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木霉TP-24固态发酵生产β-1，3-葡聚糖酶产酶条件及酶学性质的研究

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木霉TP-24固态发酵生产β-1，3-葡聚糖酶产酶条件及酶学性质的研究

作者：易华西华中农业大学

学位级别：硕士

酵母β-1，3-葡聚糖是一种生物活性强、毒副作用低的高效生物应答物，但水溶性差而使其利用受到了很大限制。本文以实验室保藏的产β-葡聚糖酶菌株LE02为研究对象，采用固态发酵技术，对其产酶条件进行了优化，并利用层析、电泳等技术对... 详细信息

酵母β-1，3-葡聚糖是一种生物活性强、毒副作用低的高效生物应答物，但水溶性差而使其利用受到了很大限制。本文以实验室保藏的产β-葡聚糖酶菌株LE02为研究对象，采用固态发酵技术，对其产酶条件进行了优化，并利用层析、电泳等技术对β-葡聚糖酶进行纯化，就其酶学性质进行了研究，以便为酵母β-1，3-葡聚糖的酶法改性增溶奠定基础。主要研究结果如下： 1．在对保藏产酶菌株LE02进行纯化与复壮的基础上，经透明圈筛选和固态发酵试验，得到一株产β-葡聚糖酶高的菌株TP-24，其酶活达到355.37 U／***，比初始菌株酶活提高了32.38％。经形态观察，将菌株TP-24初步归属为木霉属(Trichoderma)。 2．研究了固态发酵产酶条件。碳源、氮源、水分含量、培养温度、培养时间、培养基初始pH、培养基通气条件及表面活性剂对菌株TP-24固态发酵产酶有一定的影响。以麸皮为基质，培养基中添加1.91％酵母粉和1.99％NHNO，料水比为1：0.79，于30℃发酵4d，β-葡聚糖酶活力达到594.37U／***，比对照产酶水平提高了273.55％。 3．对β-葡聚糖酶的分离、纯化与鉴定进行了研究。用pH5.0醋酸缓冲液抽提所得粗酶液经活性炭脱色、离心分离、(NH)SO分段盐析、透析浓缩后，上SephadexG-100层析柱进行层析分离，获得了一个较高酶活的蛋白峰和一个无酶活的杂蛋白峰。浓缩含酶组分后，进行SDS-PAGE电泳分析，酶蛋白呈一条谱带，分子量近似为54.56 kD。该β-葡聚糖酶相对于粗酶液纯化了28.67倍，酶的比活力由11.96U／mg提高到342.95U／mg，酶的回收率为45.15％。 4．研究了β-葡聚糖酶酶学性质。β-葡聚糖酶最适反应pH为5.0，最适反应温度为55℃，该酶在pH3.0～5.0和30℃～40℃范围内稳定性高，在60℃～70℃酶活迅速下降。Zn、Ca、Fe对β-葡聚糖酶有一定的激活作用，Fe、Mg、Mn、Cu对β-葡聚糖酶有一定的抑制作用，其中Fe的抑制作用最强。该酶对β-1，3糖苷键有很高的专一性，能水解β-1，4糖苷键，但作用较弱，而对α-1，4糖苷键和含α-1，6糖苷键没有作用;当以CMC-Na为底物时，酶的米氏常数(Km)为3.85mg／ml，最大反应速度(Vmax)为20.88μg／***，以酵母β-1，3-Glucan为底物时，酶的Km为8.02μg／ml，Vmax为5.59μg／***。

关键词： β-葡聚糖,β-葡聚糖酶,固态发酵,酶学性质

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代谢组学在乳酸菌研究中的应用

天然产物研究与开发 2019年第8期31卷 1474-1479,1349页

作者：杨慧步雨珊易华西中国海洋大学食品科学与工程学院

代谢组学是系统生物学的重要分支,因其高效、高通量等特点而广泛应用于食品科学、药物学等研究领域。本文概述了代谢组学的分离和检测技术,综述了代谢组学在乳酸菌鉴定、发酵调控、肠道菌群研究等方面中的应用,对代谢组学在乳酸菌研究... 详细信息

代谢组学是系统生物学的重要分支,因其高效、高通量等特点而广泛应用于食品科学、药物学等研究领域。本文概述了代谢组学的分离和检测技术,综述了代谢组学在乳酸菌鉴定、发酵调控、肠道菌群研究等方面中的应用,对代谢组学在乳酸菌研究中潜在的问题和未来发展趋势进行了讨论,期望为代谢组学在食品工业微生物中的应用提供参考。

关键词：乳酸菌代谢组学研究应用

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乳源外泌体的组成及其生物功能研究进展

食品科学 2020年第13期41卷 310-317页

作者：仝令君郝海宁张兰威易华西中国海洋大学食品科学与工程学院山东青岛266003

外泌体是由细胞分泌的一种纳米级胞外囊泡,含有核酸、蛋白、脂质等多种活性物质。作为一种信号传递分子,外泌体可将含有生物信息的内容物传送到靶细胞使其发挥特定作用。不同来源的外泌体其组成和功能存在一定差异。目前,乳源外泌体在... 详细信息

外泌体是由细胞分泌的一种纳米级胞外囊泡,含有核酸、蛋白、脂质等多种活性物质。作为一种信号传递分子,外泌体可将含有生物信息的内容物传送到靶细胞使其发挥特定作用。不同来源的外泌体其组成和功能存在一定差异。目前,乳源外泌体在人体生长发育过程中的生理功能已成为研究热点,其在婴幼儿肠道发育、先天免疫以及预防炎症等方面已被证明具有益生元的功效。我国有关外泌体的研究刚刚起步,故本文对乳源外泌体的形成途径、组成特征以及功能特性进行综述,以期为乳源外泌体这一新型益生元的研究与开发提供参考。

关键词：乳源外泌体组成功能特性

几种天然提取物对两株双歧杆菌的增殖作用研究

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食品科技 2010年第3期35卷 233-236页

作者：韩雪易华西张兰威哈尔滨工业大学食品科学与工程学院哈尔滨150090

将4种天然提取物添加到双歧杆菌基础培养基中,通过单因素实验找到可显著提高双歧杆菌活菌数的天然物质,并进行正交实验。结果表明:向婴儿双歧杆菌PBA的基础培养基中加入平菇汁20%,卷心菜汁20%,豆浆20%,胡萝卜汁5%可使双歧杆菌活菌数增加... 详细信息

将4种天然提取物添加到双歧杆菌基础培养基中,通过单因素实验找到可显著提高双歧杆菌活菌数的天然物质,并进行正交实验。结果表明:向婴儿双歧杆菌PBA的基础培养基中加入平菇汁20%,卷心菜汁20%,豆浆20%,胡萝卜汁5%可使双歧杆菌活菌数增加2.78倍,向长双歧杆菌INF的基础培养基中加入10%平菇汁,15%蕃茄汁,15%肝浸汁可使活菌数增加2.95倍,为筛选安全而又低廉的双歧杆菌增殖物质奠定基础。

关键词：天然提取物双歧杆菌增殖

Lactobacillus J23发酵合成抗菌肽Bac-J23培养条件的优化研究

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食品科技 2012年第3期37卷 35-39页

作者：易华西韩雪杜明张兰威哈尔滨工业大学食品科学与工程学院哈尔滨150001

研究了培养条件(接种量、发酵温度、初始pH)对LactobacillusJ23发酵合成广谱抗菌肽Bac-J23的影响,并采用响应面法进行了优化。结果表明,Lactobacillus-J23生产Bac-J23体现出温度、pH梯度和接种剂量依赖性,响应面优化结果表明最适温度和p... 详细信息

研究了培养条件(接种量、发酵温度、初始pH)对LactobacillusJ23发酵合成广谱抗菌肽Bac-J23的影响,并采用响应面法进行了优化。结果表明,Lactobacillus-J23生产Bac-J23体现出温度、pH梯度和接种剂量依赖性,响应面优化结果表明最适温度和pH分别为36.8℃和5.2,接种量阈值为2.13×104cfu/mL。

关键词：乳酸菌抗菌肽响应面优化

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乳酸菌细菌素纯化技术的检测及研究进展

食品工业科技 2012年第22期33卷 414-418,422页

作者：刘文丽张兰威 John shi 易华西哈尔滨工业大学食品科学与工程学院黑龙江哈尔滨150090 加拿大农业部圭尔夫食品研究中心

细菌素可以抑制大量的食品源腐败菌和致病菌,因此,近年来受到国内外广大学者的关注,其中乳酸菌细菌素因其安全性尤为受到关注。然而要使细菌素更好地应用到生物技术领域,揭示乳酸菌细菌素的生物化学结构和作用位点就显得尤为重要,而这... 详细信息

细菌素可以抑制大量的食品源腐败菌和致病菌,因此,近年来受到国内外广大学者的关注,其中乳酸菌细菌素因其安全性尤为受到关注。然而要使细菌素更好地应用到生物技术领域,揭示乳酸菌细菌素的生物化学结构和作用位点就显得尤为重要,而这又是建立在乳酸菌细菌素的纯化基础上。文章结合乳酸菌细菌素纯化技术及检测的最新研究进展,讨论乳酸菌细菌素在食品和医疗领域的发展潜力。

关键词：乳酸菌细菌素分离纯化检测

植物乳杆菌M1-NTG300产细菌素培养条件优化

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食品与机械 2020年第8期36卷 178-182,209页

作者：安宇王颖易华西张东杰黑龙江八一农垦大学食品学院黑龙江大庆163319 国家杂粮工程技术研究中心黑龙江大庆163319 中国海洋大学食品科学与工程学院山东青岛266000

以植物乳杆菌素的效价作为特征性考察指标,对植物乳杆菌M1-NTG300产细菌素培养条件进行优化。通过响应面分析结合实际值确定培养基最佳组分为:葡萄糖浓度3.5%、蛋白胨浓度3.5%、吐温80浓度0.35%、氯化镁浓度0.20%,此培养条件下植物乳杆... 详细信息

以植物乳杆菌素的效价作为特征性考察指标,对植物乳杆菌M1-NTG300产细菌素培养条件进行优化。通过响应面分析结合实际值确定培养基最佳组分为:葡萄糖浓度3.5%、蛋白胨浓度3.5%、吐温80浓度0.35%、氯化镁浓度0.20%,此培养条件下植物乳杆菌M1-NTG300所产细菌素的效价为1269.4 IU/mL,细菌素效价提高了19.8%。

关键词：植物乳杆菌细菌素培养基

副干酪乳杆菌M5-L抑制宋内志贺氏菌黏附作用影响因素的研究

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食品工业科技 2012年第24期33卷 99-102页

作者：张英春马微易华西张兰威哈尔滨工业大学食品科学与工程学院黑龙江哈尔滨150090 黑龙江出入境检验检疫局黑龙江哈尔滨150001

研究副干酪乳杆菌M5-L抑制宋内志贺氏菌(***)对HT-29细胞黏附的作用及其影响抑制黏附作用的表面分子分析。结果表明M5-L能够显著的抑制***的黏附作用,在排除、竞争和取代黏附实验中,抑制率分别为55%、33%和30%,差异显著(p<0.05),高碘酸... 详细信息

研究副干酪乳杆菌M5-L抑制宋内志贺氏菌(***)对HT-29细胞黏附的作用及其影响抑制黏附作用的表面分子分析。结果表明M5-L能够显著的抑制***的黏附作用,在排除、竞争和取代黏附实验中,抑制率分别为55%、33%和30%,差异显著(p<0.05),高碘酸钠处理后,M5-L的抑制黏附作用没有变化,表明碳水化合物并没有参与到黏附抑制过程中。而经过5mol/L LiCl处理后,M5-L的抑制黏附作用下降,说明S-层蛋白参与了M5-L抑制***对HT-29细胞的黏附作用。此外,M5-L的S-层蛋白能够显著抑制***的黏附作用。

关键词：副干酪乳酸杆菌宋内志贺氏菌抑制黏附菌体表面物质 HT-29细胞

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双水相萃取法从风干香肠中分离提取蛋白酶

分析化学 2008年第7期36卷 900-904页

作者：张兰威陈一韩雪杜明易华西哈尔滨工业大学食品科学与工程学院东北农业大学食品学院

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的蛋白纯化方法。为了扩展该方法适应领域,同时为风干香肠形成过程酶系的研究提供具体方法。本实验研究了运用双水相技术分离提取风干香肠中蛋白酶,对构成双水相体系中的PEG分子量、浓度和类型以及盐... 详细信息

双水相萃取(ATPS)是近年来发展起来的蛋白纯化方法。为了扩展该方法适应领域,同时为风干香肠形成过程酶系的研究提供具体方法。本实验研究了运用双水相技术分离提取风干香肠中蛋白酶,对构成双水相体系中的PEG分子量、浓度和类型以及盐浓度的影响进行了分析。确定了双水相组成体系为20%PEG1000(m/m)和25%MgSO4(m/m),在此体系中风干香肠的蛋白酶主要分布在上相,最高酶活12.37U/μg;纯化倍数为4.61;回收率为85%。通过分子筛层析对比,表明风干香肠经过双水相分离提取杂蛋白峰被除去,而蛋白酶峰几乎未受到影响,说明该双水相体系萃取香肠中蛋白酶具有良好的专一性。调解双水相pH值对蛋白酶的萃取没有影响,而添加电解质NaCl反而产生不利影响。

关键词：双水相蛋白酶风干香肠分离提取