mTOR、TGF-β、Hairless等信号通路之间的相互作用,共同调节毛囊干细胞的增殖分化和毛囊的周期循环过程,并且VDR的基因多态性也在部分毛发疾病中起重要作用。目前,针对VDR及相关信号通路的靶向药物在实验室和临床研究中也显示出了对毛发疾病治疗的良好前景。该文就近年来关于VDR及相关信号通路在常见毛发疾病中的作用机制进行简要综述,以期为后续研究提供基础。

关键词：维生素D 维生素D受体毛发毛囊干细胞

人端粒酶逆转录酶基因siRNA质粒的构建及其对不同p53状态卵巢癌细胞生长和凋亡的影响

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中国生物制品学杂志 2013年第6期26卷 780-786,791页

作者：罗祎姚珍薇杨雅莹易永芬重庆医科大学附属第一医院妇产科重庆400016 重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心病理学教研室重庆400016

目的构建人端粒酶逆转录酶(Human telomerase reverse transcriptase,hTERT)基因小干扰RNA(Small interferingRNA,siRNA)质粒,并探讨其对不同p53状态卵巢癌细胞SKOV3(缺p53)和OVCAR3(含p53)生长和凋亡的影响。方法设计并合成针对hTERT基因的siRNA,与表达的质粒pGenesil-1连接,构建重组表达质粒pG1、pG2和pGCR(阴性对照质粒),分别转染卵巢癌细胞SKOV3和OVCAR3,并设未转染细胞对照组和转染空载体对照组。转染后48 h,荧光显微镜观察并计算转染效率;实时荧光定量PCR法检测转染细胞中hTERT基因mRNA的表达;Western blot检测转染细胞中hTERT、p53和p21蛋白的表达;端粒重复序列扩增(Telomeric repeat amplification portocol,TRAP)法检测转染细胞端粒酶的活性;CCK-8法检测细胞生长情况;流式细胞仪和AnnexinⅤ-PE/7-AAD双染法分别检测细胞周期和细胞凋亡的情况。结果已成功构建了靶向hTERT siRNA重组质粒pG1、pG2和阴性对照质粒pGCR,具有较高的转染效率,与pGCR转染组相比,pG1和pG2转染组hTERT基因和蛋白表达(P<0.05)及端粒酶活性均明显降低,pG1和pG2转染组均可抑制两种细胞的生长,且对OVCAR3细胞的抑制作用强于SKOV3细胞;pG1和pG2转染组G0-G1期细胞比例明显下降,S期细胞比例明显增多(P<0.05);在OVCAR3细胞中,hTERT表达受抑后均出现了明显的凋亡,同时伴随p53和p21蛋白表达的增加,在缺乏p53基因的SKOV3细胞中并未导致明显的凋亡,其p21蛋白表达明显低于pGCR转染组(P<0.05)。结论构建的靶向hTERT siRNA重组表达质粒在体外能有效和特异地沉默卵巢癌细胞hTERT基因的表达,降低端粒酶活性,并引起肿瘤细胞的生长抑制和凋亡,其机制可能与抑癌基因p53及p21上调有关。

关键词：人端粒酶逆转录酶 RNA干扰卵巢癌细胞增殖细胞凋亡

MASPIN真核表达载体的构建及对胃癌细胞SGC7901的诱导凋亡作用

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癌症 2008年第11期27卷 1161-1165页

作者：郑爱华易永芬周文文重庆医科大学基础医学院病理学教研室重庆400016

背景与目的:MASPIN基因与多种恶性肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、浸润、转移和凋亡中起着十分重要的作用。本研究通过构建MASPIN基因真核表达载体,分析MASPIN过表达对胃腺癌细胞株SGC7901凋亡的影响。方法:构建MASPIN/PCR2.1表达载... 详细信息

背景与目的:MASPIN基因与多种恶性肿瘤的发生密切相关,在细胞的生长、浸润、转移和凋亡中起着十分重要的作用。本研究通过构建MASPIN基因真核表达载体,分析MASPIN过表达对胃腺癌细胞株SGC7901凋亡的影响。方法:构建MASPIN/PCR2.1表达载体,转染胃癌细胞株SGC7901。RT-PCR和Western bolt检测MASPIN基因、Bax/Bcl-2基因表达变化;琼脂糖凝胶电泳检测凋亡特征性DNA梯形带;采用AnnexinV-FIFC/PI检测凋亡率。结果:酶切证实成功构建真核表达质粒MASPIN/PCR2.1;转染重组质粒组MASPIN mRNA(33.6±1.2)和蛋白水平(23.4±1.6)的表达明显高于未处理组(13.7±2.0、12.0±1.3)和空质粒组(15.0±1.5、12.3±1.5,P<0.05);凝胶电泳观察到特征性DNA梯带;各组细胞均有凋亡率的增加且呈时间依赖性:转染重组质粒∕TRAIL作用组最高,12、24、48h分别达到8.0%、16.3%、25.8%,转染重组质粒组为3.0%、8.2%、14.4%,TRAIL作用组为4.1%、9.8%、15.9%(P<0.05);48h转染重组质粒∕TRAIL组BaxmRNA和蛋白表达(55.3±2.1、75.4±1.3)高于转染重组质粒组(34.3±1.2、40.7±1.8,P<0.05)和TRAIL作用组(43.2±1.8、36.2±1.3,P<0.05);48h转染重组质粒∕TRAIL组、转染重组质粒组、TRAIL作用组Bcl-2mRNA表达为28.3±2.5、34.3±1.2、32.8±2.1(P<0.05),蛋白表达为17.4±1.5、45.1±2.1、42.8±1.5(P<0.05)。结论:上调MASIPIN基因的表达能显著增加胃癌细胞对凋亡刺激的敏感性。其机制可能通过上调Bax,下调Bcl-2基因的表达诱导胃癌细胞凋亡。

关键词： MASPIN TRAIL Bax/Bcl-2 SGC7901细胞株胃肿瘤凋亡

α-甘露糖苷酶Ⅱ基因沉默对人胃癌BGC-823细胞增殖及凋亡的影响

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中国生物制品学杂志 2012年第8期25卷 967-972页

作者：杨雅莹易永芬重庆医科大学病理学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的探讨沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)基因的表达对人胃癌BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。方法根据GenBank中登录的人GMⅡ基因mRNA序列及siRNA设计原则,设计了4条siRNA,并构建4个针对靶点的重组表达质粒pGPU... 详细信息

目的探讨沉默高尔基体α-甘露糖苷酶Ⅱ(Golgiα-mannosidaseⅡ,GMⅡ)基因的表达对人胃癌BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。方法根据GenBank中登录的人GMⅡ基因mRNA序列及siRNA设计原则,设计了4条siRNA,并构建4个针对靶点的重组表达质粒pGPU6/GFP/Neo-1140、pGPU6/GFP/Neo-1303、pGPU6/GFP/Neo-1406和pGPU6/GFP/Neo-1817,同时合成阴性对照质粒pGPU6/GFP/Neo-shNC,经Lipofectamine 2000分别转染BGC-823细胞,通过RT-PCR及Western blot检测转染细胞中GMⅡ基因mRNA和蛋白的表达,筛选沉默效果最佳的质粒;经MTT试验、细胞周期分布分析、Hoechst33258和Annexin V-FITC/PI双染试验分别检测沉默GMⅡ基因对人BGC-823细胞增殖与凋亡的影响。结果 pGPU6/GFP/Neo-1303组GMⅡ基因mRNA和蛋白的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05),表明pGPU6/GFP/Neo-1303组沉默效果最好;与空白对照组和阴性对照组相比,pGPU6/GFP/Neo-1303组BGC-823细胞增殖抑制率明显升高(P<0.01),G1期细胞比例明显上升(P<0.05),S期细胞比例明显下降(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.05)。结论已成功沉默BGC-823细胞中GMⅡ基因的表达,从而抑制BGC-823细胞的增殖并促进其凋亡,GMⅡ可能成为防治胃癌的新靶点。

关键词： RNA干扰高尔基体 α甘露糖苷酶胃癌基因沉默细胞增殖细胞凋亡