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基于功能核酸动态组装与信号放大的荧光生物传感新策略研究

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基于功能核酸动态组装与信号放大的荧光生物传感新策略研究

作者：韩易成湖北师范大学

学位级别：硕士

当前,荧光生物传感器已成为分析化学领域中一个十分重要的研究方向。由于该方法能够兼顾操作简单、分析灵敏度高且无需昂贵仪器等优点,因而在环境分析、食品质量监控和临床诊断等领域具有很高的应用价值。然而,传统的荧光生物传感器信... 详细信息

当前,荧光生物传感器已成为分析化学领域中一个十分重要的研究方向。由于该方法能够兼顾操作简单、分析灵敏度高且无需昂贵仪器等优点,因而在环境分析、食品质量监控和临床诊断等领域具有很高的应用价值。然而,传统的荧光生物传感器信号输出很容易受到仪器测定条件波动和探针状态等环境因素的干扰,从而极大制约其分析结果的准确性。这些问题通常是由于荧光基团的发光方式固有缺陷,以及传感策略的信号输出模式过于单一导致的。而近年来广为关注的聚集诱导发光（AIE）和荧光共振能量转移（FRET）技术为解决上述两个方面的问题提供了新的有益思路。尽管如此,当分析物处在复杂的基质环境中并且含量很低时,如何有效提高荧光生物传感器的分析性能,以很好满足其高灵敏度和高准确性要求,仍然面临极大挑战。因此,进一步发展能够精准识别靶向分析物,并有效实现生物传感器高灵敏分析的荧光信号转导策略具有十分重要的意义。由于功能核酸具有强大的可编码性,且能够实现基于目标物识别及核酸动态组装等相关反应的灵活构象变化,近些年来被广泛用于构建各种性能优良的生物传感器信号放大策略。为此,本论文通过巧妙的功能核酸设计,将基于目标物特异性识别作用引发的核酸动态组装和信号放大反应与AIE和FRET荧光信号转导技术相结合,围绕高性能环境污染物的荧光生物传感新策略研究开展了以下两个方面的工作:1.基于G-四链体修饰DNA网状纳米结构放大组装的AIE荧光生物传感AIE技术为开发低背景荧光分析方法提供了一种极具潜力的发展途径,然而如何改善其复杂的探针合成,提高其在均相反应体系下的生物相容性和信号放大效率仍然是当前面临的重要挑战。本工作设计了一种对临近G-四链体高度敏感的AIE核酸信号探针DTPE,并将其与核酸适配体特异性识别作用触发的G-四链体修饰DNA网状纳米结构的放大组装相结合,成功发展了一种可用于卡那霉素（Kana）抗生素高灵敏检测的AIE生物传感新策略。由于寡核苷酸很好的亲水性,该DTPE探针具有很好的水溶性,故不产生明显的背景信号发射。通过核酸外切酶III（Exo III）辅助的目标物识别反应来引发设计的级联滚环扩增（RCA）,即可触发交叉杂交链反应（HCR）,实现该DNA网状纳米结构的成功构建。在此过程中,还可在该纳米结构上组装形成大量G-四链体结构并在G-四链体临近序列附近捕获大量DTPE探针。由于此纳米结构对DTPE探针分子自由运动的极大抑制,即可实现很强的AIE荧光输出以构建该方法的信号转导策略。由于目标物循环及RCA级联反应对该G-四链体修饰DNA网状纳米结构的放大HCR组装,以及DTPE探针在此纳米结构上的高含量捕获,该低背景AIE生物传感方法可在超过4个数量级的线性范围内实现对Kana的高灵敏检测,检测限低至24 fg m L。同时,该方法操作十分方便,且具有很好的选择性和可靠性,因而不仅在环境污染物残留的高灵敏检测领域具有很好的实用价值,也可为有效拓展AIE技术在分析科学领域中的应用提供很好指导。2.基于DNA轮烷纳米机器往复运动协同信号放大的比率型荧光生物传感作为一种新兴的生物传感器信号放大方式,DNA步行机近年来引起了人们的广泛关注,然而如何提高其在均相反应体系中的自发轨道识别及步行信号放大效率目前仍然面临着重要挑战。本工作在金属有机框架（MOFs）Nu-901表面设计了一种以单核苷酸为燃料、转录酶驱动环状DNA自主往复运动的DNA轮烷纳米机器,并将其与目标分析物的特异性核酸适配体识别作用及基于催化发夹组装（CHA）的多种核酸信号放大反应相结合,成功发展了一种可用于17β-雌二醇（E2）高灵敏检测的比率型荧光生物传感新策略。其中,驱动环状DNA自发运动的DNA步行机通过目标物特异性识别作用引发的CHA反应而形成。一旦环状DNA运动到Nu-901附近,即可触发四个标记有ROX荧光团的发夹DNA之间的CHA反应,从而在Nu-901表面生成含有大量超支化DNA纳米结构。这样即可实现基于FRET效应的Nu-901荧光信号猝灭和ROX荧光信号增强,从而构建起该方法的比率型信号转导策略。由于纳米限域轨道上DNA轮烷纳米机器的往复运动与多种CHA循环反应的协同信号放大,该方法可在5个数量级的很宽线性范围内实现对目标物分析物E2的高灵敏检测,检测限低至8.3 f M。此外,该方法还具有很好的操作性、选择性和可靠性。为此,该研究成果不仅在环境污染物残留的方便灵敏检测领域具有很好的实用价值,而且可为生物传感领域性能优良的信号转导与放大策略构建提供很好思路参考。

关键词：荧光生物传感器核酸适配体核酸信号放大 DNA纳米结构环境污染物分析

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易成功油画作品

湖北第二师范学院学报 2016年第1期33卷 F0003-F0003页

作者：易成功湖北第二师范学院艺术学院

油画作品《史努比玩具》描绘的是橱窗里展示的一个个形象各异的史努比玩具，每一个玩具对应一个职业形象，造型和身份各不相同，有教师、音乐家、宇航员、警察、厨师、画家、演员等；虽然是玩具，但是却对应着我们的人生，展示在礼品橱... 详细信息

油画作品《史努比玩具》描绘的是橱窗里展示的一个个形象各异的史努比玩具，每一个玩具对应一个职业形象，造型和身份各不相同，有教师、音乐家、宇航员、警察、厨师、画家、演员等；虽然是玩具，但是却对应着我们的人生，展示在礼品橱窗里，让人爱不释手。

关键词：油画作品艺术学院师范学院湖北成功职业形象史努比玩具

基于功能性动作筛查的纠正训练对慢性非特异性腰痛的疗效研究

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基于功能性动作筛查的纠正训练对慢性非特异性腰痛的疗效研究

作者：易成莉武汉体育学院

学位级别：硕士

研究目的:探究基于功能性动作筛查（Functional Movement Screening,FMS）的纠正训练对慢性非特异性腰痛（Chronic Non-specific Low Back Pain,CNLBP）患者的临床改善效果,为CNLBP患者个性化、科学化运动处方的制定提供理论依据。研究... 详细信息

研究目的:探究基于功能性动作筛查（Functional Movement Screening,FMS）的纠正训练对慢性非特异性腰痛（Chronic Non-specific Low Back Pain,CNLBP）患者的临床改善效果,为CNLBP患者个性化、科学化运动处方的制定提供理论依据。研究方法:2022年4月至2022年7月在武汉体育学院运动康复中心共招募71名CNLBP患者（男生43名,女生28名,平均年龄21.67±2.23岁）,随机分为3组:纠正训练组（CTE组,n=24）,常规训练组（RTE组,n=24）和对照组（Con组,n=23）。所有受试者在接受运动干预前均进行FMS筛查,依据筛查结果制定纠正训练方案。CTE组和RTE组进行为期6周,每周3次,每次60min的运动干预。CTE组受试者进行纠正训练,RTE组受试者进行常规的腰背部肌力训练,Con组只进行健康宣教,不进行运动干预。干预前后分别用视觉模拟评分法（VAS）评估患者疼痛程度,使用Oswestry功能障碍指数（ODI）评估患者腰部功能障碍,使用Y Balance Test评定动态平衡能力,使用Stabilizer压力生物反馈仪评估腹内压,使用Delsys表面肌电设备获取双侧竖脊肌、多裂肌中位频率值（MF）以及屈曲-放松值等信息。所得数据采用SPSS 26.0软件进行统计学分析,结果均以平均值±标准差（?χ±s）表示。研究结果:（1）与组内干预前相比,干预后CTE组FMS总分以及深蹲、跨栏步、直线弓箭步、主动直膝抬腿、躯干稳定俯卧撑、躯干旋转稳定性等6个单项得分和RTE组FMS总分以及跨栏架步、躯干稳定俯卧撑、躯干旋转稳定性等3个单项得分均有显著提高（P0.05）。与组间干预后相比,CTE组和RTE组FMS总分均高于Con组（P0.05）。与组间干预后相比,CTE组和RTE组VAS评分极显著低于Con组（P0.05）。与组间干预后相比,CTE组和RTE组ODI评分极显著低于Con组（P0.05）。与组间干预后相比,CTE组的综合分数极显著高于Con组（P0.05）。与组间干预后相比,CTE组和RTE组双侧差异值均显著低于Con组（P0.05）。与组间干预后相比,CTE组和RTE组4个腹内压测试动作的结果均显著高于Con组（P0.05）,RTE组动作3的测试结果显著高于CTE组（P0.05）。与组间干预后对比,CTE组和RTE组双侧竖脊肌、多裂肌MF值均高于Con组（P0.05）。（7）与组内干预前相比,干预后CTE组和RTE组双侧竖脊肌、多裂肌FLEX/MVF和EXT/MVF均显著提高（P0.05）。与组间干预后对比,CTE组和RTE组双侧竖脊肌、多裂肌FLEX/MVF和EXT/MVF均显著高于Con组（P<0.05）且CTE组左侧竖脊肌FLEX/MVF、右侧竖脊肌FLEX/MVF和右侧多裂肌

关键词：功能性动作筛查纠正训练慢性非特异性腰痛

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基于振幅放大机制的浮置板轨道低频轻质减振

土木工程学报 2024年第5期57卷 117-132页

作者：杨舟冯青松成功张凌华东交通大学轨道交通基础设施性能监测与保障国家重点实验室江西南昌330013

为探讨在浮置板轨道低频振动控制中实现轻质减振和有效减振兼容的可行性,基于振幅放大机制,设计一种杠杆式动力吸振器(LT-DVA)。采用能量泛函变分法建立了配置有LT-DVA的钢弹簧浮置板轨道动力分析模型,以轨道结构的力传递率、位移导纳... 详细信息

为探讨在浮置板轨道低频振动控制中实现轻质减振和有效减振兼容的可行性,基于振幅放大机制,设计一种杠杆式动力吸振器(LT-DVA)。采用能量泛函变分法建立了配置有LT-DVA的钢弹簧浮置板轨道动力分析模型,以轨道结构的力传递率、位移导纳为评价指标,通过与普通动力吸振器(DVA)进行对比验证LT-DVA的有效性。在此基础上,利用多频控制的思路,在浮置板上引入多个杠杆式动力吸振器(LT-MDVA),以实现宽频控制、高衰减的效果。进一步考虑列车荷载的作用,分析验证动态轮轨力作用下LT-MDVA的低频隔振性能以及对轨道结构动力响应的影响。结果表明:由于振幅放大机制(振幅放大系数为α)的有益效果,LT-DVA的有效惯性质量、刚度、阻尼是同参数DVA的α^(2)倍,即工作能力是DVA的α^(2)倍;在LT-DVA的基础上,LT-MDVA能够有效拓宽振动衰减频段且提升振动衰减能力;相较于普通钢弹簧浮置板轨道,在动态轮轨力作用下,质量比仅为0.02的LT-MDVA不仅能够有效减小传递至下部基础的力(最大衰减约7.5dB),还能有效减小轨道结构的响应(钢轨和浮置板振动最大衰减约7.2dB和7.1dB),抑制浮置板轨道的振动放大现象,而同参数的MDVA几乎没有效果,证明了LT-MDVA能够在浮置板轨道低频振动控制中实现轻质减振和有效减振兼容。

关键词：浮置板轨道低频振动振幅放大轻质减振动力吸振器

法秩序统一性原理下违法的相对独立判断——以刑民交叉案件展开

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中南民族大学学报（人文社会科学版） 2024年第6期44卷 130-138,186,187页

作者：成功徐立中南财经政法大学法治发展与司法改革研究中心湖北武汉430073

随着市场经济与司法实践的深度发展,刑民交叉案件日趋增多。民法如何影响刑法以及在何种范围上影响刑事违法性的判断成为关键问题。“法秩序统一性”是指立法者通过统一的行为规范向公民传递一致的规范指引,形成规则之治,但从中不能推... 详细信息

随着市场经济与司法实践的深度发展,刑民交叉案件日趋增多。民法如何影响刑法以及在何种范围上影响刑事违法性的判断成为关键问题。“法秩序统一性”是指立法者通过统一的行为规范向公民传递一致的规范指引,形成规则之治,但从中不能推导出一般违法性。在刑法违法性的判断上,违法的“相对独立说”更具有理论、立法与司法的合理性。单纯的法益标准说很难为相对独立说提供判断标准,需考察法益背后的规范目的。在“相对冲突型”的场合,刑民规范具有相同的规范目的,刑事违法性的判断“相对”独立于民法。在“绝对冲突型”的场合,刑民交叉规范目的截然不同,刑事违法性的判断“绝对”独立于民法。实务中,对于符合民法保护性规定的行为,原则上不存在犯罪;符合民法惩戒性规定的行为,民事不法结论仅能为刑事违法性的判断提供参考;民法没有具体规定的行为,刑事违法性应独立判断。

关键词：刑民交叉法秩序统一性违法的相对论规范目的违法性

新型冠状病毒肺炎流行期间的炎症性肠病优化管理

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中华炎性肠病杂志（中英文） 2024年第1期8卷 91-94页

作者：简易成冉志华上海健康医学院附属周浦医院消化科上海201318

本综述旨在总结目前关于新型冠状病毒肺炎(简称"新冠肺炎")在炎症性肠病(IBD)患者中的风险和影响的证据,并讨论在此疫情期间IBD的优化管理。IBD患者并没有更高的新冠肺炎发病率,也不伴更严重的疾病进展。多种因素与新冠肺炎感染风险增... 详细信息

本综述旨在总结目前关于新型冠状病毒肺炎(简称"新冠肺炎")在炎症性肠病(IBD)患者中的风险和影响的证据,并讨论在此疫情期间IBD的优化管理。IBD患者并没有更高的新冠肺炎发病率,也不伴更严重的疾病进展。多种因素与新冠肺炎感染风险增加、住院率增加和严重新冠肺炎风险增加相关。IBD的治疗与更严重的新冠肺炎无关,5-氨基水杨酸和硫唑嘌呤与新冠肺炎的风险增加的关系尚有争议。不同类别和疾病程度的IBD患者治疗方案需要调整。新冠肺炎疫苗对IBD患者是有效和安全的。

关键词：新型冠状病毒肺炎炎症性肠病治疗管理

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渗硫处理对工模具钢组织和性能的影响研究

渗硫处理对工模具钢组织和性能的影响研究

作者：易成功桂林理工大学

学位级别：硕士

工模具钢以良好的抗冲击、抗热裂、耐磨损及耐热变形等特点广泛应用于热挤压模、锻模、压铸模等热作部件;W360热作模具钢以高硬度、高韧性、优良的抗回火软化性能以及良好的热传导性能等特点广泛应用于温锻、热锻模具、冲头模具材料以... 详细信息

工模具钢以良好的抗冲击、抗热裂、耐磨损及耐热变形等特点广泛应用于热挤压模、锻模、压铸模等热作部件;W360热作模具钢以高硬度、高韧性、优良的抗回火软化性能以及良好的热传导性能等特点广泛应用于温锻、热锻模具、冲头模具材料以及搅拌摩擦焊的搅拌头材料。然而调研发现,该钢作铝型材挤压模时磨损较为严重,作搅拌头焊接铝合金时寿命也较低,分析表明挤压或焊接过程中热环境下的摩擦磨损是导致两者性能较低的共性原因。有鉴于此,本文采用低温液体渗硫工艺对W360模具钢进行了渗硫处理,通过在材料表面形成多孔易滑移的硫化铁层,增强材料的抗擦伤、粘着能力,减少摩擦热,提升模具或搅拌头的耐磨性和使用寿命。采用调节硫含量对渗剂配方进行改善探究;采用金相显微镜、场发射扫描电子显微镜(FESEM)、X射线衍射仪(XRD)等对基体组织,渗硫层的形貌结构、物相组成、元素组成,磨痕形貌、元素分布等情况等进行分析;采用硬度计对渗硫前后材料的表面硬度进行测定;使用MRH-3A高速环块磨损试验机对渗硫层摩擦学性能进行了评价。研究结果表明,对W360热作模具钢采用低温液体渗硫工艺后,渗硫层形成了“微颗粒+空隙”结构,形态似“韧窝”断口,颗粒之间以及颗粒内部疏松多孔,孔隙可以储存润滑油,在摩擦表面易形成油膜,易形成“流体+固体”的协同润滑作用;渗硫前后材料的硬度未发生改变,故渗硫处理后硬度对材料的摩擦磨损性能不产生作用;低温液体渗硫能够明显提高W360钢的表面抗擦伤性能,特别是初始阶段材料的摩擦系数明显较低;研究还发现,渗剂成分对渗硫层抗擦伤和抗粘着性能有明显影响,含硫量为1.5%(质量分数)时抗擦伤、耐粘着性能最佳。基于硫化铁的自润滑作用,围绕W360钢的热作条件对表面摩擦磨损性能的要求,本文采取低温液体渗硫工艺W360钢表面生成FeS薄膜,研究结果对于提高工模具钢及制品耐擦伤性及耐磨损性能有一定的指导作用,对于铝加工及搅拌摩擦加工企业实现降本增效有一定的技术参考价值。

关键词：工模具钢低温液体渗硫抗擦伤性抗粘着性

数据财政视角下公共数据有偿使用价值分配的理论基础与政策框架

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电子政务 2024年第2期 21-32页

作者：赵正杨铭鑫易成岐聂磊国家信息中心大数据发展部中国人民大学信息资源管理学院深圳市数聚湾区大数据研究院战略研究中心北京外国语大学区域与全球治理高等研究院

随着我国加速迈入数字经济时代,公共数据日益成为社会发展和行业创新的关键推动力,公共数据有偿使用价值分配的探索性研究对加快推进数据要素配置化改革具有重大意义。当前我国各地正在如火如荼开展公共数据授权运营的试点性探索,北京... 详细信息

随着我国加速迈入数字经济时代,公共数据日益成为社会发展和行业创新的关键推动力,公共数据有偿使用价值分配的探索性研究对加快推进数据要素配置化改革具有重大意义。当前我国各地正在如火如荼开展公共数据授权运营的试点性探索,北京、深圳、浙江、杭州、宁波、长春等省市相继出台公共数据授权运营相关政策,但在公共数据的开发利用和价值分配实践中,如何有效激发市场经济价值、增强流通供给动力、有效平衡分配差距等方面诸多问题亟待研究。回顾分析了公共数据价值化的有关研究,系统性梳理数据财政相关研究成果,借鉴公共资源的价值分配原则、体系及经验,提出要覆盖数据主体、数据提供者、数据运营者、最终消费者等四类公共数据价值链核心利益相关主体的价值分配政策框架,提出涵盖公共数据价值化全过程的登记制度、促进公共数据有偿使用的监督指导机制、鼓励公共数据资源供给的长效激励机制以及平衡公共数据主体权益的回馈补偿机制,为数据财政视角下公共数据授权运营后续政策制定和实践探索提供相关理论基础和参考依据。

关键词：数据要素数据财政公共数据价值分配多层级数据市场

山羊痘病毒Vero细胞适应毒的培育和基于P32蛋白的单克隆抗体制备

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山羊痘病毒Vero细胞适应毒的培育和基于P32蛋白的单克隆抗体制备

作者：易成功扬州大学

学位级别：硕士

山羊痘病毒（Goatpox virus,GTPV）为急性接触性传染病,可感染各种年龄、性别和品种的山羊,造成山羊发热、皮肤丘疹和黏膜脏器广泛性的痘疹等临床症状,导致生产能力下降,严重威胁国内外养羊业的发展。目前我国防控该病的主要措施是疫苗... 详细信息

山羊痘病毒（Goatpox virus,GTPV）为急性接触性传染病,可感染各种年龄、性别和品种的山羊,造成山羊发热、皮肤丘疹和黏膜脏器广泛性的痘疹等临床症状,导致生产能力下降,严重威胁国内外养羊业的发展。目前我国防控该病的主要措施是疫苗免疫的方法,但仍时有疫情发生,因此,建立快速诊断该病方法是十分必要的。本研究将在原代胎羊睾丸细胞分离的GTPV-XZ株在Vero细胞进行传代,同时克隆表达GTPVP32蛋白,免疫小鼠制备单抗,为建立快速,操作简便、成本低廉的检测奠定基础。1.GTPV Vero细胞适应毒的培育将分离的山羊痘病毒转接到Vero细胞上进行连续传代,通过20代的传代培养,细胞的CPE趋于稳定,接毒3d后,细胞皱缩拉网,形成许多聚集的细胞团块,5d后细胞开始脱落,在病变达到80%的时候进行收获,继续传代。选取每一代病毒测定TCID50,同时绘制了 GTPVP32基因的标准曲线,使用qRT-PCR对每代病毒进行检测,结果显示前期病毒在Vero细胞上的增殖含量较低,通过连续20代培养之后GTPV的增殖滴度小幅提高并趋于稳定,因此获得了 Vero细胞适应毒。2.GTPV P32基因的原核表达通过克隆P32基因,并将其插入pET-32a表达载体上,转化表达菌株BL21后用IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测结果显示,在37℃、220rpm、1M IPTG条件下,融合蛋白P32-His能以可溶性形式大量表达。经His标签蛋白纯化试剂盒纯化后,获得可溶性的重组蛋白浓度为2.5 mg/mL。使用纯化的P32蛋白免疫BALB/c小鼠制备多抗血清,通过IFA试验结果显示:制备多抗血清能与感染GTPV的Vero细胞产生特异性的荧光,表明重组的P32蛋白有较好的免疫原性,为下一步进行P32蛋白单克隆抗体的制备提供材料。3.抗GTPVP32蛋白单克隆抗体的制备使用纯化的P32-His融合蛋白免疫六周龄BALB/c小鼠,取免疫小鼠的脾细胞与SP2/0进行融合,通过间接ELISA和IFA的方法筛选,获得2株能稳定分泌抗P32蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为2B4和2E10。IFA结果显示,这两株单抗均能与感染GTPV的Vero细胞反应产生特异性荧光;Western-blot试验结果则显示,2B4和2E10能与病毒蛋白反应;这两株单抗与实验室分离保存的2株ORFV均不反应。因此,基于这两株单抗可建立快速敏感的抗原检测方法。

关键词： GTPV 实时荧光定量PCR P32蛋白原核表达单克隆抗体