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广西猪源益生菌的分离鉴定与生物学特性研究

中国畜牧兽医 2020年第6期47卷 1921-1933页

作者：张在郑瑞程方庆励黄伟坚广西大学动物科学技术学院南宁530000

为了解广西地区猪粪便与微生态发酵饲料中益生菌的存在情况及合理开发和利用猪源益生菌,本试验共采集了15份猪粪便样品和5份益生菌发酵饲料并对其进行益生菌的分离,研究益生菌的形态学特性、生理生化特性及16S rRNA分子序列,进行生长曲... 详细信息

为了解广西地区猪粪便与微生态发酵饲料中益生菌的存在情况及合理开发和利用猪源益生菌,本试验共采集了15份猪粪便样品和5份益生菌发酵饲料并对其进行益生菌的分离,研究益生菌的形态学特性、生理生化特性及16S rRNA分子序列,进行生长曲线、耐胆盐试验、温度敏感试验、模拟胃肠道耐受试验、耐药性试验、体外抑菌试验、小鼠安全性试验、体内/外抑菌试验,对分离菌株进行生物学特性的研究分析。结果显示,本试验共分离鉴定出6种、29株益生菌,分别为1株屎肠球菌(C2)、2株乳酸肠球菌(C1、C3)、3株植物乳杆菌(R20、R30、R37)、4株干酪乳杆菌(R41~R44)、7株枯草芽孢杆菌(K1~K7)和12株蜡样芽孢杆菌(Y1~Y12)。从中筛选出6株具有生长性能好、耐胆盐、耐高温、对胃肠道耐受、体外抑菌能力强的益生菌:乳酸肠球菌C1、屎肠球菌C2、植物乳杆菌R20、干酪乳杆菌R41、枯草芽孢杆菌K1和蜡样芽孢杆菌Y3。将筛选出的具有优良特性的菌株进行小鼠安全性试验,结果表明,在109 CFU/mL浓度下灌胃6株益生菌对小鼠是安全无毒害的。与此同时,C2、R20、R41、Y3能极显著提高小鼠日增重(P<0.01),K1能显著提高小鼠日增重(P<0.05)。体内抑菌试验结果表明,C2、R20、K1能降低沙门氏菌G21感染的小鼠的死亡率,有一定程度的体内抑菌作用。各项试验结果表明,R20和K1可作为猪源益生菌的选择菌株。

关键词：益生菌分离生物学特性抑菌猪

PK-15细胞ANXA8膜联蛋白原核表达及多克隆抗体制备

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畜牧与兽医 2022年第8期54卷 79-85页

作者：李丹阳吴青萍方庆励莫筱可黄伟坚广西大学动物科学技术学院广西南宁530004

为了制备ANXA8膜联蛋白的多克隆抗体,本研究以PK-15细胞ANXA8基因为模板,通过RT-PCR扩增得到猪源ANXA8基因,并克隆到pGEX6p1载体。加入His-tag标签,成功构建了重组质粒pGEX6p1-ANXA8,鉴定正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞... 详细信息

为了制备ANXA8膜联蛋白的多克隆抗体,本研究以PK-15细胞ANXA8基因为模板,通过RT-PCR扩增得到猪源ANXA8基因,并克隆到pGEX6p1载体。加入His-tag标签,成功构建了重组质粒pGEX6p1-ANXA8,鉴定正确后将其转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,纯化后的重组蛋白利用SDS-PAGE、Western blot进行鉴定。以纯化后的重组蛋白作为抗原,免疫SPF级昆明鼠,获得针对ANXA8蛋白的多克隆抗体。经过ELISA检测,抗体效价达1∶25600,经过Western blot和间接免疫荧光(IFA)检测,抗体可以与ANXA8蛋白产生特异性结合反应。本试验成功地应用大肠杆菌表达ANXA8蛋白,表达的蛋白具有免疫原性,并获得鼠源阳性血清,为ANXA8蛋白结构及功能的研究奠定基础。

关键词： ANXA8蛋白表达多抗

一起猪蓝耳病继发感染传染性胸膜肺炎的诊断与分析

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黑龙江畜牧兽医 2018年第12期 131-133页

作者：季程远覃一峰黄培超方庆励刘芳陈樱韦祖樟欧阳康黄伟坚广西大学动物科学技术学院广西南宁530005 钦州市动物卫生监督所广西钦州535002

为了查明广西横县某猪场疫情爆发的原因,试验采用细菌的分离培养及分子生物学方法来检测。结果表明：细菌分离培养初步得到分离菌株,经PCR鉴定为传染性胸膜肺炎放线杆菌,且出现了一定程度的耐药性;该养猪场猪蓝耳病病毒抗体水平高于正常... 详细信息

为了查明广西横县某猪场疫情爆发的原因,试验采用细菌的分离培养及分子生物学方法来检测。结果表明：细菌分离培养初步得到分离菌株,经PCR鉴定为传染性胸膜肺炎放线杆菌,且出现了一定程度的耐药性;该养猪场猪蓝耳病病毒抗体水平高于正常值,且在病料中检测到蓝耳病病毒。说明此疫情是由猪蓝耳病继发感染猪传染性胸膜肺炎引起的,此案例提醒各养殖场在加强猪蓝耳病防疫的同时要重视生物安全措施,防止细菌的继发感染。

关键词：蓝耳病猪传染性胸膜肺炎诊断防疫生物安全

猪圆环病毒2型和3型双重PCR检测方法的建立与应用

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中国预防兽医学报 2018年第10期40卷 913-916页

作者：季程远王蔚怡黄欣方庆励欧阳康陈樱韦祖樟黄伟坚广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

为建立一种快速且同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)的方法,本研究根据GenBank中PCV2和PCV3的全基因组序列,设计了两对特异性引物,通过对扩增条件的优化,建立了能够同时检测PCV2和PCV3的双重PCR方法。该方法可以同时扩增PCV2的266... 详细信息

为建立一种快速且同时检测猪圆环病毒2型(PCV2)和3型(PCV3)的方法,本研究根据GenBank中PCV2和PCV3的全基因组序列,设计了两对特异性引物,通过对扩增条件的优化,建立了能够同时检测PCV2和PCV3的双重PCR方法。该方法可以同时扩增PCV2的266 bp和PCV3的594 bp特异性片段,而对猪伪狂犬病毒、猪细小病毒、猪瘟病毒、猪繁殖障碍与呼吸综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的基因组扩增结果均为阴性。对PCV2和PCV3的最低检出量均为100拷贝/μL。对广西境内100份健康屠宰猪淋巴结样品检测结果显示,单一PCR与双重PCR检测符合率为100%。结果表明,本研究建立了一种简便快捷、反应灵敏、稳定可靠且特异性强的双重PCR技术,为临床样品中PCV2和PCV3的快速检测提供了有效的技术支持。

关键词：猪圆环病毒2型猪圆环病毒3型双重PCR 检测

2014—2016年广西部分地区猪瘟病原和血清学调查

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黑龙江畜牧兽医 2018年第14期 89-92页

作者：季程远覃一峰谢欣方庆励秦树英刘芳陈樱韦祖樟欧阳康黄伟坚广西大学动物科学技术学院

为了解近年来广西部分地区猪群猪瘟病毒感染情况,为猪场制订合理的防控措施提供依据,试验于2014—2016年对广西部分地区362份组织样品进行猪瘟的病原学检测,对2 994份血清进行猪瘟的抗体检测。结果表明：2014—2016年广西部分地区猪瘟... 详细信息

为了解近年来广西部分地区猪群猪瘟病毒感染情况,为猪场制订合理的防控措施提供依据,试验于2014—2016年对广西部分地区362份组织样品进行猪瘟的病原学检测,对2 994份血清进行猪瘟的抗体检测。结果表明：2014—2016年广西部分地区猪瘟病原阳性率分别是10.80%、7.78%、9.38%,血清抗体阳性率分别是64.86%、70.56%、86.56%,广西部分地区猪瘟的病原阳性率整体平稳,而抗体阳性率呈上升趋势。2014—2016年春季病原阳性率为13.10%,血清抗体阳性率为67.53%,夏季分别为8.62%和73.48%,秋季分别为8.97%和74.77%,冬季分别为11.90和81.06%,春、冬季节的猪瘟病原发病率略高于夏、秋季节。说明猪瘟持续性地对广西部分地区养猪业造成威胁,需要通过加强猪瘟免疫来积极应对。

关键词：猪瘟病毒病原检测血清检测流行病学抗体免疫

广西某市屠宰猪淋巴结猪圆环病毒3型的病原检测及遗传演化分析

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畜牧兽医学报 2018年第6期49卷 1265-1273页

作者：季程远王蔚怡冯选榕姚静黄欣冯园青覃一峰方庆励陈樱欧阳康韦祖樟黄伟坚广西大学动物科学技术学院南宁530004

为了解猪圆环病毒3型(PCV3)在广西地区健康猪群中的遗传变异情况,对广西某市屠宰场健康猪的181份淋巴结进行PCV3的病原检测,结果 PCV3阳性率为24.31%。这说明在健康屠宰猪群中PCV3的感染率较高,带毒情况较为严重。对其中的阳性样品进行... 详细信息

为了解猪圆环病毒3型(PCV3)在广西地区健康猪群中的遗传变异情况,对广西某市屠宰场健康猪的181份淋巴结进行PCV3的病原检测,结果 PCV3阳性率为24.31%。这说明在健康屠宰猪群中PCV3的感染率较高,带毒情况较为严重。对其中的阳性样品进行全序列扩增,最终得到6条PCV3全基因组序列。将试验所得PCV3全基因组序列与GenBank上已发表的国内外毒株全基因组序列相比较,结果发现PCV3全基因组相似性为98.6%~99.9%,变异程度低,较为保守;对PCV3ORF2基因进行遗传演化分析,发现PCV3毒株可分为两大型。通过对PCVs(PCV1、PCV2和PCV3)Cap蛋白相似性进行比对分析,推测PCV2与PCV3不具有交叉保护性。

关键词：猪圆环病毒3型全基因序列分析遗传演化分析

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核电厂设备抗震鉴定的审评

核动力工程 1995年第5期16卷 394-400页

作者：方庆贤北京核安全中心

介绍了核电厂设备抗震鉴定的标准和要求，鉴定的范围、步骤、方法和程序，以及抗震鉴定审评所依据的准则．详细论述了抗震试验鉴定中所采用的具体实施程序，并通过审评实践对核电厂设备抗震试验鉴定中常见的一些问题也进行了探讨．

关键词：核电厂设备抗震鉴定标准

纳米Zn_(0.6)Co_xFe_(2.4-x)O_4晶粒的结构相变与磁性研究

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物理学报 2004年第9期53卷 3186-3190页

作者：汪金芝方庆清安徽大学物理系合肥230039

采用溶胶凝胶自燃烧法制备了纳米尺度的锌钴铁氧体Zn0 6 CoxFe2 4 -xO4 (x =0— 0 30 )粉体 ,分别在不同温度下进行了热处理 ,利用x射线衍射仪 (XRD)和振动样品磁强计 (VSM)对其物相结构和磁性进行了测量和分析 .实验结果表明 ,锌... 详细信息

采用溶胶凝胶自燃烧法制备了纳米尺度的锌钴铁氧体Zn0 6 CoxFe2 4 -xO4 (x =0— 0 30 )粉体 ,分别在不同温度下进行了热处理 ,利用x射线衍射仪 (XRD)和振动样品磁强计 (VSM)对其物相结构和磁性进行了测量和分析 .实验结果表明 ,锌钴铁氧体Zn0 6 Co0 1 5Fe2 2 5O4 在 5 5 0— 80 0℃温度区间出现α Fe2 O3过渡相 ,在高于 80 0℃温度时生成单一尖晶石相锌钴铁氧体 ;随钴含量的增加 ,Zn0 6 CoxFe2 4 -xO4 的比饱和磁化强度先增后减 ,x =0 0 75— 0 1 5比饱和磁化强度较高 ;Zn0 6 CoxFe2 4 -xO4 在 1 30 0℃时x =0 0 75的矫顽力为 4 75 2 0A m ,x≥ 0 1 5时矫顽力在 1 2 0 0℃附近随温度缓慢上升 ,在 1 2 0 0— 1 30 0℃之间为平台状态 ,并且随钴含量的增加 ,矫顽力略有升高 .在x =0 1 0附近。

关键词：锌钴铁氧体磁光记录材料溶胶-凝胶法结构相变磁化强度

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溶胶-凝胶法制备的莫来石先驱体的相变研究

材料工程 2003年第4期31卷 12-13页

作者：刘若愚方庆齐北京航空材料研究院北京100095

通过正硅酸乙酯和异丙醇铝醇盐在氨水中的水解制备莫来石先驱体凝胶,然后在120℃烘箱中干燥,并研磨制得干凝胶粉末。对干凝胶粉末进行差热分析,并采用XRD分析法研究了凝胶粉经不同温度处理后的相态。结果表明,无定形凝胶在加热过程中,... 详细信息

通过正硅酸乙酯和异丙醇铝醇盐在氨水中的水解制备莫来石先驱体凝胶,然后在120℃烘箱中干燥,并研磨制得干凝胶粉末。对干凝胶粉末进行差热分析,并采用XRD分析法研究了凝胶粉经不同温度处理后的相态。结果表明,无定形凝胶在加热过程中,依次析出立方γ-Al2O3、六方α-Al2O3,并最终转变为正交晶莫来石。所制凝胶转变为莫来石晶体的相变温度位于1100～1200℃之间。

关键词：溶胶-凝胶法制备先驱体莫来石相变陶瓷凝胶