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植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究——Ⅲ.高粱叶片PEP羧化酶的多构象状态

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植物生理与分子生物学 1980年第4期 399-406页

作者：施教耐吴敏贤查静娟中国科学院上海植物生理研究所

应用NEM对酶的化学修饰技术,报导了半胱氨酸残基与高粱叶片的PEP羧化酶催化功能的关系。结果表明,NEM修饰使PEP羧化酶活性丧失。酶的失活速度表现为拟一级反应动力学特性。随NEM浓度的增加酶的失活速度加快。不同效应剂对酶的NEM失活具... 详细信息

应用NEM对酶的化学修饰技术,报导了半胱氨酸残基与高粱叶片的PEP羧化酶催化功能的关系。结果表明,NEM修饰使PEP羧化酶活性丧失。酶的失活速度表现为拟一级反应动力学特性。随NEM浓度的增加酶的失活速度加快。不同效应剂对酶的NEM失活具不同影响。油酸和MgCl2促进酶的失活,G6P、甘氨酸和苹果酸各具有不同程度的保护作用。以P0.5值来比较G6P和甘氨酸的保护效果,其值各为4.17mM和3.44mM。而当这两种效应剂以等量浓度同时存在时,P0.5值下降为0.06mM,表现出它们的协同保护作用。从复合效应剂对酶的热失活速度和最大反应速度(Vmax)的影响亦可看出这种协同作用的存在。上述两方面的结果表明G6P和甘氨酸同时存在时诱发的酶的构象状态与它们分别存在时诱发的构象状态各不相同。根据这些结果提出了高粱叶片的PEP羧化酶可能存在的多构象状态模型,并对其生理意义进行了讨论。

关键词：失活保护作用 PEP 构象高粱蜀秫变构效应剂甘氨酸神经递体叶片调节酶植物羧化酶

温度、pH及效应剂对高粱PEP羧化酶活性的协同作用

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植物生理与分子生物学 1988年第3期 257-262页

作者：王晨李斌查静娟施教耐上海 200032 中国科学院上海植物生理研究所中国科学院上海植物生理研究所西安 710069 西北大学生物系

纯化的高粱PEP羧化酶活性随pH升高(pH6.6～8.0)而增大。在G6P和Mal存在下,酶活性仍有随pH升高而增大的趋势,但G6P对酶的激活百分率和Mal的抑制百分率随pH升高而降低。高粱PEP羧化酶活性的最适温度高于40℃、酶的催化效率(Vmax/Km)随温... 详细信息

纯化的高粱PEP羧化酶活性随pH升高(pH6.6～8.0)而增大。在G6P和Mal存在下,酶活性仍有随pH升高而增大的趋势,但G6P对酶的激活百分率和Mal的抑制百分率随pH升高而降低。高粱PEP羧化酶活性的最适温度高于40℃、酶的催化效率(Vmax/Km)随温度升高而增大。高温下,反应激活能降低,Mal对酶活性抑制百分率亦随温度升高而下降,I0.5值增大,Mal增大Km(PEP)的效应变小。

关键词： PEP羧化酶温度 pH 效应剂

高粱叶片磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的分离和纯化

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植物生理与分子生物学 1983年第1期 23-30页

作者：查静娟吴敏贤施教耐中国科学院上海植物生理研究所

借硫酸铵分部沉淀、分段抽提和热处理并进一步通过DEAE-纤维素、DEAE-Sephadex和羟基磷灰石等柱层析从高粱叶片中分离得到纯化约74倍的PEP羧化酶制剂。纯化的酶在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单带;并表明达到超离心均一。免疫双扩散试验... 详细信息

借硫酸铵分部沉淀、分段抽提和热处理并进一步通过DEAE-纤维素、DEAE-Sephadex和羟基磷灰石等柱层析从高粱叶片中分离得到纯化约74倍的PEP羧化酶制剂。纯化的酶在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈单带;并表明达到超离心均一。免疫双扩散试验结果显示无RuBP羧化酶蛋白的污染。分子量测定表明酶的分子量为380,000 daltom并由4个相同的亚基组成。

关键词： PEP 超离心酶制剂消化药高粱叶片

植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究——Ⅱ.高粱叶片PEP羧化酶的代谢物调节特性和油酸抑制效应

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植物生理与分子生物学 1980年第1期 37-46页

作者：吴敏贤查静娟施教耐中国科学院上海植物生理研究所

本文报导高粱叶片的PEP羧化酶与一些代谢物相互作用的动力学特性。MgCl2对不同PEP羧化酶同工酶表现程度不同的负协同性,Hill系数分别为0`86(PC Ⅰ)和0.47(PCⅡ)。PEP的饱和曲线呈S型。Hill系数为2.4,表现为正协同性。在不同浓度的G6P存... 详细信息

本文报导高粱叶片的PEP羧化酶与一些代谢物相互作用的动力学特性。MgCl2对不同PEP羧化酶同工酶表现程度不同的负协同性,Hill系数分别为0`86(PC Ⅰ)和0.47(PCⅡ)。PEP的饱和曲线呈S型。Hill系数为2.4,表现为正协同性。在不同浓度的G6P存在下,曲线的S型特性消失,Hill系数下降至1。而在不同浓度甘氨酸存在下负协同程度逐步增强,Hill系数为0.72。测定不同浓度G6P对酶活化程度的影响结果表明高浓度G6P(10 mM以上)活化程度反而下降,同时加入低浓度的甘氨酸(0.1～5 mM)能减缓高浓度G6P活化作用下降的程度。上述结果表明Mg++和PEP不仅作为底物或辅因子参与反应而且以同位协同的方式调节酶构象的变化,G6P和gly活化酶的作用类型是不同的。低浓度油酸(5～50 μM)对酶有强烈的抑制效应。高浓度Mg++不能解除其对酶的抑制。不同材料的酶对油酸反应不同。使高梁叶片PC Ⅰ活性完全抑制的油酸浓度(100 μM),对PCⅡ和小麦的PEP羧化酶活性几乎没有多大影响,表明油酸对高梁光合型PEP羧化酶的选择性抑制与Mg++的螯合作用无关。酶先后与Mg++或油酸预保温试验结果表明油酸可能作用于Mg++在酶蛋白上的调节位置。

关键词：抑制效应 PEP 油酸十八碳烯--酸十八碳烯酸高粱蜀秫代谢物代谢产物叶片植物调节特性羧化酶

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深切怀念夏叔芳同志

植物生理学报 2003年第3期39卷 301-301页

作者：施教耐沈允钢中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所上海200032

2003年5月10日，一生从事植物生物化学研究的夏叔芳同志因病不幸逝世，我们深感非痛。

关键词：同志植物生理研究所红豆草驴食豆豆科牧草大豆叶片植物生物化学植物化学

植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究——Ⅶ.PEP羧化酶必需赖氨酸残基的化学修饰

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 1982年第4期 15-22页

作者：吴敏贤查静娟施教耐中国科学院上海植物生理研究所

本文报道纯化的高粱叶片PEP 羧化酶经氨基修饰剂TNBS 和PLP 的修饰迅速失活。酶的TNBS 失活与保温时间和抑制剂浓度呈函数关系并表现为拟一级反应的特性。动力学资料表明酶仅被1分子TNBS 修饰即失活。TNBS 修饰酶的吸收光谱特性表明被... 详细信息

本文报道纯化的高粱叶片PEP 羧化酶经氨基修饰剂TNBS 和PLP 的修饰迅速失活。酶的TNBS 失活与保温时间和抑制剂浓度呈函数关系并表现为拟一级反应的特性。动力学资料表明酶仅被1分子TNBS 修饰即失活。TNBS 修饰酶的吸收光谱特性表明被修饰的是酶蛋白的赖氨酸残基。底物(PEP)和效应剂(G6P)保护酶免被TNBS 失活。计算G6P 和酶的解离常数K-2.39×10M。酶的其他反应组分HCO~-和MgCl单独存在时均不影响TNBS 对酶的失活作用。在被TNBS 修饰过程中还导致酶对G6P 迅速脱敏,同时却保持酶对甘氨酸的敏感性。

关键词： TNBS PEP 残基保护效应赖氨酸二氨基己酸失活化学修饰植物羧化酶

玉米叶片依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶两种分子型动力学特性的研究

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植物生理与分子生物学 1986年第4期 342-354页

作者：吴敏贤查静娟施教耐中国科学院上海植物生理研究所

从玉米叶片中部分纯化了依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PPi-PFK),对果糖2,6-二磷酸具有很高的敏感性(Ka≈15nmol/L)。纯化过程中酶的生糖方向活性对酵解方向活性的比值逐渐增加。F2,6-P2的参与使这一比值下降,并且解除高浓度PPi对酶FBP形成... 详细信息

从玉米叶片中部分纯化了依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶(PPi-PFK),对果糖2,6-二磷酸具有很高的敏感性(Ka≈15nmol/L)。纯化过程中酶的生糖方向活性对酵解方向活性的比值逐渐增加。F2,6-P2的参与使这一比值下降,并且解除高浓度PPi对酶FBP形成活性的抑制。用胰蛋白酶限制酶解,90min使80％酶的酵解方向活性丧失而仍然保持几乎全部的酶的生糖方向活性。胰蛋白酶修饰的酶的动力学结果表明F6P饱和曲线呈明显S型而且Vmax大大下降。在F2,6-P2存在下修饰酶的Km(F6P)值比天然酶约大4倍。酶的生糖方向活性动力学特性的比较说明天然酶和胰蛋白酶修饰酶几乎具有相同的催化能力和底物(F6P)亲合力。实验支持植物PPi-PFK存在两种可以相互转化的酶分子型的调节酶的活性和作用方向的模型。

关键词：玉米依赖焦磷酸的磷酸果糖激酶果糖2 6-二磷酸糖酵解生糖作用限制性蛋白酶酶解

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探讨运转着的光合机构

植物生理与分子生物学 1979年第3期 295-317页

作者：殷宏章沈允钢王天铎施教耐中国科学院上海植物生理研究所光合室

一、引言植物光合作用是地球上唯一在大规模地把太阳能转为化学能、把无机物变成有机物,并且从水中释放出氧气的过程。它和地球面貌的改变、生命的起源及演化、人类的生产及生活都有非常紧密的联系。因此,光合作用问题无论在自然科学... 详细信息

一、引言植物光合作用是地球上唯一在大规模地把太阳能转为化学能、把无机物变成有机物,并且从水中释放出氧气的过程。它和地球面貌的改变、生命的起源及演化、人类的生产及生活都有非常紧密的联系。因此,光合作用问题无论在自然科学的基本理论探索上或者在生产实践许多方面的广泛应用中都具有十分重大的意义。

关键词：光合作用速率电子传递循环光合磷酸化沈允钢金霉素氯四环素光能利用质体叶绿体殷宏章叶片光合机构

植物磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶的研究——Ⅰ.PEP羧化酶同功酶的分离和变构特性的比较

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植物生理与分子生物学 1979年第3期 225-235页

作者：施教耐吴敏贤查静娟中国科学院上海植物生理研究所

本文报导高梁(C4植物)和小麦(C3)植物绿色和黄化叶片中PEP羧化酶的一些特性的比较研究。结果表明不同材料叶片的PEP羧化酶对一些代谢物的反应不同。高梁绿色叶片的PEP羧化酶为G6P、Gly和FDP所激活,为油酸和柠檬酸所抑制。G6P、Gly和FDP... 详细信息

本文报导高梁(C4植物)和小麦(C3)植物绿色和黄化叶片中PEP羧化酶的一些特性的比较研究。结果表明不同材料叶片的PEP羧化酶对一些代谢物的反应不同。高梁绿色叶片的PEP羧化酶为G6P、Gly和FDP所激活,为油酸和柠檬酸所抑制。G6P、Gly和FDP对小麦叶片(绿色和黄化叶)、高粱黄化叶片的PEP羧化酶则均无激活作用,油酸和柠檬酸的抑制效应也消失或者下降。比较这些不同来源的PEP羧化酶在DEAE——纤维素柱层析的结果表明它们具有不同的离子特性。在高粱绿色叶片中分得两种具有不同物理学和动力学特性的PEP羧化酶同功酶(PCⅠ;PCⅡ)。它们的Km(PEP)值各为1.66毫克分子和0.181毫克分子。PCⅡ对G6P的反应较迟钝。从NaCl洗脱梯度、聚丙烯酰胺凝胶电泳和对变构效应剂的反应来看,PCⅡ的一些特性接近于小麦的PE羧化酶。

关键词： PEP 高粱蜀秫黄化变构效应剂 PCI 同功酶植物羧化酶