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野生黄毛草莓FnNLR基因克隆和抗炭疽病初步功能分析

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野生黄毛草莓FnNLR基因克隆和抗炭疽病初步功能分析

作者：时雅倩福建农林大学

学位级别：硕士

草莓(Fragaria×ananassa)属于蔷薇科(Rosaceae)草莓属(Fragaria)多年生浆果类草本植物,在世界经济作物上有着十分重要的作用。近年来,中国草莓生产发展很快,栽培规模与产量均居于全球首位。草莓中含有大量膳食纤维和果胶,能够提高胃肠... 详细信息

草莓(Fragaria×ananassa)属于蔷薇科(Rosaceae)草莓属(Fragaria)多年生浆果类草本植物,在世界经济作物上有着十分重要的作用。近年来,中国草莓生产发展很快,栽培规模与产量均居于全球首位。草莓中含有大量膳食纤维和果胶,能够提高胃肠道的蠕动,从而促进消化吸收。但在生产过程中,草莓会遭受许多病害的侵染,其中草莓炭疽病的危害较为严重。南方地区高温多雨,草莓极易感染炭疽病。染病后草莓叶片可产生局部病斑,进而逐步扩大,致使整株凋零枯死,可在短时间内对草莓产业造成毁灭性的损失。中国是世界上野生草莓资源最丰富的国家,多项研究表明,野生黄毛草莓(Fragaria nilgerrensis)对炭疽病的抗性较强。从野生草莓中挖掘抗病基因,结合传统杂交育种手段,培育新的种质资源,为实现草莓抗性育种提供更快捷的手段。课题组前期以黄毛草莓为试验材料,在胶孢炭疽菌(Colletotrichum gleosporiodes)诱导下进行转录组差异表达分析,筛选出受胶孢炭疽菌诱导表达上调的NLR基因FnNLR,本研究首先克隆了该基因的cDNA序列(Gen Bank登录号:OM909008)。在此基础上,分析其基因结构;构建FnNLR基因过表达载体,通过对森林草莓(***)‘Hawaii 4’进行遗传转化,分析其抗炭疽病功能;通过酵母双杂交获得FnNLR互作蛋白,进一步探索其抗病机制。取得了如下主要结果:1、采用同源克隆技术从黄毛草莓中获得FnNLR基因的cDNA序列,其开放阅读框长度为1749 bp,编码582个氨基酸,具有一个N端的RPW8结构域、中间结构域NB-ARC和C端的LRR保守结构域。实时荧光定量PCR结果显示,NLR基因在抗病的黄毛草莓和感病栽培品种‘妙香3号’草莓中均受胶孢炭疽菌和水杨酸(SA)诱导,且在黄毛草莓中的表达量明显高于‘妙香3号’草莓。2、构建了植物过表达载体pCAMBIA1300-HA-FnNLR,转化到农杆菌菌株GV3101中,再通过花絮浸染法转化拟南芥。对FnNLR转基因拟南芥进行病原菌接种处理,初步分析了FnNLR的抗病功能。转FnNLR转基因拟南芥接种希金斯炭疽菌(***)后,与野生型(WT)拟南芥相比,转FnNLR基因拟南芥株系的病斑面积更小,细胞死亡和超氧阴离子(O)积累更多。表型鉴定结果表明,转FnNLR基因拟南芥增强了对希金斯炭疽菌的抗性。进一步通过荧光定量PCR检测不同抗病信号转导途径中相关防御基因的表达量,结果显示,转基因株系中的AtPR1、AtICS1、AtPDF1.2和AtLOX3相对表达量均显著高于野生型;接种丁香假单胞菌番茄致病变种(Pseudomonas sringae ***,DC3000)后,转基因拟南芥叶片的细菌数量低于野生型。qRT-PCR结果显示转基因拟南芥中的AtPR1、AtICS1、AtPDF1.2和AtLOX3相对表达量也高于野生型。以上结果表明,FnNLR基因在植物抵御病原菌入侵过程中可能发挥重要作用。3、将构建的植物过表达载体转化到农杆菌菌株EHA105中,再通过农杆菌介导的叶盘法遗传转化森林草莓‘Hawaii 4’。通过DNA、RNA和蛋白水平共鉴定到11株阳性转基因植株。对转基因株系和野生型(WT)接种了胶孢炭疽菌处理,发现转基因株系的发病面积显著小于野生型,表型鉴定结果表明,转FnNLR基因草莓株系增强了对草莓胶孢炭疽菌的抗性。接种炭疽菌不同时期转基因株系抗氧化酶CAT、POD和SOD活性均高于野生型,且转基因株系和野生型相比,SA和JA信号途径防御相关基因FvPR1和FvPR5,FvCOI1和FvJAZ1均被显著诱导上调表达,表明FnNLR可能通过调控上述基因表达参与调控草莓炭疽病的抗性。4、选取最抗胶孢炭疽菌的转基因草莓株系OE-1和野生型草莓植株分别进行接种胶孢炭疽菌处理,在0和12 h时采集样品进行转录组分析。转基因株系未接种炭疽菌(OE2C)与野生型未接种(WTC)相比,共有差异表达基因715个,其中有538个上调基因,177个下调基因。结果表明未接种时转基因株系有许多差异表达基因本底就已经上调表达。通过GO功能富集和KEGG富集分析发现,转基因株系中次生物质的生物合成、植物激素信号转导等途径的相关基因在本底水平就已经被加强表达,表明FnNLR基因可能通过激活调控次生物质的生物合成、植物激素信号转导等途径来调控对炭疽菌的抗性。随后对差异表达转录因子和抗病相关基因进行分析,结果表明转FnNLR基因草莓植株中的MYB、AP2、WRKY等转录因子和抗病相关基因NB-ARC的表达增强,参与调控下游相关信号途径。5、将转基因株系OE-1和野生型森林草莓均在接种胶孢炭疽菌0和12 h取样进行代谢组学分析,发现转

关键词：野生黄毛草莓草莓炭疽病 FnNLR基因抗病性功能分析

基于24Model的事故原因系统分析与调查报告对比:以响水爆炸事故为例

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中国安全科学学报 2022年第7期32卷 48-55页

作者：袁晨辉时雅倩麻勇赵祎豪傅贵中国矿业大学(北京)应急管理与安全工程学院北京100083

为促进“2-4”模型(24Model)在官方事故调查工作的广泛应用,探究事故调查报告存在的不足之处,以响水“3·21”爆炸事故为例,基于24Model分析事故原因,绘制事故原因的作用路径,并与调查报告进行对比。结果表明:响水天嘉宜公司在个人层面... 详细信息

为促进“2-4”模型(24Model)在官方事故调查工作的广泛应用,探究事故调查报告存在的不足之处,以响水“3·21”爆炸事故为例,基于24Model分析事故原因,绘制事故原因的作用路径,并与调查报告进行对比。结果表明:响水天嘉宜公司在个人层面的不安全动作、不安全物态、安全能力,以及组织层面的安全文化和安全管理体系的缺欠导致该事故;事故调查报告并未对组织层面的原因作出详细分析,没有揭示事故发生的机制,并未准确定义和划分各类责任者;24Model在对各类原因和因素完整定义的基础上,能够以系统分析方法总结事故原因并且明确事故责任者的定义和划分。

关键词： “2-4”模型(24Model) 事故原因系统分析事故调查报告响水爆炸事故对比研究

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基于BP神经网络的住宅房地产税基评估研究

基于BP神经网络的住宅房地产税基评估研究

作者：阮雅倩内蒙古财经大学

学位级别：硕士

过去,我国房地产税收主要聚焦于经营性房地产的征税。但随着地方财政压力的增加和土地出让收入的日益不稳定,房地产税改革势在必行。作为土地财政转型的重要一环,房地产税收为政府提供了更为稳定、更加持续的财力支持。然而,我国房地产... 详细信息

过去,我国房地产税收主要聚焦于经营性房地产的征税。但随着地方财政压力的增加和土地出让收入的日益不稳定,房地产税改革势在必行。作为土地财政转型的重要一环,房地产税收为政府提供了更为稳定、更加持续的财力支持。然而,我国房地产税制要素设计不合理、税负结构“重流转、轻保有”等问题一直存在。为探索更加合理的房地产税征收模式,2011年1月,我国政府在上海和重庆两地率先启动了房地产税的试点工作,将符合条件的个人住宅纳入了征税范围。若要在全国范围内推广实施房地产税,征税范围广、征收数量大、住宅状况复杂等情况势必对税基评估技术有着更高的要求。房地产税基评估工作在追求科学性和准确性的同时,还需要确保工作的高效性与低成本。因此,传统的单宗评估法已无法满足税基评估需求,批量评估与计算机技术相结成为必然的趋势。通过广泛阅读国内外相关文献资料,本文以房地产税基评估的理论为依据,深入分析了影响房地产税基的各种因素。在此基础上,本文对比研究了国内外税基评估现状,进一步强调了批量评估技术在税基评估中的重要地位。通过对不同批量评估技术特性的探讨,以及当前住宅房地产税基评估迫切需求的分析,本文从BP神经网络的内在优势及外部环境政策两个维度,强调了其在住宅房地产税基评估中的适用性。鉴于我国税基批量评估流程尚未设定统一标准,本文设计了BP神经网络应用于税基评估的工作流程。最终,构建了基于BP神经网络技术的住宅房地产税基评估模型。在这一过程中,识别并剔除了对居民住宅房地产税基影响较小的冗余因素,精选出14个关键特征因素。通过对武汉市300套普通居民住宅交易样本数据的实证研究,并对BP神经网络模型与特征价格模型进行比较分析,发现BP神经网络模型在住宅房地产税基批量评估中能实现高效率、低成本、评估结果准确的要求。本文从房地产税基评估的角度出发,深入探讨了住宅房地产税基评估的重要性以及BP神经网络在房地产税基评估中的适用性,同时还强调了武汉市作为住宅房地产税基评估研究样本的独特优势。希望本研究能够为我国不同区域的住宅房地产税基评估工作提供有价值的参考与启示,进而促进全国范围内房地产税基评估方法的进步与创新。

关键词：住宅房地产税基评估 BP神经网络

黄毛草莓F-box蛋白基因FnFBOX1及其启动子的克隆和表达分析

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生物技术通报 2022年第2期38卷 44-56页

作者：时雅倩申亚茹陈漫影何淑敏刘予涵何天楠陈清西文志丰福建农林大学园艺学院福州350002

探索黄毛草莓FnFBOX1参与草莓胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)侵染过程中的抗病反应和pFnFBOX1启动子的转录活性,为研究FnFBOX1抗炭疽病功能奠定基础。以黄毛草莓(Fragaria nilgerrensis Schidl.)为研究对象,通过RT-PCR技术克隆FnFBOX1的cDNA序列。通过氨基酸序列比对、进化树分析、亚细胞定位、启动子克隆并构建瞬时表达载体、组织特异性表达分析,最后用荧光定量分析了抗病的黄毛草莓和感病的‘妙香 3’草莓在水杨酸(SA)和胶孢炭疽菌胁迫下FnFBOX1的表达水平变化。结果表明,FnFBOX1的ORF全长为1 227 bp,编码408个氨基酸。氨基酸序列比对和进化树分析发现FnFBOX1与森林草莓(Fragaria vesca)FvFBOX1同源性最高。亚细胞定位结果显示FnFBOX1定位于细胞核。克隆的FnFBOX1启动子长度为821 bp,构建pFnFBOX1的瞬时表达载体pFnFBOX1∷GUS。瞬时转化烟草后对其进行组织化学染色分析和GUS活性测定,结果表明,pFnFBOX1具有驱动下游基因转录的活性,且胶孢炭疽菌和SA可促进FnFBOX1启动子启动的GUS活性的提高。荧光定量PCR分析表明,FnFBOX1在黄毛草莓的不同组织中均有表达。抗病黄毛草莓和感病‘妙香 3’草莓均进行接种胶孢炭疽菌和喷施SA处理,结果显示,黄毛草莓接种胶孢炭疽菌12 h后FnFBOX1表达量达到最高,是0 h的6.3倍;SA处理24 h时,其表达量达到最高,是0 h的7.9倍。‘妙香 3’草莓也响应胶孢炭疽菌和SA处理,但FBOX1表达量比黄毛草莓低。

关键词：黄毛草莓炭疽病 FnFBOX1 启动子表达分析

多重情境下“核心-边缘”网络关系研究——基于云计算企业分阶段成长的分析

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科研管理 2024年第2期45卷 105-116页

作者：陈岩张睿倩吴超楠时准北京邮电大学经济管理学院北京100876

精准发挥有为政府和有效市场两方面力量推动大中小企业协同共赢是实现中国式创新的关键着力点,揭示我国本土多重情境下大中小企业协同合作的内在复杂机制具有重要意义。基于2016—2019年云计算企业数据,本文发现了云计算企业在我国数字... 详细信息

精准发挥有为政府和有效市场两方面力量推动大中小企业协同共赢是实现中国式创新的关键着力点,揭示我国本土多重情境下大中小企业协同合作的内在复杂机制具有重要意义。基于2016—2019年云计算企业数据,本文发现了云计算企业在我国数字化、市场、制度多重情境叠加下的分阶段成长规律。结果表明,数字化情境下建立“核心-边缘”网络关系对创建期、成长期企业成长影响为负,并对存活期企业成长影响为正;多市场接触情境能强化存活期正面影响而弱化成长期负面影响,国有资本支持情境能弱化创建期负面影响而强化存活期正面影响,且市场、制度交互情境能进一步增强存活期正面影响。本研究揭示了我国本土多重情境下中小企业从依附大企业到成长的微观过程,为数字化时代大中小企业合作共赢提供策略建议,并为我国分阶段运用有为政府和有效市场两股力量,进而精准释放中国式创新红利提供了实证依据和施策配方。

关键词： “核心-边缘”网络关系颠覆性技术多重情境中国式创新

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层积视角下武夷山国家公园文化景观特征识别

风景园林 2024年第1期31卷 71-79页

作者：涂宇倩张婧雅华中农业大学龙岩市园林绿化中心华中农业大学园艺林学学院农业农村部华中都市农业重点实验室

【目的】中国自然保护地具有自然与人文双重属性,系统、客观、可视化地识别文化景观特征,可为自然保护地空间规划和资源整体性管护提供参考。【方法】以武夷山国家公园为研究对象,从层积视角出发深入识别文化景观特征。在时间序列上,选... 详细信息

【目的】中国自然保护地具有自然与人文双重属性,系统、客观、可视化地识别文化景观特征,可为自然保护地空间规划和资源整体性管护提供参考。【方法】以武夷山国家公园为研究对象,从层积视角出发深入识别文化景观特征。在时间序列上,选取武夷山国家公园文化景观产生与发展的6个典型历史时期,在特征要素上,选取山水地貌、河流关系、景观结构、土地利用、感知意向5个指标,特征识别采用两步聚类法和图像分割技术。【结果】从静态的历史时期来看,武夷山国家公园在唐、宋、元、明、清和当代分别呈现出6类、17类、14类、21类、24类和36类文化景观特征类型。从长时序的演变视角出发,总结了武夷山国家公园文化景观在数量、空间及形式上的特征。识别出武夷山文化景观高层积区域位于九曲溪中、东部(一曲至七曲)以及南、北两岸部分区域,包含243个文化景观点、19处面状山体和9条线状河流。【结论】从层积性视角出发构建的文化景观特征识别路径,为明确区域文化价值提供了量化与空间化的科学手段,有助于国家公园文化资源的分级、分类管护工作。

关键词：文化景观国家公园层积性动态演变景观特征识别

甜味植物调节胰高血糖素样肽-1防治糖尿病的研究进展

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食品与发酵工业 2024年第15期50卷 372-380,397页

作者：王雅靖陈靓邹雅倩陈絮蒙湖南中医药大学药学院湖南长沙410208

由肠道L细胞生成的多肽类化合物胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)能够通过多重机制降低血糖水平,被认为是治疗糖尿病的有效靶点。现阶段,司美格鲁肽等GLP-1相关药物已经被广泛运用于临床实践中,效果显著却仍有一定局限... 详细信息

由肠道L细胞生成的多肽类化合物胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)能够通过多重机制降低血糖水平,被认为是治疗糖尿病的有效靶点。现阶段,司美格鲁肽等GLP-1相关药物已经被广泛运用于临床实践中,效果显著却仍有一定局限性。近年来,甜味植物被广泛研究应用于防治各类疾病,尤其在糖尿病防治过程中展现出巨大潜力,其中丰富的糖类、皂苷类、黄酮类及生物碱类等化合物是其呈“甜味”的主要物质基础。已有多项研究提示甜味植物及其活性成分可能通过多种途径影响GLP-1,包括直接与L细胞发生作用,激活味觉受体、胰高血糖素原多肽/前激素转化酶1/3、Wnt/β-catenin和磷酯酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B等信号通路,或者间接的通过肠道菌群/短链脂肪酸、肠道菌群/胆汁盐水解酶/法尼醇X受体、二肽基肽酶-4等途径影响GLP-1的合成或维持。该研究将对甜味植物的甜味物质基础及其作用于GLP-1的可能机制进行综述,为进一步阐明甜味植物的“滋味”与“功效”提供新的视角,并为甜味植物资源的开发利用提供新的思路。

关键词：甜味植物活性成分胰高血糖素样肽-1(GLP-1) 糖尿病

基于GC-IMS技术的不同产地青钱柳茶挥发性成分表征及分析

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食品与机械 2024年第5期40卷 161-167,233页

作者：罗洁邹雅倩田星湖南中医药大学药学院湖南长沙410208 湖南省中医药民族医药国际联合实验室湖南长沙410208

目的:研究不同产地青钱柳茶挥发性气味物质差异。方法:以湖南常德、湖南张家界、湖南邵阳、江西修水、贵州黔东南、湖北恩施的青钱柳茶为研究对象,采用气相色谱—离子迁移谱联用(GC-IMS)技术并结合偏最小二乘判别分析(PLS-DA),探讨不同... 详细信息

目的:研究不同产地青钱柳茶挥发性气味物质差异。方法:以湖南常德、湖南张家界、湖南邵阳、江西修水、贵州黔东南、湖北恩施的青钱柳茶为研究对象,采用气相色谱—离子迁移谱联用(GC-IMS)技术并结合偏最小二乘判别分析(PLS-DA),探讨不同产地青钱柳茶中特征差异挥发性物质及其相似度。结果:不同产地青钱柳茶共检测出120种挥发性有机物,包括部分物质的单体及其多聚体,分别为醛类34种、烯烃类21种、醇类19种、酮类16种、酯类10种、羧酸类8种、呋喃类5种、吡嗪类4种、醚类2种及苯系物1种。其中γ-松油烯、苯乙烯、4-甲基-1-戊醇、正辛醛为主要特征差异挥发性物质。结论:不同产地间青钱柳茶挥发性有机物质均存在一定差异(P<0.05),GC-IMS技术可有效实现青钱柳茶的产地鉴别和质量控制。

关键词：青钱柳茶挥发性物质气相色谱—离子迁移谱偏最小二乘判别主成成分析

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鲜人参中丙二酰基人参皂苷-Ra、-Ra的分离及结构鉴定

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中国中药杂志 2024年

作者：李泽文李丹李嘉星崔颖陆雅倩刘志吉林农业大学中药材学院

该文旨在对鲜人参Panax ginseng根中的丙二酰基人参皂苷类化学成分进行研究。通过D101大孔吸附树脂柱、ODS柱色谱及高效液相色谱制备分离技术等方法，对鲜人参根中70%乙醇提取物的化学成分进行分离纯化，并通过高分辨质谱和核磁共振波... 详细信息

该文旨在对鲜人参Panax ginseng根中的丙二酰基人参皂苷类化学成分进行研究。通过D101大孔吸附树脂柱、ODS柱色谱及高效液相色谱制备分离技术等方法，对鲜人参根中70%乙醇提取物的化学成分进行分离纯化，并通过高分辨质谱和核磁共振波谱相结合的方法对化合物进行结构鉴定。从鲜人参提取物中分离得到2个丙二酰基人参皂苷，分别鉴定为3-O-[6-O-丙二酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基]-20-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→4)-α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基]-达玛-24-烯-3β，12β，20S-三醇(1)和3-O-[6-O-丙二酰基-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖基]-20-O-[β-D-吡喃木糖基-(1→2)-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基]-达玛-24-烯-3β，12β，20S-三醇(2)。化合物1和2为首次从人参根中分离得到的新化合物，分别命名为丙二酰基人参皂苷-Ra1(malonyl ginsenoside Ra1)和丙二酰基人参皂苷-Ra2(malonyl ginsenoside Ra2)。

关键词：人参丙二酰基人参皂苷-Ra 丙二酰基人参皂苷-Ra 结构鉴定