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Toll样受体4在人胆管上皮细胞上皮—间叶样表型转化中作用的实验研究

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Toll样受体4在人胆管上皮细胞上皮—间叶样表型转化中作用的实验...

作者：易世杰遵义医学院

学位级别：硕士

目的探讨Toll样受体4(TLR4),上皮-间叶样表型转化相关标志物MMP-2、CK19,核转录因子Snail在肝胆管结石患者胆管上皮细胞中的表达及意义。材料与方法 1、临床标本：选取2010年9月至2012年10月在遵义医学院附属医院因肝内外胆管结石行... 详细信息

目的探讨Toll样受体4(TLR4),上皮-间叶样表型转化相关标志物MMP-2、CK19,核转录因子Snail在肝胆管结石患者胆管上皮细胞中的表达及意义。材料与方法 1、临床标本：选取2010年9月至2012年10月在遵义医学院附属医院因肝内外胆管结石行部分肝切除之标本25例作为实验组。选取同期因肝血管瘤行部分肝脏切除术之标本10例作为正常对照组。所有标本均为术中获取的新鲜标本。临床标本的应用得到遵义医学院伦理委员会批准,并获得病人知情同意。 2、检测方法：应用免疫组化方法检测TLR4、上皮标志物CK19、间叶标志物MMP-2、核转录因子Snail在实验组及对照组胆管上皮细胞中的表达。结果 1、TLR4在正常对照组胆管上皮细胞中仅少量表达;而在肝胆管结石组胆管上皮细胞中表达较强,其表达量显著高于正常对照组(P<0.05)。 2、CK19在正常对照组肝内胆管上皮细胞中表达较强,而在肝胆管结石标本的胆管上皮细胞中表达显著下降,两组间CK19表达量的比较有显著差异(P<0.05);MMP-2、Snail在肝胆管结石标本胆管上皮细胞中的表达显著强于正常肝胆管上皮组织中的表达(P<0.05)。 3、相关性分析显示,胆管上皮细胞中TLR4的表达量与CK19呈负相关(P=0.00,r=-0.96),而与MMP-2、Snail的表达呈正相关(P=0.00,r=0.965,0.975)。结论 1、胆管结石患者胆管上皮细胞中上皮标志物表达下调或缺失,间叶标志物升高,且促上皮-间叶样表型转化(EMT)的核转录因子表达也显著升高,表明者胆管上皮细胞可能发生了EMT。 2、TLR4在胆管结石患者胆管上皮细胞中表达明显增强,且与上皮标志物表达呈负相关,而与间叶标志物及促EMT的核转录因子的表达呈正相关,提示TLR4可能在胆管上皮细胞EMT的发生中起着重要作用。

关键词： TLR4 胆管上皮细胞 EMT CK19 MMP-2 Snail

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大家一起来捉“鬼”

小学生优秀作文 2015年第35期 28-29+2页

作者：易世杰陕西省西安市实验小学三年级二班

我和几个小伙伴组织了一支捉"鬼"小队。世界上本没有鬼,那我们在捉什么"鬼"呢?请大家往下看。嘘,我发现了一个"小懒鬼"。他穿的跟我一样,长的也和我一样。妈妈叫"小懒鬼"起床,他装作没听见,继续睡觉。妈妈叫了一遍又一遍,他一点儿反应... 详细信息

我和几个小伙伴组织了一支捉"鬼"小队。世界上本没有鬼,那我们在捉什么"鬼"呢?请大家往下看。嘘,我发现了一个"小懒鬼"。他穿的跟我一样,长的也和我一样。妈妈叫"小懒鬼"起床,他装作没听见,继续睡觉。妈妈叫了一遍又一遍,他一点儿反应都没有。妈妈急了,大声叫"小懒鬼"起床,"小懒

关键词：起来妈妈大家

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大家一起来捉“鬼”

小学生学习指导（中年级） 2015年第12期 28-29页

作者：易世杰陕西省西安市实验小学三年级二班 136200

我和几个小伙伴组织了一支捉“鬼”小队。世界上本没有鬼，那我们在捉什么“鬼”呢？请大家往下看。

关键词：小学生作文语文学习阅读知识

人参皂苷对老龄大鼠结肠上皮紧密连接的调节作用及机制研究

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中药材 2021年第10期44卷 2420-2424页

作者：赵骏周贤王辉易世杰南华大学附属南华医院胃肠外科湖南衡阳421002 南华大学附属南华医院肝胆外科湖南衡阳421002

目的:探讨人参皂苷对老龄大鼠肠屏障功能的调节作用及可能机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为5组,分别为成年对照组、老龄组及人参皂苷10、30、60 mg/kg组(n=12)。成年对照组于6月龄进行实验,其余48只大鼠饲养至18月龄,采用不同剂量(10... 详细信息

目的:探讨人参皂苷对老龄大鼠肠屏障功能的调节作用及可能机制。方法:60只雄性SD大鼠随机分为5组,分别为成年对照组、老龄组及人参皂苷10、30、60 mg/kg组(n=12)。成年对照组于6月龄进行实验,其余48只大鼠饲养至18月龄,采用不同剂量(10、30、60 mg/kg)的人参皂苷对18月龄的老龄大鼠进行6个月灌胃治疗。采用HE染色观察大鼠结肠组织病理学变化;免疫组化观察肠组织Claudin-1、Occludin蛋白表达;Western blot检测IL-1β、TNF-α、NF-κB P65、p-JNK、p-ERK1/2、p-P38蛋白表达。结果:HE染色发现老龄大鼠结肠无隐窝萎缩或炎症迹象,人参皂苷对老龄大鼠结肠无明显影响;免疫组化观察发现,老龄大鼠结肠组织Claudin-1、Occludin蛋白表达较成年对照组显著降低(P<0.01),而经人参皂苷治疗后Claudin-1、Occludin蛋白表达显著升高(P<0.01);Western blot检测发现,与成年对照组比较,老龄组大鼠结肠中IL-1β、TNF-α、NF-κB P65、p-JNK、p-ERK1/2、p-P38蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01),而经人参皂苷治疗后,结肠中IL-1β、TNF-α、NF-κB P65、p-JNK、p-ERK1/2、p-P38蛋白表达显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论:人参皂苷可能通过降低老龄大鼠结肠IL-1β、TNF-α蛋白表达,下调NF-κB蛋白表达,抑制MAPK信号通路的激活起到调节肠屏障作用。

关键词：人参皂苷大鼠结肠免疫组化肠屏障

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双镜联合在胃肠道疾病手术中的应用

蛇志 2016年第4期28卷 498-502页

作者：易世杰李峰南华大学附属南华医院湖南衡阳421000

随着医学技术发展,腹腔镜与内镜技术不断进步,但手术中单纯使用腹腔镜或内镜都有一定的优点和局限性。如内镜检查是目前消化道疾病诊断的主要方式,其对良性疾病和早期恶性疾病均有较高的检出率,检查同时即可行一期治疗;但其局限性在于... 详细信息

随着医学技术发展,腹腔镜与内镜技术不断进步,但手术中单纯使用腹腔镜或内镜都有一定的优点和局限性。如内镜检查是目前消化道疾病诊断的主要方式,其对良性疾病和早期恶性疾病均有较高的检出率,检查同时即可行一期治疗;但其局限性在于对胃肠道体积较大的疾病（直径〉5cm）、

关键词：双镜联合胃间质瘤结直肠息肉胃肠道恶性肿瘤

MMP1基因在头颈部鳞状细胞癌的表达及预后相关性

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2018年第4期32卷 287-291页

作者：刘龙庆陈志伟易世杰恩施州民族医院耳鼻咽喉头颈外科湖北恩施445000

目的:研究MMP1基因表达水平在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)患者中的表达情况及预后相关性,并探究可能的作用机制。方法:在TCGA公共数据库中下载HNSCC的RNA测序数据及相关临床数据,对样本中的MMP1基因表达数据及其对应的临床信息进行回顾性分... 详细信息

目的:研究MMP1基因表达水平在头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)患者中的表达情况及预后相关性,并探究可能的作用机制。方法:在TCGA公共数据库中下载HNSCC的RNA测序数据及相关临床数据,对样本中的MMP1基因表达数据及其对应的临床信息进行回顾性分析;采用数据库基因芯片数据验证MMP1基因与HNSCC发生的相关性;生存分析MMP1与HNSCC患者预后指标(无病生存期与总生存期)的关系;采用基因集富集分析方法探讨MMP1基因在HNSCC中可能的作用机制。结果:332例HNSCC患者RNA测序样本中,MMP1基因表达与淋巴管浸润、肿瘤分级明显相关(P易发生淋巴结转移,恶性程度越高;数据库基因芯片数据证实HNSCC组织中MMP1表达水平明显高于正常黏膜组织(t=12.622,P<0.05);MMP1基因高表达组HNSCC患者的预后(无病生存期、总生存期)明显差于低表达组(P<0.05)。基因富集分析提示MMP1基因高表达可能在上皮间充质转化、TGF-β信号通路、组织缺氧、血管再生、Noth信号通路、上调KRAS基因信号通路影响肿瘤的生物学进程。结论:MMP1基因高表达与HNSCC患者的发生及发展相关,可作为其独立危险因素,具有较大的临床意义。

关键词：头颈部肿瘤鳞状细胞癌基质金属蛋白酶1 基因表达预后

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TLR4及其作用的研究进展

蛇志 2013年第2期25卷 183-187页

作者：易世杰赵礼金贵州遵义医学院贵州遵义563000

Toll样受体（toll—likereceptors，TLRs）因其积极的研究成果而成为近年来广受关注的一种病原体识别受体，TLRs分布相对比较广泛，不但在小肠上皮、呼吸上皮细胞表达，同时也在血管内皮细胞、树突状细胞、大鼠脾及心肌细胞嘲等细胞中... 详细信息

Toll样受体（toll—likereceptors，TLRs）因其积极的研究成果而成为近年来广受关注的一种病原体识别受体，TLRs分布相对比较广泛，不但在小肠上皮、呼吸上皮细胞表达，同时也在血管内皮细胞、树突状细胞、大鼠脾及心肌细胞嘲等细胞中表达。研究证实，

关键词： Toll样受体4 脂多糖信号通路

利用CRISPR/Cas9慢病毒载体构建敲除大鼠肝星状细胞COX-2基因的细胞模型

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临床肝胆病杂志 2021年第2期37卷 336-342页

作者：彭敏曹婷阳学风易世杰傅念周克兵龙建武南华大学附属南华医院消化内科湖南衡阳421002

目的通过构建CRISPR/Cas9慢病毒载体,转染HSC-T6细胞,获得能稳定表达Cas9蛋白的HSC-T6细胞和COX-2基因缺陷的HSC-T6-COX-2-/-细胞,为后期的功能研究提供良好的工具和手段,为临床上治疗肝纤维化提供新策略。方法设计合成COX-2基因特异性... 详细信息

目的通过构建CRISPR/Cas9慢病毒载体,转染HSC-T6细胞,获得能稳定表达Cas9蛋白的HSC-T6细胞和COX-2基因缺陷的HSC-T6-COX-2-/-细胞,为后期的功能研究提供良好的工具和手段,为临床上治疗肝纤维化提供新策略。方法设计合成COX-2基因特异性的sgRNA(COX-2-sgRNA-1、COX-2-sgRNA-2、COX-2-sgRNA-3),并将其连接至GV371载体上,提取重组后的质粒,将其与包装质粒共同转染到293T细胞,形成慢病毒颗粒,荧光法检测病毒滴度。按照MOI值计算病毒最适用量,先将Lenti-Cas9-puro转染至HSC-T6细胞,嘌呤霉素筛选得到HSC-T6-Cas9细胞,再用Lenti-COX-2-sgRNA-EGFP转染至HSC-T6-Cas9细胞获得HSC-T6-COX-2-/-细胞,通过Cruiser酶切检测及Western Blot等方法在基因和蛋白水平上进行敲除验证。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果通过测序验证COX-2-sgRNA表达载体构建成功。重组表达质粒和包装质粒共同转染到293T细胞,形成慢病毒颗粒,荧光法检测病毒滴度均在1×108以上。成功构建能稳定传代的Cas9蛋白的HSC-T6细胞和COX-2基因缺陷的HSC-T6-COX-2-/-细胞模型。HSC-T6-Cas9细胞中LV-Cas9-Puro mRNA相对表达量(541.93±105.76)高于CON组细胞(1.00±0.02),差异具有统计学意义(t=12.995,P<0.01)。通过Cruiser酶切检测及Western Blot试验,结果提示CRISPR/Cas9慢病毒表达载体能在靶点起作用,其中COX-2-sgRNA-2敲除作用最明显,并且COX-2蛋白表达水平较CON组和NC组相比显著下降(P值均<0.05),提示COX-2-sgRNA有活性。结论成功构建了针对COX-2靶基因的CRISPR/Cas9慢病毒载体,获得稳定的COX-2基因敲除的HSC-T6-COX-2-/-细胞。

关键词：肝硬化规律成簇间隔短回文重复序列慢病毒感染基因敲除技术

环氧合酶2抑制剂对非酒精性脂肪性肝病大鼠模型回肠Acsl基因家族表达的影响

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临床肝胆病杂志 2020年第9期36卷 2040-2044页

作者：郭珊易世杰阳学风曹婷傅念周克兵龙建武南华大学附属南华医院消化内科湖南衡阳421002

目的研究环氧合酶2(COX-2)抑制剂对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型回肠Acsl基因家族表达的影响及意义。方法将45只SD大鼠随机分为3组:正常对照组(n=15只,普通饲料)、NAFLD模型组(n=15,高脂饲料)、尼美舒利组(n=15,高脂饲料+尼美舒利... 详细信息

目的研究环氧合酶2(COX-2)抑制剂对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型回肠Acsl基因家族表达的影响及意义。方法将45只SD大鼠随机分为3组:正常对照组(n=15只,普通饲料)、NAFLD模型组(n=15,高脂饲料)、尼美舒利组(n=15,高脂饲料+尼美舒利)。所有SD大鼠喂养到第12周处死。采集下腔静脉血,检测其总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)。肝组织行HE染色和油红O染色,评价各组大鼠肝组织脂肪变性程度。实时荧光定量PCR法检测回肠Acsl家族各基因的表达情况。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与正常对照组大鼠比较,NAFLD模型组血清TC、TG值均明显增加,肝脏脂肪变性明显(P值均<0.05);尼美舒利组与NAFLD模型组比较,血清TC、TG值均明显下降,肝脏脂肪变性程度减轻(P值均<0.05);与正常对照组大鼠相比,NAFLD模型组大鼠回肠COX-2的表达明显升高(P<0.05);与NAFLD模型组大鼠相比,尼美舒利组回肠COX-2的表达明显降低(P<0.05);与正常对照组相比,NAFLD模型组回肠Acsl3、Acsl5基因的表达明显增加(P值均<0.05);与NAFLD模型组相比,尼美舒利组Acsl3、Acsl5基因的表达明显降低(P值均<0.05)。结论COX-2抑制剂尼美舒利对NAFLD大鼠回肠Acsl基因家族表达有调控作用,提示COX-2抑制剂可能通过Acsl基因抑制NAFLD的进展。

关键词：环氧化酶2 非酒精性脂肪性肝病大鼠,Sprague-Dawley 基因