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双侧卵巢切除大鼠下丘脑⁃垂体的转录组学特征及二仙汤的调节效应

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上海中医药杂志 2024年第7期58卷 65-76页

作者：潘志强谢海纳曹琳娜刘小美卢文丽贾冬威彭佩克方肇勤上海中医药大学中医学院上海201203

目的利用RNA测序技术研究围绝经期综合征模型大鼠下丘脑-垂体的转录组学特征及二仙汤的作用。方法以大鼠双侧卵巢切除术模拟围绝经期综合征雌激素骤然下降状态。48只雌性SD大鼠,随机取假手术组12只,其余36只大鼠双侧卵巢切除术后再随机... 详细信息

目的利用RNA测序技术研究围绝经期综合征模型大鼠下丘脑-垂体的转录组学特征及二仙汤的作用。方法以大鼠双侧卵巢切除术模拟围绝经期综合征雌激素骤然下降状态。48只雌性SD大鼠,随机取假手术组12只,其余36只大鼠双侧卵巢切除术后再随机分为双侧卵巢切除组、17β-雌二醇组、二仙汤组,每组12只。大鼠双侧卵巢切除术后第7天,17β-雌二醇组灌胃17β-雌二醇(0.1 mg·kg^(-1)·d^(-1)),二仙汤组灌胃二仙汤提取液(8 g·kg^(-1)·d^(-1)),每日灌胃1次,持续6周;假手术组与双侧卵巢切除组均灌胃等量的灭菌水。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清雌二醇(E2)、促性腺激素释放激素(GnRH)与β-内啡肽(β-EP)含量。采用mRNA转录组测序技术检测下丘脑与垂体,根据FPKM值与edgeR算法筛选组间差异表达基因,进行基因本体(GO)与京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,并以实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)法验证下丘脑雌激素受体α(Esr1)与线粒体编码的NADH脱氢酶亚基4(Mt-nd4)、垂体钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱα(Camk2a)与甲状腺激素受体α(Thra)共4个差异表达基因。结果①与假手术组比较,双侧卵巢切除组大鼠血清E2与β-EP显著下降(P<0.05);与双侧卵巢切除组比较,二仙汤组E2与β-EP水平显著升高(P<0.05)。②大鼠下丘脑与垂体可检测基因数量均为30957个。③与假手术组比较,双侧卵巢切除大鼠下丘脑上调基因135个、下调基因348个,垂体上调基因409个、下调基因82个。与双侧卵巢切除组比较,17β-雌二醇治疗后大鼠下丘脑上调基因126个、下调基因225个,垂体上调基因93个、下调基因273个;二仙汤治疗后大鼠下丘脑上调基因91个、下调基因92个,垂体上调基因390个、下调基因376个。④GO分析表明,下丘脑与垂体差异表达基因富集于细胞过程、生物学调控、代谢过程等。⑤KEGG呈现了下丘脑与垂体的差异表达基因富集前30个信号通路,其中二仙汤调节尼古丁成瘾、氮代谢、突触囊泡循环等信号通路。⑥RT-qPCR所验证的二仙汤显著调节的Esr1、Mt-nd4、Camk2a基因表达变化与转录测序结果一致。结论双侧卵巢切除大鼠下丘脑与垂体的神经内分泌系统处于紊乱状态,17β-雌二醇侧重于调节下丘脑基因,二仙汤对垂体调节更广、更深。

关键词：围绝经期综合征二仙汤下丘脑垂体 RNA测序作用机制中药研究

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论方肇勤对中医辨证论治学术的探索

中国中医基础医学杂志 2021年第4期27卷 541-544页

作者：潘志强方肇勤上海中医药大学基础医学院上海201203

本文介绍方肇勤在中医辨证论治理论方面的学术成果。从辨证论治理论研究及其计算机程序化模拟研究、辨证论治动物实验方法学研究、肝癌同病异证证候特征及其物质基础研究、中药复方及其拆方后不同治法的研究予以简要梳理。方肇勤在学术... 详细信息

本文介绍方肇勤在中医辨证论治理论方面的学术成果。从辨证论治理论研究及其计算机程序化模拟研究、辨证论治动物实验方法学研究、肝癌同病异证证候特征及其物质基础研究、中药复方及其拆方后不同治法的研究予以简要梳理。方肇勤在学术上的突出成就体现在辨证中提出了“新值”和“潜值”“显值”等概念,创建了大鼠/小鼠辨证论治实验方法学,率先提出与践行按照不同治法拆方的思路研究复方药效,领先开展大规模临床病例的证候流行病学调查研究,同步从神经内分泌免疫组织基因表达谱全方位探索证候物质基础,所取得的研究成果丰富与发展了当代中医基础理论。

关键词：中医基础理论辨证论治证候物质基础同病异证方肇勤

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方肇勤治疗原发性肝癌撷萃

中国中医基础医学杂志 2014年第1期20卷 83-83,108页

作者：任红艳方肇勤上海中医药大学上海201203

目的:探讨方肇勤教授有关原发性肝癌中医药辨证论治的经验。指出临床所见肝癌患者大多具有长期慢性的肝脏损害,用药不慎会加重肝脏的损伤,甚至会诱导肝癌细胞恶性增殖;在证候方面肝癌患者主要表现为脾气虚、肝血瘀阻、肝脾不调、肝气郁... 详细信息

目的:探讨方肇勤教授有关原发性肝癌中医药辨证论治的经验。指出临床所见肝癌患者大多具有长期慢性的肝脏损害,用药不慎会加重肝脏的损伤,甚至会诱导肝癌细胞恶性增殖;在证候方面肝癌患者主要表现为脾气虚、肝血瘀阻、肝脾不调、肝气郁结等肝脾同病,因而肝癌的治疗应肝脾同治,以清热解毒、行气活血、健脾益气等立法;顾及肝炎或肝损伤、纤维化及肝癌,同病异治,往往可以达到较好的疗效。用药常用生晒参、党参、太子参、黄芪、白术、六曲、炒谷麦芽、制半夏、茯苓、泽泻、茵陈、枳壳、香附、预知子、陈皮、柴胡、郁金、当归、川芎、丹参、赤芍、桃仁、元胡、半枝莲、白花蛇舌草、山栀、黄芩、炙鳖甲、车前子、泽泻等。

关键词：原发性肝癌证侯辨证论治治法

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副凋亡在肿瘤中的研究进展

中国病理生理杂志 2022年第2期38卷 342-349页

作者：焦肖宁方肇勤卢涛上海中医药大学上海201203

肿瘤是严重危害人类健康的疾病之一,流行病学数据显示,2018年全球约有1810万肿瘤新发病例以及960万肿瘤死亡病例;肿瘤的发病率和死亡率在全球范围内迅速增长,其难治性及危害性使得肿瘤成为全球最重要的生命科学领域之一[1]。细胞死亡方... 详细信息

肿瘤是严重危害人类健康的疾病之一,流行病学数据显示,2018年全球约有1810万肿瘤新发病例以及960万肿瘤死亡病例;肿瘤的发病率和死亡率在全球范围内迅速增长,其难治性及危害性使得肿瘤成为全球最重要的生命科学领域之一[1]。细胞死亡方式的研究对于肿瘤有重要意义,如细胞凋亡的发现对肿瘤细胞的清除及肿瘤治疗学产生了巨大影响,但单一方式的治疗常常伴随耐药性的产生[2-4];与此同时,诱导肿瘤细胞其它死亡形式在临床抗肿瘤治疗中也发挥重要的作用[5]。

关键词：细胞程序性死亡副凋亡内质网应激细胞质空泡化

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辨证论治研发的一些基本学术问题

中国中西医结合杂志 2008年第7期28卷 652-655页

作者：方肇勤上海中医药大学上海201203

辨证论治是中医的特色,也是当代中医药研究与发展的重要领域。本文归纳了辨证论治研发中普遍存在的学术问题,涉及证候与疾病、体质、四诊、辨证论治的关系,疾病、证候及其辨证论治的机制,以及辨证论治与西医学的关系等,提出解决的思路... 详细信息

辨证论治是中医的特色,也是当代中医药研究与发展的重要领域。本文归纳了辨证论治研发中普遍存在的学术问题,涉及证候与疾病、体质、四诊、辨证论治的关系,疾病、证候及其辨证论治的机制,以及辨证论治与西医学的关系等,提出解决的思路与建议。

关键词：辨证论治证候辨证方法技术标准

动态观察顺铂诱发肾精不足证小鼠类固醇激素合成功能异常的研究

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时珍国医国药 2023年第2期34卷 472-477页

作者：农淄心潘志强谢海纳曹琳娜方肇勤上海中医药大学基础医学院上海201203

目的研究顺铂诱发药源性虚证性小鼠类固醇激素合成功能的改变。方法72只雄性ICR小鼠分为对照组32只和顺铂组40只,顺铂组予10mg/kg顺铂腹腔注射,每周1次,共5次(d1、d8、d15、d22、d29)。每次造模后1周各组取8只检测相应指标,以ELISA检测... 详细信息

目的研究顺铂诱发药源性虚证性小鼠类固醇激素合成功能的改变。方法72只雄性ICR小鼠分为对照组32只和顺铂组40只,顺铂组予10mg/kg顺铂腹腔注射,每周1次,共5次(d1、d8、d15、d22、d29)。每次造模后1周各组取8只检测相应指标,以ELISA检测睾酮和皮质酮含量、RT-qPCR检测下丘脑、垂体、肾上腺和睾丸类固醇激素合成酶相关基因表达。Western Blot检测肾上腺StAR、CYP11A1、CYP21A2、CYP11B1;睾丸StAR、CYP11A1、CYP17A1、HSD3B2蛋白表达。结果(1)顺铂给药4次(d28)后显著下降小鼠体重,胸腺与肾脏萎缩,脾肿大。(2)小鼠血清皮质酮在顺铂给药2次(d14)及4次(d28)显著上升,末次(d30)显著下降。血清睾酮含量在给药1次后(d7)明显上升,给药4次和末次(d28、d30)明显下降。(3)随顺铂累积肾上腺皮质束状带明亮细胞增多。(4)随顺铂累积,曲细精管改变、生精细胞紊乱加重,给药4次(d28)后曲细精管内改变显著,支持细胞减少,间质增厚,间质细胞水肿明显。(5)顺铂组肾上腺在给药1次(d7)后Cyp21a1基因表达和CYP11A1蛋白表达上调,但Cyp11b2基因表达下调;给药2次(d14)后Star、Cyp11a1、Cyp11b1、Cyp11b2和Cyp21a1基因表达均下调;给药3次(d21)Cyp11a1和Cyp21a1基因表达下调;给药4次(d28)Cyp11b1基因表达上调。(6)顺铂组睾丸在给药2次(d14)后Star、Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd17b3和Ar基因表达均下调;给药3次(d21)Hsd3b2和Ar基因表达上调;给药4次(d28)Star、Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b2、Hsd17b3和Ar基因表达均显著上调,StAR蛋白表达上调;末次给药(d30)Star、Cyp11a1、Cyp17a1、Hsd3b2、Hsd17b3和Ar基因表达均上调,StAR、CYP11A1和CYP17A1蛋白表达显著增强。(7)顺铂组下丘脑在给药2次(d14)GnRH基因表达增强,给药1次、4次和末次(d7、d28、d30)CRH基因表达均增强。(8)顺铂组垂体在给药1次(d7)Pou1f1基因表达上调而Fshb和Lhb基因表达均下调;给药4次(d28)Pomc基因表达上调。结论顺铂可损害类固醇激素合成的肾上腺皮质轴与睾丸轴,尤其对睾丸各细胞的累积性损害可能是诱发肾精不足证的主要机制。

关键词：顺铂证候药源性证候肾上腺皮质睾丸小鼠

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中医基础理论学科的现状与思考

中国中医基础医学杂志 2014年第8期20卷 1021-1024,1046页

作者：方肇勤上海中医药大学上海201203

针对中医基础理论学科的一些热点问题,联系多年来在该领域的探索和思考对中医基础学科以及中医基础理论学科的定义、范畴、特点、分化等进行了阐述。指出中医基础学科应具有传承和研发两个方向的任务。传承指采用当代社会和自然科学,包... 详细信息

针对中医基础理论学科的一些热点问题,联系多年来在该领域的探索和思考对中医基础学科以及中医基础理论学科的定义、范畴、特点、分化等进行了阐述。指出中医基础学科应具有传承和研发两个方向的任务。传承指采用当代社会和自然科学,包括医学科学所积累的知识、方法、视角对历代代表性古典医籍所涉及的基本理论、概念、不同学术观点等给予深入研究,客观、准确地阐释,用现代汉语表述,古为今用;而研发指针对我国当前对难治病、不治病、常见病及生命和发病机制探索的需求,开展研发工作。在策略建议下选择正确的研究切入点,挺进到医学科学发展的前沿,主动参与国际分工,并且在研究中探索和发展中医基础理论学科的知识和方法。

关键词：中医基础学科中医基础理论学科学科分化学科任务传承研究与发展

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古典中医基础理论研究

α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响

2020年

作者：方肇勤

本书是一部反映我国古典主流中医基础理论学术专著。主要呈现了作者团队对《内经》基本概念和理论，如气、营卫、胃气、真气、宗气、精、神、血、津液、阴阳、五行等开展系统研究的成果；以及对《内经》和历代代表性方书医籍中有关五脏... 详细信息

ISBN: (纸本)9787547848722

本书是一部反映我国古典主流中医基础理论学术专著。主要呈现了作者团队对《内经》基本概念和理论，如气、营卫、胃气、真气、宗气、精、神、血、津液、阴阳、五行等开展系统研究的成果；以及对《内经》和历代代表性方书医籍中有关五脏及其证治的系统研究成果，书目包括《素问》（战国）《灵枢》（战国）《难经》（汉代）、《诸病源候论》（隋代）、《外台秘要》（唐代）、《太平圣惠方》《和剂局方》《圣济总录》（宋代）、《普济方》（明代）、《医宗金鉴》（清代）等，涉及脾、肺、肾、肝、心等五脏理论及相关病因、发病、病机、治则治法、用药，内容全面而丰富。本著刻画了古典主流中医基础理论的学术内容、特点、发展和演变，既可用于《中医基更多...

关键词：中医医学基础研究

来源：汇雅图书（南通市图书馆... 评论

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汇雅图书（南通市图书馆）

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中成药 2022年第4期44卷 1099-1106页

作者：张夜航卢文丽彭佩克方肇勤上海中医药大学基础医学院上海201203

目的探索α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响。方法 MTT法检测细胞存活率,CompuSyn软件获取相互作用指数(CI)并筛选出最佳协同组合。流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋... 详细信息

目的探索α-常春藤皂苷协同雷公藤红素对SMMC7721肝癌细胞增殖和周期的影响。方法 MTT法检测细胞存活率,CompuSyn软件获取相互作用指数(CI)并筛选出最佳协同组合。流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布,Western blot法检测细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2、周期蛋白依赖性激酶(CDKs)和细胞周期蛋白(Cyclins)的表达。结果单用α-常春藤皂苷或雷公藤红素均能抑制细胞增殖,且呈剂量依赖性;作用48 h后,当α-常春藤皂苷质量浓度为10.0μg/mL,雷公藤红素质量浓度为0.30μg/mL时,CI值为0.24,协同效应最佳。在以上质量浓度条件下,协同组早期凋亡率高于其余3组(P0.05);协同组CDK2和CDK4蛋白表达降低(P<0.05);雷公藤红素组和协同组Cyclin D1表达均升高(P<0.05);各给药组Cyclin E1表达均升高(P<0.05)。结论 α-常春藤皂苷协同雷公藤红素抑制SMMC7721细胞增殖效应确切,该效应可能与诱导G_(0)/G_(1)期周期阻滞、G_(1)+S期总比例增加有关,而Cyclin D1可能是参与其中的关键分子。

关键词： α-常春藤皂苷雷公藤红素协同作用肝癌细胞细胞增殖细胞周期 Cyclin D1