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脐带血血清培养脐带血间充质干细胞对脐带血CD34^+细胞的体外扩增作用

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广东医学 2012年第7期33卷 919-921页

作者：黄望香旷文勇李睿娟广东省深圳市第九人民医院血液内科 518116 湖南省儿童医院血液内科长沙410007 中南大学湘雅二医院血液内科长沙410011

目的探讨脐带血血清(UCBS)培养的脐带血间充质干细胞(UCB-MSC)对脐带血CD34+细胞体外造血的支持作用。方法采用UCBS培养脐带血贴壁细胞,采用ELISA法检测贴壁细胞培养液中SCF、GM-CSF、IL-6和TPO含量;用流式细胞术分析其免疫表型特征;在... 详细信息

目的探讨脐带血血清(UCBS)培养的脐带血间充质干细胞(UCB-MSC)对脐带血CD34+细胞体外造血的支持作用。方法采用UCBS培养脐带血贴壁细胞,采用ELISA法检测贴壁细胞培养液中SCF、GM-CSF、IL-6和TPO含量;用流式细胞术分析其免疫表型特征;在成骨细胞和脂肪细胞诱导培养条件下诱导细胞分化,采用脐带血贴壁细胞单独或与细胞因子共培养脐带血CD34+细胞。结果采用UCBS培养脐带血贴壁细胞获得的细胞具有MSC的一般特性,在贴壁细胞培养液中检测到SCF、IL-6和TPO,贴壁细胞和脐带血CD34+细胞培养14 d,联合组第10天和第14天的CD34+细胞的扩增倍数明显高于细胞因子组(P<0.05),联合组第10天明显高于单独UCB-MSCs组(P<0.05),联合组第14天与单独UCB-MSCs组类似,CD34+CD13+亚群细胞比例在联合组均明显高于细胞因子组和单独UCB-MSCs组(P<0.05)。联合组和单独UCB-MSCs组CD34+CD33-亚群细胞比例明显高于细胞因子组(P<0.05)。结论单独应用UCB-MSCs或联合细胞因子可有效地体外扩增脐带血CD34+细胞。

关键词：脐带血血清间充质干细胞 CD34+细胞

水合淫羊藿素对THP-1细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

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中国实验血液学杂志 2017年第1期25卷 94-98页

作者：旷文勇郑敏翠张广森李睿娟湖南省儿童医院血液内科湖南长沙410007 中南大学湘雅二医院血液内科湖南长沙410011

目的:探讨水合淫羊藿素(icaritin)对THP-1细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:用MTS法、流式细胞术和Hoechst 33258荧光染色检测icaritin对TP-1细胞的增殖抑制及促凋亡作用,Western blot技术检测BCL-2、BAX和Caspase-3蛋白... 详细信息

目的:探讨水合淫羊藿素(icaritin)对THP-1细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:用MTS法、流式细胞术和Hoechst 33258荧光染色检测icaritin对TP-1细胞的增殖抑制及促凋亡作用,Western blot技术检测BCL-2、BAX和Caspase-3蛋白的表达。结果:4-32μmol/L icaritin作用24-72 h对THP-1细胞有增殖抑制作用(P<0.05),且呈时间-剂量依赖关系(r=0.946);4-32μmol/L icaritin作用24和48 h,对THP-1细胞有凋亡诱导作用(P<0.05),也显示时间-剂量依赖关系(r=0.924)。icaritin作用THP-1细胞48 h后,THP-1细胞BCL-2蛋白的表达较对照组显著降低(P<0.05),而BAX和Caspase-3表达较对照组显著增高(P<0.05)。结论:Icari血对THP-1细胞有增殖抑制及促凋亡作用,icaritin可能通过线粒体途径诱导THP-1细胞的凋亡。

关键词：水合淫羊藿素白血病 THP-1细胞细胞增殖细胞调亡

脐带血清和成人自体血清体外培养人骨髓间充质干细胞的比较

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第45期13卷 8917-8921页

作者：旷文勇周新伏李睿娟郑敏翠湖南省儿童医院血液内科湖南省长沙市410007 湘潭市中心医院血液内科湖南省湘潭市411100 中南大学湘雅二医院血液科湖南省长沙市410011

背景:为避免骨髓间充质干细胞培养过程中应用异种血清的排斥以及提高骨髓间充质干细胞培养效率,制备脐带血清体外扩增培养骨髓间充质干细胞是目前的研究热点。目的:比较脐带血清和成人自体血清体外培养人骨髓间充质干细胞的生物学特性... 详细信息

背景:为避免骨髓间充质干细胞培养过程中应用异种血清的排斥以及提高骨髓间充质干细胞培养效率,制备脐带血清体外扩增培养骨髓间充质干细胞是目前的研究热点。目的:比较脐带血清和成人自体血清体外培养人骨髓间充质干细胞的生物学特性。设计、时间及地点:开放性实验,于2006-10/2008-06在中南大学湘雅二医院细胞生物实验室完成。材料:16份骨髓标本由中南大学湘雅二医院和湖南省湘潭市中心医院提供。方法:采用FicollPaque细胞分离液从16例新鲜成人骨髓穿刺液中分离骨髓间充质干细胞,分别用含体积分数为10%脐带血清、成人自体血清的DMEM/F12培养基培养,取第4代细胞进行实验。流式细胞仪检测细胞表面抗原,成骨诱导体系及脂肪诱导体系分别诱导各组骨髓间充质干细胞定向分化,通过细胞形态观察、免疫表型及免疫化学染色进行鉴定。主要观察指标:①细胞形态。②骨髓间充质干细胞计数和细胞周期。③表面标志物的鉴定。④免疫组织化学染色观察骨髓间充质干细胞诱导成骨、成脂情况。结果:①脐带血清组培养的骨髓间充质干细胞在增殖数量和速度上优于成人自体血清组(P<0.05)。两种血清培养条件下,只有少数细胞处于活跃的增殖期,脐带血清组S期细胞多于成人自体血清组(P<0.05)。②脐带血清组培养的骨髓间充质干细胞表达CD29、CD73、CD105的阳性率均在90%以上,高于成人自体血清组(P<0.05);而CD31、CD34、CD45的阳性率均在2%以下,CD31阳性率低于成人自体血清组(P<0.05)。③脐带血清培养的骨髓间充质干细胞诱导为成骨细胞阳性率和脂肪细胞阳性率均高于自体血清组(P<0.05)。结论:脐带血清组培养的骨髓间充质干细胞的纯度和体外诱导分化能力比成人自体血清组高,更适合临床应用。

关键词：间充质干细胞脐带血清细胞培养定向分化

慢性淋巴细胞白血病免疫表型特征分析及其临床意义

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慢性淋巴细胞白血病免疫表型特征分析及其临床意义

中华医学会第八次全国血液学学术会议

作者：旷文勇张广森中南大学湘雅二医院血液科

目的:探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)的免疫表型特点及其临床意义,并结合血清β-微球蛋白(β-MG)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,对CLL患者的预后进行评价。方法:采用活细胞间接免疫荧光技术分析15例CLL患者的免疫表型。采用速率散射比浊法测定13...

目的:探讨慢性淋巴细胞白血病(CLL)的免疫表型特点及其临床意义,并结合血清β-微球蛋白(β-MG)和乳酸脱氢酶(LDH)水平,对CLL患者的预后进行评价。方法:采用活细胞间接免疫荧光技术分析15例CLL患者的免疫表型。采用速率散射比浊法测定13例CLL患者的血清β-MG和LDH水平。结果:(1)本组CLL患者的平均发病年龄为62.9岁,男女性别之比为4:1。(2)免疫学标志CD5、

关键词：

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难治性特发性血小板减少性紫癜的免疫治疗

国外医学（输血及血液学分册） 2003年第5期26卷 409-411页

作者：旷文勇张广森中南大学湘雅二医院血液科长沙410011

特发性血小板减少性紫癜(ITP)是一种自身免疫性疾病,一般用糖皮质激素治疗和(或)脾切除治疗,无效的病例为难治性ITP。研究者用大剂量静注丙种球蛋白、干扰素-α、单克隆抗体、环孢素A、骁悉、免疫吸附、血浆置换等免疫治疗及清除幽门螺... 详细信息

特发性血小板减少性紫癜(ITP)是一种自身免疫性疾病,一般用糖皮质激素治疗和(或)脾切除治疗,无效的病例为难治性ITP。研究者用大剂量静注丙种球蛋白、干扰素-α、单克隆抗体、环孢素A、骁悉、免疫吸附、血浆置换等免疫治疗及清除幽门螺杆菌治疗难治性ITP,取得了较好的疗效。

关键词：难治性特发性血小板减少性紫癜免疫治疗自身免疫性疾病糖皮质激素治疗脾切除丙种球蛋白干扰素-α

流式细胞术与不同类型聚合酶链式反应技术用于儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病监测的比较

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医学临床研究 2021年第4期38卷 569-571,575页

作者：宋娜旷文勇湖南省儿童医院血液内科湖南长沙410007

[目的]比较流式细胞术(FCM)与多种聚合酶链式反应(PCR)技术在儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病(MRD)监测中的应用价值。[方法]选择2016年1月至2018年12月本院收治的170例急性淋巴细胞白血病患儿,且均接受SCCLG-ALL-2016方案治疗。在初... 详细信息

[目的]比较流式细胞术(FCM)与多种聚合酶链式反应(PCR)技术在儿童急性淋巴细胞白血病微小残留病(MRD)监测中的应用价值。[方法]选择2016年1月至2018年12月本院收治的170例急性淋巴细胞白血病患儿,且均接受SCCLG-ALL-2016方案治疗。在初诊时通过FCM行免疫分型检测以及通过PCR技术检测急性淋巴细胞白血病融合基因和免疫球蛋白(Ig)及T细胞表面受体(TCR)基因重排;治疗dus通过FCM及不同类型PCR技术(RT-qPCR、巢式RT-PCR、多重PCR)进行MRD监测。分析FCM与不同类型PCR技术对MRD监测结果有无差异。[结果]FCM检测MRD阳性率较RT-qPCR和巢式RT-PCR高,但差异无统计学意义(P>0.05)。FCM检测MRD阳性率较多重PCR高,且其差异具有统计学意义(χ^(2)=34.03,P0.05)。多重PCR技术检测MRD阳性患者较阴性患者OS低,差异有统计学意义(P<0.005)。[结论]FCM方法与RT-qPCR或巢式RT-PCR技术检测白血病特异性融合基因均适用于急性淋巴细胞白血病患儿MRD监测,灵敏度高,特异性强;多重PCR方法检测IG或TCR基因重排进行MRD监测,特异性强,但灵敏度较低。

关键词：前体细胞淋巴母细胞白血病淋巴瘤/诊断流式细胞术/方法多重聚合酶链式反应/方法肿瘤,残余儿童

儿童慢性特发性血小板减少性紫癜T细胞亚群变化研究

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儿童慢性特发性血小板减少性紫癜T细胞亚群变化研究

淫羊藿素对儿童复发急性淋巴细胞白血病细胞的抗白血病效应及其机制

中华医学会血液学分会第十三届全国血栓与止血学术会议暨“血栓栓塞性疾病（血栓与止血）基础与临床研究进展”

作者：吴攀郑敏翠旷文勇

目的:探讨儿童慢性特发性血小板减少性紫癜T细胞亚群变化的具体情况及临床意义。方法:流式细胞术分别检测儿童慢性ITP患者和对照者外周血CD4/CD8比值、天然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)、调节性T细胞(Treg细胞)变化。结果:慢性...

目的:探讨儿童慢性特发性血小板减少性紫癜T细胞亚群变化的具体情况及临床意义。方法:流式细胞术分别检测儿童慢性ITP患者和对照者外周血CD4/CD8比值、天然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)、调节性T细胞(Treg细胞)变化。结果:慢性ITP组与对照组比较,慢性ITP组CD4/CD8T细胞比值降低,两组间差异有统计学意义(P<0.05);慢性ITP组CD1656NK细胞降低,两组间差异有统计学意义(P<0.05):慢

关键词：

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中国医师杂志 2020年第6期22卷 866-870,874页

作者：旷文勇郑敏翠李婉丽杨海霞李睿娟湖南省儿童医院血液内科长沙410007 中南大学湘雅二医院血液科长沙410011

目的:研究淫羊藿素(Icaritin)对儿童复发急性淋巴细胞白血病697细胞的抗白血病效应,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养697细胞,分为对照组和淫羊藿素组(5、10、20μmol/L)。采用CCK8法检测淫羊藿素对697细胞的增殖抑制作用,采用Hoc... 详细信息

目的:研究淫羊藿素(Icaritin)对儿童复发急性淋巴细胞白血病697细胞的抗白血病效应,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养697细胞,分为对照组和淫羊藿素组(5、10、20μmol/L)。采用CCK8法检测淫羊藿素对697细胞的增殖抑制作用,采用Hochest33258染色和流式细胞检测法检测淫羊藿素对697细胞的凋亡诱导作用;应用Western blot检测Bcl-2、Bax、Cyt-C和Caspase3蛋白的表达。结果:淫羊藿素在5~20μmol/L浓度范围内作用24~72 h对697细胞有增殖抑制作用,这种作用呈剂量和时间依赖关系(r=0.76,r=0.89);淫羊藿素在5~20μmol/L浓度范围内作用48 h对697细胞有凋亡诱导作用(P<0.05);10、20μmol/L淫羊藿素作用697细胞48 h后,697细胞Bcl-2蛋白的表达显著减少(P<0.05),而Bax,Cyt-C和Caspase3裂解片段等蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论:淫羊藿素可通过抑制697细胞增殖及诱导其凋亡而发挥抗白血病效应,其机制可能通过上调促凋亡蛋白Bax、Cyt-C和下调抗凋亡Bcl-2而诱导697细胞凋亡。

关键词：淫羊藿甙急性淋巴细胞性白血病细胞系肿瘤细胞凋亡

原发性免疫性血小板减少症儿童调节性B细胞及淋巴细胞亚群免疫功能失调

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中国医师杂志 2021年第9期23卷 1321-1325页

作者：旷文勇郑敏翠李婉丽杨海霞李睿娟湖南省儿童医院血液内科长沙410007 中南大学湘雅二医院血液科长沙410011

目的探讨原发性免疫性血小板减少症(ITP)患儿的调节性B细胞(Bregs)及淋巴细胞亚群的改变,并分析其与ITP持续时间和缓解时间的关系。方法流式细胞术检测88例ITP患儿治疗前和其中84例治疗1个月后和45例正常对照者外周血淋巴细胞亚群及Breg... 详细信息

目的探讨原发性免疫性血小板减少症(ITP)患儿的调节性B细胞(Bregs)及淋巴细胞亚群的改变,并分析其与ITP持续时间和缓解时间的关系。方法流式细胞术检测88例ITP患儿治疗前和其中84例治疗1个月后和45例正常对照者外周血淋巴细胞亚群及Bregs的比例。采用包括糖皮质激素和静脉注射IgG作为一线药物治疗ITP患儿。对比治疗后不同缓解时间ITP患儿淋巴细胞亚群的改变。结果与对照组相比,所有ITP患儿的Th、NK、Breg细胞计数和Th/Tc比值均明显降低(P0.05),而与对照组仍有明显差异(P0.05),而与治疗前比较,除Tc之外,其他细胞亚群均明显增高(P<0.05);长期缓解ITP组NK细胞和Breg细胞明显高于短期缓解ITP组(P<0.05)。结论长病程ITP患儿外周血Bregs明显降低,治疗后获得长期缓解ITP患儿的外周血Bregs显著增加,表明恢复Bregs的免疫机制可能与儿童ITP的长期缓解有关。

关键词：免疫性血小板减少症 B淋巴细胞,调节性淋巴细胞亚群儿童