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水稻CIPK18对NRT2.2表达调控的研究及多价Bt基因多重PCR检测方法

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水稻CIPK18对NRT2.2表达调控的研究及多价Bt基因多重PCR检测方法

作者：方欣怡武汉大学

学位级别：硕士

水稻既是重要的粮食作物,又是禾本科基因组学和分子生物学研究的模式植物,对其生长发育过程的研究具有重大意义。NO和NH作为水稻的主要氮源,其中40%的N是以NO的形式被吸收。NO除了作为营养元素之外,同时又可以作为信号分子发挥功能,调... 详细信息

水稻既是重要的粮食作物,又是禾本科基因组学和分子生物学研究的模式植物,对其生长发育过程的研究具有重大意义。NO和NH作为水稻的主要氮源,其中40%的N是以NO的形式被吸收。NO除了作为营养元素之外,同时又可以作为信号分子发挥功能,调控植物生长发育的各个阶段。而硝酸盐信号在植物的传导机制涉及到与Ca下游的CBL-CIPK通道,且CIPK作为植物里所特有的一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,此前与该通路相关文献报导多集中在拟南芥中,水稻里的研究相对较少。本实验室前期研究表明CBL1和CIPK18既参与了水稻自身生长发育调控,也参与了硝酸根信号对水稻生长的调控。转录组数据表明Os CBL1的反义抑制突变体植株和Os CIPK18的T-DNA插入突变体植株在不同营养条件下与WT之间的差异表达基因有很多相同,推测CBL1-CIPK18很可能在同一条信号通路上调控水稻生长和对营养状况的响应。为了进一步揭示CBL1-CIPK18信号通路如何调控水稻生长及其对氮素营养的响应,我们采取两种研究策略:一是以CIPK18为诱饵筛选其下游互作蛋白,构建了CIPK18-p GBK和CIPK18-p BT3-STE诱饵载体,分别通过核体系酵母双杂交和基于泛素化的膜体系酵母双杂交进行筛库,寻找及鉴定CIPK18的下游靶蛋白,以此来逐步解析CBL1-CIPK18信号通路的调控机理;二是以基因表达受到CBL1-CIPK18通路调控的PNR标记基因NRT2.2的启动子为诱饵,构建了p NRT2.2-Ab Ai诱饵载体,利用酵母单杂交筛库,筛选鉴定调控NRT2.2表达的转录相关因子,期望找到NRT2.2转录调控与CIPK18之间的关系,用来解析CBL1-CIPK18信号通路如何影响水稻对硝酸盐信号的感知和应答。获得的主要研究结果如下:1.筛选并鉴定了CIPK18的互作蛋白AMPKβ和DUF581。AMPKβ是在酵母中与植物中Sn RK1的同源物,在拟南芥中报导DUF581能与Sn RK1A发生互作,这些结果表明CIPK18可能通过与Sn RK1的相互作用,调控体内能量状态感知。2.筛选到CIPK18的互作蛋白HMGB,同时p NRT2.2为诱饵的酵母单杂交中也筛选到HMGB。在Os CBL1的反义抑制突变体植株和Os CIPK18的T-DNA插入突变体植株中HMGB的表达量都受到抑制。这些结果表明CIPK18可能通过HMGB调控NRT2.2的表达。3.以p NRT2.2为诱饵在酵母单杂交中筛选并鉴定到CCA1蛋白。CCA1基因的表达在Os CBL1的反义抑制突变体植株和Os CIPK18的T-DNA插入突变体植株中也都受到抑制。此外,承担了水稻抗虫转基因育种目标基因检测,研究建立了水稻多个Bt抗虫基因(cry1Ab/Ac、cry2A、cry1C)的简便检测方法。根据三个Bt转基因事件的插入位置,采用多重引物PCR技术,能够利用9条引物,得到6条大小存在明显差异的条带,同时检测三个Bt基因的转基因情况。来源TT51-1的外源基因cry1Ab/Ac插入的阳性、阴性条带大小为937bp、717bp;来源T2A-1的外源基因cry2A插入的阳性、阴性条带大小为603bp、430bp;来源T1C-19的外源基因cry1C插入的阳性、阴性条带大小为497bp、777bp,通过琼脂糖凝胶电泳即可快速进行转Bt基因水稻纯合、杂合、阴性的区分。该方法的建立为利用多价Bt基因进行抗螟虫水稻分子育种提供了一个简便高效的基因检测技术,有助于提高检测效率,加快抗螟虫水稻的育种进程。

关键词：水稻硝酸盐 CIPK18 NRT2.2

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搜索任务中基于听觉工作记忆的注意捕获

心理学进展 2017年第2期7卷 193-198页

作者：方欣怡西南大学心理学院重庆

采用双任务范式,要求被试在保持听觉工作记忆内容的同时完成听觉搜索任务。结果发现,当搜索序列出现与工作记忆内容相同的干扰物(即匹配条件),且匹配干扰物出现在目标之前时,其搜索时间比中性条件下目标出现在同等位置的搜索时间更长。... 详细信息

采用双任务范式,要求被试在保持听觉工作记忆内容的同时完成听觉搜索任务。结果发现,当搜索序列出现与工作记忆内容相同的干扰物(即匹配条件),且匹配干扰物出现在目标之前时,其搜索时间比中性条件下目标出现在同等位置的搜索时间更长。研究表明与视觉工作记忆一样,听觉工作记忆在搜索任务中同样能诱发注意捕获,并为今后此领域听觉通道的研究提供了可用的实验材料和参数。

关键词：工作记忆注意捕获听觉双任务范式

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臭氧暴露对哮喘的影响及作用机制

上海预防医学 2024年第3期36卷 303-310页

作者：方欣怡陈仁杰阚海东徐燕意复旦大学公共卫生学院环境卫生学教研室上海200032

近地面臭氧(O_(3))是一种具有高反应性和强氧化性的气体,被认为是重要的呼吸系统毒物之一。大量的流行病学研究结果提示哮喘患者是O_(3)暴露的易感人群,并且O_(3)暴露与哮喘发病率和死亡率的增加存在显著关联,其潜在机制可能包括氧化应... 详细信息

近地面臭氧(O_(3))是一种具有高反应性和强氧化性的气体,被认为是重要的呼吸系统毒物之一。大量的流行病学研究结果提示哮喘患者是O_(3)暴露的易感人群,并且O_(3)暴露与哮喘发病率和死亡率的增加存在显著关联,其潜在机制可能包括氧化应激、炎症、自主神经损伤和免疫功能紊乱等。本文总结归纳了O_(3)暴露对哮喘的影响及相关机制研究,旨在提高人们对O_(3)污染的重视,并为后续开展O_(3)暴露与哮喘相关研究提供参考。

关键词：臭氧哮喘氧化应激炎症自主神经损伤免疫功能紊乱

多价抗虫水稻外源Bt基因的多引物多重PCR检测方法

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生物技术通报 2019年第12期35卷 175-183页

作者：方欣怡阳菁王井章李阳生武汉大学生命科学学院水稻国家重点实验室

旨在研究多价Bt抗虫转基因水稻的简便有效的检测方法。根据3个Bt转基因事件的插入位置,设计引物,通过多重引物PCR技术,利用9条引物得到6条大小存在明显差异的条带,同时检测3个Bt基因的转基因情况。水稻3个Bt抗虫基因(cry1Ab/Ac、cry2A、... 详细信息

旨在研究多价Bt抗虫转基因水稻的简便有效的检测方法。根据3个Bt转基因事件的插入位置,设计引物,通过多重引物PCR技术,利用9条引物得到6条大小存在明显差异的条带,同时检测3个Bt基因的转基因情况。水稻3个Bt抗虫基因(cry1Ab/Ac、cry2A、cry1C)分别来源TT51-1、T2A-1和T1C-19,其中代表TT51-1事件插入的阳性、阴性条带大小分别为937 bp、718 bp;代表T2A-1事件插入的阳性、阴性条带大小分别为600 bp、434 bp;代表T1C-19事件插入的阳性、阴性条带大小分别为495 bp、792 bp;通过琼脂糖凝胶电泳能快速对转Bt基因插入事件水稻的纯合、杂合、阴性进行检测。该技术克服了多重引物之间可能存在的引物间的相互干扰的技术难度,对不同的PCR试剂有很好的兼容性,可配合水稻DNA的快速提取,迅速对大量选育后代进行分析。该方法的建立为利用多价Bt基因进行抗螟虫水稻分子育种提供了一个简便高效的基因检测技术,有助于提高Bt基因检测效率,加快抗螟虫水稻的育种进程。

关键词： Bt抗性基因转基因多引物多重PCR 分子检测

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微小的幸福

初中生 2024年第2期 51-52页

作者：方欣怡王文渊(指导) 安徽桐城市第二中学不详

冬季一到来,气温就不断下降,变得一天比一天冷,最近更是下起了小雪,似是“柳絮因风起”,四散飞扬,地面和屋顶上都覆盖着一层洁白的雪。天一冷,大家就都不大愿意出门了,特别是在北风呼啸的早晨,街道上一时冷冷清清。

关键词：小雪柳絮四散

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磷化铟量子点材料的制备及应用前景

功能材料 2021年第3期52卷 3043-3049,3066页

作者：袁斌霞方欣怡蔡晓东王道累朱瑞曹盛刘建峰上海电力大学能源与机械工程学院上海200090 广西大学广西有色金属及特色材料加工重点实验室南宁530004

半导体纳米晶具有量子尺寸效应和独特的光学性质,可广泛地应用在光电器件、生物标记、太阳能电池、光催化等方面,因此半导体纳米晶成为越来越多研究者研究的热点。但在诸多的应用限制因素中,高性能的QDs材料(Ⅱ-Ⅵ或Ⅳ-Ⅵ)通常含有镉或... 详细信息

半导体纳米晶具有量子尺寸效应和独特的光学性质,可广泛地应用在光电器件、生物标记、太阳能电池、光催化等方面,因此半导体纳米晶成为越来越多研究者研究的热点。但在诸多的应用限制因素中,高性能的QDs材料(Ⅱ-Ⅵ或Ⅳ-Ⅵ)通常含有镉或铅等剧毒的元素,批量生产和使用这类材料不仅对人体有着极大的伤害,还会引起环境和生态问题。因此低毒性能的QDs材料的设计和研发是目前研究的前沿之一。研究人员通过控制反应条件、表面包裹以及掺杂等对磷化铟(InP)材料的性能进行调控,使之能够更好地应用于各个领域之中。

关键词：磷化铟表面包裹掺杂应用功能材料

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脱细胞真皮基质在牙种植中的研究和应用进展

口腔医学 2017年第11期37卷 1038-1040页

作者：方欣怡林赳杨禾四川大学华西口腔医学院牙周科四川成都610041

脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)是由同种或异种皮经特殊处理后制备的一种新型真皮移植材料,其最早应用在烧伤科的临床实践上。随着基础和临床研究的深入,发现ADM具备低抗原性、易成活、良好的生物相容性、易于周围上皮爬... 详细信息

脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM)是由同种或异种皮经特殊处理后制备的一种新型真皮移植材料,其最早应用在烧伤科的临床实践上。随着基础和临床研究的深入,发现ADM具备低抗原性、易成活、良好的生物相容性、易于周围上皮爬行、能够与基底组织和黏膜较好地结合、良好的屏障膜功能等生物学特性,其临床适应证不断扩展,使其在其他临床学科中的应用逐步展开。该文就种植体植入前、植入中、植入后ADM应用展望作一综述,同时简单介绍ADM的制备和生物学特性。

关键词：脱细胞真皮基质牙种植引导骨再生软组织不足

儿童口腔健康相关生存质量量表信度与效度的验证研究

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国际口腔医学杂志 2017年第4期44卷 445-451页

作者：林赳余钒源方欣怡哈品龚彩霞石冰口腔疾病研究国家重点实验室国家口腔疾病临床研究中心四川大学华西口腔医院成都610041

目的通过对8~15岁儿童口腔健康相关生存质量量表(COHIP)中文版信度与效度的验证研究,探讨其在中国适龄儿童中应用的可行性。方法按照国际生存质量评价项目的标准程序,对英文原版COHIP系列问卷中的儿童问卷、父母问卷分别进行翻译、回译... 详细信息

目的通过对8~15岁儿童口腔健康相关生存质量量表(COHIP)中文版信度与效度的验证研究,探讨其在中国适龄儿童中应用的可行性。方法按照国际生存质量评价项目的标准程序,对英文原版COHIP系列问卷中的儿童问卷、父母问卷分别进行翻译、回译、文化调适和改造,建立中文版COHIP,形成适应儿童口腔健康和治疗需求的自我评估问卷、内容效度指数(CVI)合格的评估量表。使用该系列量表对8~15岁的儿童及其家长进行儿童口腔健康相关生存质量调查,考评量表的信度和效度。结果 1 189对儿童及家长接受问卷调查,收回有效问卷1 143份,量表完成率为96.1%。COHIP儿童表内部一致性Cronbach’sα系数为0.903,条目-量表相关系数为0.134~0.611,Guttman分半信度系数为0.798,组内相关系数(ICC)为0.926。COHIP家长表内部一致性Cronbach’sα系数为0.796,条目-量表相关系数为0.121~0.614,Guttman分半信度系数为0.796,ICC为0.931。因子分析显示中文版量表所包含的条目存在预想的逻辑关系。结论中文版COHIP具有良好的信度和效度,其良好的心理测量学性质为其在中国适龄儿童中的应用提供了理论依据。

关键词：口腔健康儿童生存质量信度效度量表

软质聚氨酯泡沫与Al2O3纳米粒子复合材料的低频吸声性能研究

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软质聚氨酯泡沫与Al2O3纳米粒子复合材料的低频吸声性能研究