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长链非编码RNA LINC01116通过AGO1调控食管鳞癌细胞迁移和侵袭

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长链非编码RNA LINC01116通过AGO1调控食管鳞癌细胞迁移和侵袭

作者：方馨东南大学

学位级别：硕士

研究目的食管癌作为世界常见的恶性肿瘤之一,由于缺乏特异的早期症状与有效的早期诊断方法,发病率和死亡率均位居世界前列。尽管近年来的早期筛查和检测计划使得年龄标准化死亡率有所下降,但随着时间的推移,有效治疗机会的减少,食管癌... 详细信息

研究目的食管癌作为世界常见的恶性肿瘤之一,由于缺乏特异的早期症状与有效的早期诊断方法,发病率和死亡率均位居世界前列。尽管近年来的早期筛查和检测计划使得年龄标准化死亡率有所下降,但随着时间的推移,有效治疗机会的减少,食管癌仍然在全球最常见的癌症相关死亡中排名第六。lncRNA广泛参与染色体沉默、染色质修饰、转录激活与沉默等多种重要调控过程。就肿瘤而言,已有多项研究报道异常的lncRNA表达水平和功能影响肿瘤细胞的增殖、凋亡、侵袭、耐药等生物学特性,进而调控包括食管鳞状细胞癌（OSCC）在内的多种肿瘤的发生发展,因此对肿瘤的诊断、预后评估及靶向治疗等方面有一定的参考价值。LINC01116作为一个基因间lncRNA,被报道参与肺癌、骨肉瘤、胶质瘤、前列腺癌、乳腺癌等多种肿瘤的发生发展,然而LINC01116在食管鳞癌进展中的具体作用并未见有明确报道。AGO1是哺乳动物Argonaute蛋白家族的成员之一,也是RNA干扰的效应器——RNA诱导沉默复合体的重要组成部分。多项研究报道过AGO家族蛋白与结直肠癌、胰腺癌、肝癌等肿瘤间的联系,但这一领域在食管鳞癌研究中尚缺乏足够的重视。本研究立足于OSCC测序数据与数据库信息,探究LINC01116在OSCC体内外生物学行为中的作用,并结合公共数据库数据分析其表达水平及其与临床参数的关系;同时采用分子生物学研究方法鉴定其与AGO1的靶向调控关系并探究AGO1在OSCC恶性生物学行为中的具体作用,为OSCC早期诊断寻找潜在的生物标志物,并为OSCC分子靶向治疗提供新的思路。研究方法1.通过课题组前期测序数据及检索GEO数据库获得人类OSCC lncRNA的表达数据及相应临床信息。癌症基因组图谱数据库（TCGA）相关数据用于后续验证。借助R语言分析LINC01116在OSCC中的表达情况。通过qRT-PCR检测LINC01116在OSCC组织及早期鳞癌组织中的表达及其与常用临床病理参数的相关性。2.通过在OSCC细胞株中siRNA干扰、质粒过表达LINC01116,通过CCK-8实验、克隆形成实验、流式细胞术、Transwell迁移及侵袭实验及western blot来观察其对OSCC体外增殖、凋亡、迁移侵袭和EMT的影响。同时通过慢病毒稳转细胞构建裸鼠皮下移植瘤,以此探究其调控体内OSCC生长的作用,免疫组化检测ki67表达。3.在线数据库预测LINC01116亚细胞定位,核质分离实验进行验证。借助多种在线数据库预测LINC01116的靶标分子AGO1及其与AGO1相互作用的作用位点。双荧光素酶报告基因实验验证结合关系。qRT-PCR及western blot检测LINC01116表达水平改变后AGO1的表达水平改变。4.在线数据库及qRT-PCR检测AGO1在OSCC组织中的表达。siRNA干扰AGO1,通过CCK-8实验、克隆形成实验、流式细胞术、Transwell迁移及侵袭实验及western blot来观察其对OSCC体外增殖、凋亡、迁移侵袭和EMT的影响,另一方面免疫组化检测OSCC皮下瘤中AGO1的表达。***富集分析LINC01116相关通路。研究结果1.本研究通过4对OSCC和正常食管组织的测序检出133个差异lncRNA（|logFC|>1,p1,p<0.05有统计学意义）。Venn图筛选分析表明LINC01116和DLEU1均上调,13个lncRNA均下调。qRT-PCR验证LINC01116在OSCC手术标本（p=0.0191）和内镜下粘膜剥离术得到的早期鳞癌标本（p=0.0266）中均显著升高,且其表达水平与食管鳞癌患者的肿瘤分化程度（p=0.034）与T分期（p=0.036）明显相关。***-8实验提示siRNA干扰LINC01116显著抑制OSCC细胞的增殖,从48 h起开始有统计学差异（p<0.01）,质粒过表达LINC01116显著促进OSCC细胞的增殖,从72 h起开始有统计学差异（p<0.05）。克隆形成实验提示干扰LINC01116明显降低OSCC细胞形成的克隆数量（p<0.01）,而过表达LINC01116则增加克隆形成数量（p<0.05）。流式细胞术显示与对照组相比,干扰LINC01116的OSCC细胞凋亡率显著上升（p<0.05）,过表达LINC01116组凋亡率则显著下降（p<0.05）。Transwell迁移及侵袭实验验证了敲低LINC01116显著降低OSCC细胞侵袭（p<0.05）及迁移（p<0.05）能力,而过表达LINC01116

关键词：食管鳞癌长链非编码RNA LINC01116 AGO1

结合蛋白质工程和代谢工程策略提高酵母芳樟醇产量

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结合蛋白质工程和代谢工程策略提高酵母芳樟醇产量

作者：方馨扬州大学

学位级别：硕士

芳樟醇是来源于植物的高价值单萜,在香水、医药和化妆品中有着广泛的应用。由于现有的植物提取和化学合成法均存在一定的局限,绿色、高效的生物合成法成为一种有吸引力的替代方法。然而在微生物合成芳樟醇等单萜类物质中,酶活性低、前... 详细信息

芳樟醇是来源于植物的高价值单萜,在香水、医药和化妆品中有着广泛的应用。由于现有的植物提取和化学合成法均存在一定的局限,绿色、高效的生物合成法成为一种有吸引力的替代方法。然而在微生物合成芳樟醇等单萜类物质中,酶活性低、前体不足以及单萜对细胞的毒性是制约单萜产量的重要因素。在本研究中,通过对关键酶改造、代谢途径调控以及底盘细胞耐受性研究,以提高酵母菌株芳樟醇的产量。首先,我们对芳樟醇合成酶(t670McLISM)进行理性设计,通过与底物牻牛儿基焦磷酸(GPP)对接,分析酶与底物复合体的结构,选取了结合口袋及入口处的氨基酸残基进行改造。研究结果发现,t670McLISMF447E突变体改变了在底物结合口袋入口处的疏水性,t67OMcLISMF447A突变体减小了在底物结合口袋入口处的空间位阻,从而成功地提高了其对GPP的催化效率,使芳樟醇的产量分别增加了 2.2倍和1.9倍。进一步将较优的t670McLISMF447E突变体引入到课题组前期构建的有较高芳樟醇产量的YLin-10和YLin-12菌株中,发现芳樟醇的产量分别提高了 80%和40%。在相对高产的YLin-12菌株中,引入t670McLISMF447E突变体,芳樟醇产量的增幅有所下降,猜测可能是由于前体物质不足所导致的。考虑到过氧化物酶体中含有充足的乙酰辅酶A,因此,为了提高前体物质供应,我们进一步通过细胞质和过氧化物酶体双重调控来促进酿酒酵母中芳樟醇的合成。首先,采用CRISPR/Cas9基因编辑技术,将整个MVA途径基因、ERG20F96W/N127W和SKIK～t67OMcLISMF447E依次整合到YLin-17基因组中,构建了 YLin-PC-01菌株,摇瓶产量达219.1 mg/L。然而,与出发菌株YLin-17相比,其生物量下降了 33%。由于酿酒酵母二倍体菌株更具鲁棒性,我们将菌株YLin-PC-01与YLin114-C2交配构建了原营养型的二倍体菌株YLin-DiPC-03,与YLin-PC-01相比,生物量提高了 75%,并在摇瓶中积累了 215.2 mg/L芳樟醇。进一步在5 L发酵罐中进行补料分批发酵,产生了 2.6 g/L芳樟醇,这是迄今为止文献中报道的产量最高的酵母菌株。为了改善菌株对芳樟醇的耐受性以提高其产量,进一步以出发菌株BY4741为研究对象,通过实验室适应性传代驯化培养,筛选出了芳樟醇耐受性提高的酵母突变株ScM2和ScM6,并对突变株进行基因组重测序,发现这4个基因YHR007CG466R、YBR074WT838N、YBR172CK404Q和YMR275CF384C的突变对芳樟醇耐受性的提高具有重要影响。本研究通过限速酶改造和代谢途径空间调控成功构建了高产芳樟醇的酿酒酵母菌株,并通过菌株耐受性改造有望进一步提高芳樟醇产量。本研究为芳樟醇的工业生产奠定了基础,也为其他单萜类物质的生物合成提供了参考。

关键词：酿酒酵母芳樟醇蛋白理性设计过氧化物酶体耐受性

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面向形变图像的模板匹配算法研究

面向形变图像的模板匹配算法研究

作者：方馨华中科技大学

学位级别：硕士

模板匹配是在空间上下文中对两幅图像进行配准的方法,其作为一种关键技术已经广泛应用于目标自主识别与跟踪等多个领域。由于实际场景中的图像往往含有各种形变,以及传统方法通常采用逐像素遍历搜索的匹配策略等原因,算法经常无法同时... 详细信息

模板匹配是在空间上下文中对两幅图像进行配准的方法,其作为一种关键技术已经广泛应用于目标自主识别与跟踪等多个领域。由于实际场景中的图像往往含有各种形变,以及传统方法通常采用逐像素遍历搜索的匹配策略等原因,算法经常无法同时满足精度和速度要求。因此,本文围绕各种场景下的形变图像匹配算法准确性和快速性的问题,开展了以下研究:针对随机搜索方式易陷入局部最优解和二维仿射变换空间遍历搜索效率较低的问题,本文提出了具有自动寻优特性的异型粒子寻优快速匹配算法(简记为MPO)。该算法基于仿射变换模型,将随机性和变异机制结合以提升算法的全局搜索能力,并且采用离散采样机制减少计算量以提高匹配速度。同时,针对实际成像平台提供的姿态参数存在偏差的问题,本文提出了有偏姿态参数透视变换匹配算法(简记为BPT)。该算法基于透视变换模型,利用MPO算法中自动寻优的思想来修正有偏参数。实验证明,MPO算法具有较好的匹配性能,BPT算法能在迭代过程中有效消除姿态偏差。软件仿真测试结果也表明两种算法能满足实时性工程要求,可以很好地应用于现实匹配场景中。针对参数化模板匹配算法对复杂形变图像匹配能力不足的问题,本文在深度学习理论基础上,提出基于反卷积的模板匹配算法(简记DM-Net),进一步扩大了模板匹配算法的适用范围。DM-Net结合孪生网络和双通道网络结构的特点,通过改进网络结构和损失函数来提高匹配精度,并加入反卷积网络用于图像编码来加快匹配速度。同时,本文还分析了各个结构改动对网络性能的影响,测试了该网络在标准数据集和成像平台图像序列上的匹配效果,并将其与其他匹配网络模型进行比较。实验结果表明,DM-Net具有较强的正样本灵敏度感知能力和负样本分辨能力。

关键词：模板匹配形变图像匹配算法随机搜索自动寻优变异机制反卷积网络

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H型平台直驱伺服系统离散积分滑模平滑控制

电机与控制学报 2022年第6期26卷 101-111页

作者：方馨王丽梅张康沈阳工业大学电气工程学院辽宁沈阳110870

针对直线电机驱动H型平台中的直驱伺服系统易受负载扰动和机械耦合等因素影响的问题,提出一种H型平台直驱伺服系统离散积分滑模平滑位置控制方法。首先,研究建立以动子位置和速度为状态变量的含有机械耦合特性的直驱伺服系统离散数学模... 详细信息

针对直线电机驱动H型平台中的直驱伺服系统易受负载扰动和机械耦合等因素影响的问题,提出一种H型平台直驱伺服系统离散积分滑模平滑位置控制方法。首先,研究建立以动子位置和速度为状态变量的含有机械耦合特性的直驱伺服系统离散数学模型;然后,设计离散积分滑模位置控制器,以减小外部扰动对系统影响,提高系统跟踪精度;同时,为削弱控制律中符号函数引起的抖振现象,设计一种平滑饱和函数代替传统符号函数,并通过仿真给出饱和函数曲线,定量分析证明平滑饱和函数的优越性。最后对该方法进行仿真与实验验证,并给出控制系统关键部件的实现方案,结果表明所提方法不仅提高了系统位置跟踪精度,削弱抖振程度,而且能够增强系统对负载扰动的鲁棒性。

关键词： H型平台直线电机驱动伺服系统离散积分滑模控制平滑饱和函数抖振机械耦合

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冯雪峰外调材料(上)

新文学史料 2013年第1期 4-33页

作者：冯烈方馨未

杜鹏程，在我看他这稿子之前，我不认识，也没有听人说过，也不知道有这部稿子的事情。1954年初（或1953年底），这部稿子送到我处（记不起是送到人民文学出版社还是送作协转交我，还是直接送到我住处，总之送稿来时我未见到过杜鹏程）... 详细信息

杜鹏程，在我看他这稿子之前，我不认识，也没有听人说过，也不知道有这部稿子的事情。1954年初（或1953年底），这部稿子送到我处（记不起是送到人民文学出版社还是送作协转交我，还是直接送到我住处，总之送稿来时我未见到过杜鹏程），附有杜鹏程一封短信（信我没有保存），说是柯仲平叫他送给我看看的。

关键词：冯雪峰人民文学出版社材料 1954年杜鹏程稿子柯仲平作协

早春先生与冯雪峰的跨世纪情谊——怀念陈早春先生

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新文学史料 2019年第3期 32-38页

作者：冯烈方馨未不详

陈早春先生离开我们有半年了。他生前写过许多纪念朋友和同事的文章,而今,却是人们在纪念他。2018年7月6日在八宝山兰厅举行的陈早春先生追悼会上,他的儿子陈埙吹握着我们的手说:'谢谢你们在我父亲晚年经常去看望他,陪伴他,给了他很多... 详细信息

陈早春先生离开我们有半年了。他生前写过许多纪念朋友和同事的文章,而今,却是人们在纪念他。2018年7月6日在八宝山兰厅举行的陈早春先生追悼会上,他的儿子陈埙吹握着我们的手说:'谢谢你们在我父亲晚年经常去看望他,陪伴他,给了他很多安慰。'而让我们深感惭愧的是,这几年实在是没少打扰陈先生。

关键词：冯雪峰人民文学出版社陈早春韦君宜

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小学教师教学专长的发展状况及影响因素研究

小学教师教学专长的发展状况及影响因素研究

作者：方馨东北师范大学

学位级别：硕士

教学专长(Teaching Expertise)是教师整合各类专业知识与教育观念,灵活有效进行教学的综合能力,是教师专业成长与发展的重要追求。20世纪60年代美国学者詹姆斯·科尔曼(Coleman,J.S.)在《关于教育机会均等》的报告中首次提出并开始关注... 详细信息

教学专长(Teaching Expertise)是教师整合各类专业知识与教育观念,灵活有效进行教学的综合能力,是教师专业成长与发展的重要追求。20世纪60年代美国学者詹姆斯·科尔曼(Coleman,J.S.)在《关于教育机会均等》的报告中首次提出并开始关注教师教学专长,以解决有效教师和有效教学的问题。关于教师教学专长的内涵,学者们有不同的理解,但较为一致的观念认为,教师教学专长是指教师在具体教学情境中,能够灵活地运用知识和经验进行线索梳理,精准地分析判断把握问题的关键,提出并实施可操作性措施,从而进行有效教学的一种综合能力。本研究以此涵义为基础,从教师的知识理解与迁移能力、教学设计能力、课堂教学策略与反思能力和师生交往等四个方面来探究我国小学教师教学专长的发展状况及其影响因素。本研究研制了教师教学专长调查工具,从知识理解与迁移、教学设计、课堂教学及反思和师生交往四个维度来编制教师教学专长量表及影响因素问卷,经过检验,量表与问卷均具有较高的信效度。本研究以C市和T市小学教师为研究对象,本研究采用线上和线下同步发放问卷,共发放500份,回收后剔除无效问卷,获得有效问卷379份,有效率为75.8%。研究发现:(1)小学教师教学专长具有多维性、阶段性、通用性的特征;(2)小学教师教学专长在不同维度上存在差异,其中教学设计维度上发展好且内部一致性较高,知识理解与迁移和课堂教学与反思上呈明显的由低至高阶梯状发展,而师生关系这一维度上不存在显著差异;(3)处于三种不同专业发展阶段的教师在教学水平上存在显著差异,其中新手教师水平最低且结构不均衡,熟手教师水平较好但结构不完善,能手教师高水平与结构良好共存;(4)教学专长的影响因素主要包括在职教育、情绪管控与表达、观摩课与公开课、职业动机和教学反思活动。研究建议:应充分重视教学专长在教师专业发展中的作用,进行定期测试并有针对性地进行培养,充分发挥情绪和动机等非认知因素的作用,改革入职教育和教师研讨等教师教育形式。

关键词：教师专业发展教师教学专长教学能力

一种内容中心网络中的热区控制及内容调度缓存算法

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电子学报 2017年第5期45卷 1182-1188页

作者：方馨蔚陈庶樵江逸茗任泽荣国家数字交换系统工程技术研究中心河南郑州450002

针对内容中心网络中同质化缓存造成的节点负载不均和存储资源无法有效利用的问题,提出一种热区控制及内容调度缓存算法.在内容请求时,根据节点介数与节点访问度综合判断节点热度,筛选出负载过重节点;缓存决策时,以流行度为依据将内容调... 详细信息

针对内容中心网络中同质化缓存造成的节点负载不均和存储资源无法有效利用的问题,提出一种热区控制及内容调度缓存算法.在内容请求时,根据节点介数与节点访问度综合判断节点热度,筛选出负载过重节点;缓存决策时,以流行度为依据将内容调度至空闲邻居节点,并设置生命期控制机制,从而达到分散请求、消除热区的目的.仿真结果表明该算法减少了请求时延与路由跳数,在提高缓存命中率的同时,有效改善了负载在节点上分布的均衡性.

关键词：内容中心网络协作缓存负载均衡内容调度

外部金融生态环境、财务柔性与科技型企业研发投入

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财会通讯（下） 2018年第12期 108-113页

作者：狄方馨河套学院经济管理系

本文选择2008-2016年创业板上市企业为研究对象,对科技型企业研发投入的影响因素进行分析,研究发现:外部金融生态环境的不断优化有助于科技型企业研发投入强度的增强;科技型企业保持一定程度的财务柔性促进了其研发投入强度的提升;外部... 详细信息

本文选择2008-2016年创业板上市企业为研究对象,对科技型企业研发投入的影响因素进行分析,研究发现:外部金融生态环境的不断优化有助于科技型企业研发投入强度的增强;科技型企业保持一定程度的财务柔性促进了其研发投入强度的提升;外部金融生态环境在于科技型企业研发投入强度的影响中对财务柔性起到一定程度的挤出效应,显著削弱了财务柔性与研发投入强度之间的相关性。

关键词：外部金融生态环境财务柔性研发投入科技型企业