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问号钩端螺旋体vwa基因产物竞争性抑制vWF/GPIbα介导血小板聚集引发出血机制

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问号钩端螺旋体vwa基因产物竞争性抑制vWF/GPIbα介导血小板聚集...

浙江省免疫学会第六次会员代表大会暨第十一次学术大会

作者：方佳琪浙江大学城市学院

背景:致病性钩端螺旋体(Leptospira,以下简称钩体)引起的钩体病(leptospirosis)是全球性流行的人畜共患传染病。出血和黄疸是钩体病典型的病理特征,但钩体病出血机制迄今不明。人血管性假血友病因子(von Willebtand factor,vWF)是重要... 详细信息

背景:致病性钩端螺旋体(Leptospira,以下简称钩体)引起的钩体病(leptospirosis)是全球性流行的人畜共患传染病。出血和黄疸是钩体病典型的病理特征,但钩体病出血机制迄今不明。人血管性假血友病因子(von Willebtand factor,vWF)是重要的凝血因子,该因子与血小板膜糖蛋白-Ib的α亚基(GPIbα)结合后启动血小板聚集过程。致病性问号钩体(***)基因种(genospecies)黄疸出血群赖型赖株vwa-Ⅰ与vwa-Ⅱ基因产物被注释为含vWF-A结构域的蛋白,但其在钩体病出血过程的作用及其机制未见研究报道。研究目的:阐明问号钩体黄疸出血群赖型赖株vwa-Ⅰ与vwa-Ⅱ基因重组产物(rLep-vWA-Ⅰ和rLep-vWA-Ⅱ)具有与人血小板和GPIbα的强结合能力,但不能激活血小板聚集信号通路;确定rLep-vWA-Ⅰ或rLep-vWA-Ⅱ能够导致小鼠体内出血;确定钩体vwa-Ⅰ与vwa-Ⅱ基因重组产物与人GPIbα的结合基序。材料和方法:采用流式细胞术、表面等离子共振(SPR)和等温滴定量热法(ITC)分别检测rLep-vWA-Ⅰ和rLep-vWA-Ⅱ与人血小板及其GPIbα的结合能力。采用生物发光血小板凝集测定仪检测rLep-vWA-Ⅰ和rLep-vWA-Ⅱ诱导人血小板聚集情况。采用Western Blot检测rLep-vWA-Ⅰ或rLep-vWA-Ⅱ作用人血小板后血小板聚集相关PI3K/AKT-ERK和PLC-PKC信号通路激酶磷酸化水平。采用定位突变联合SPR或ITC检测rLep-vWA-Ⅰ和rLep-vWA-Ⅱ中与人重组GPIbα(rHu-GPIbα)的结合位点。采用HE染色检测注射rLep-vWA-Ⅰ或rLepvWA-Ⅱ的C3H/HeJ和C57BL/6小鼠肺、肝、肾组织标本中出血情况。结果:rLep-vWA-Ⅰ和rLep-vWA-Ⅱ能与81.7%～94.7%人血小板结合,但该结合可被rLepvWA-I-IgG和rLep-vWA-Ⅱ-IgG阻断。SPR和ITC结果显示,rLep-vWA-Ⅰ和rLep-vWA-Ⅱ能与rHu-GPIbα高亲和力结合,其K为3.87×10-8.65×10 M。rLep-vWA-Ⅰ和rLep-vWA-Ⅱ不能诱导人血小板聚集,但可阻断人重组vWF(rHu-vWF)和协同因子瑞斯托霉素(ristocetin)诱导的血小板体外聚集。rLep-vWA-Ⅰ和rLep-vWA-Ⅱ作用后人血小板聚集相关信号通路激酶AKT、ERK、PLC和PKC磷酸化水平无显著改变。Lep-vWA-Ⅰ中G13、G47、R36和LepvWA-Ⅱ中G76、Q126突变后,与rHu-GPIbα结合能力以及抑制Hu-rvWF/ristocetin介导血小板聚集的作用显著下降甚至消失。静脉注射rLep-vWA-Ⅰ或rLep-vWA-Ⅱ后,C3H/HeJ和C57BL/6小鼠肺和肾组织均分别出现严重的弥漫性出血和局灶性出血。结论:问号钩体vwa-Ⅰ和vwa-Ⅱ基因产物能与vWF竞争性结合血小板GPIbα阻断vWF介导的人血小板聚集,从而导致钩体病人出血。

关键词：钩体病 vwa-Ⅰ与vwa-Ⅱ基因竞争性抑制血管性假血友病因子血小板聚集

来源： cnki会议评论

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氯虫苯甲酰胺衍生物的合成及杀虫活性

浙江工业大学学报 2022年第1期50卷 44-49,54页

作者：杜晓华方佳琪楼佳明浙江工业大学催化加氢中心浙江杭州310014 浙江省绿色农药清洁生产技术研究重点实验室浙江杭州310014 浙江省绿色农药协同创新中心浙江杭州310014

为了开发新的杀虫化合物,以氯虫苯甲酰胺为先导,通过引入氨基酸片段合成了12个新化合物,通过^(1)H NMR,^(13)C NMR和HRMS等手段进行结构表征。室内杀虫活性初步测试结果表明:在500 mg/L测试质量浓度下,多数目标化合物对黏虫(Oriental ar... 详细信息

为了开发新的杀虫化合物,以氯虫苯甲酰胺为先导,通过引入氨基酸片段合成了12个新化合物,通过^(1)H NMR,^(13)C NMR和HRMS等手段进行结构表征。室内杀虫活性初步测试结果表明:在500 mg/L测试质量浓度下,多数目标化合物对黏虫(Oriental armyworm)有着较高的杀虫活性,其中化合物b在20,4 mg/L质量浓度下对黏虫分别有90%和80%的杀虫活性,化合物f在20,4 mg/L质量浓度下对黏虫分别有80%和70%的杀虫活性。

关键词：氯虫苯甲酰胺衍生物氨基酸片段杀虫活性

具象化乐谱的创作及其在早期儿童音乐教育中的作用

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北方音乐 2019年第11期39卷 15-16页

作者：方佳琪汕头职业技术学院

“具象化乐谱”是通过卡通图像对传统乐谱(五线谱)进行再创作,建立起各音乐元素与图形的对应关系,起到替代五线谱,培养音乐阅读逻辑的作用。通过卡通图像对乐谱进行“具象化”表达,能够降低音乐学习难度,培养儿童良好的音乐阅读习惯,提... 详细信息

“具象化乐谱”是通过卡通图像对传统乐谱(五线谱)进行再创作,建立起各音乐元素与图形的对应关系,起到替代五线谱,培养音乐阅读逻辑的作用。通过卡通图像对乐谱进行“具象化”表达,能够降低音乐学习难度,培养儿童良好的音乐阅读习惯,提升学习兴趣,满足音乐学习低龄化的需求。“具象化乐谱”的学习模式能够符合早期儿童发展(图像学习时期)的特点,满足儿童认知发展的需求。“具象化乐谱”的创作与实践运用到幼师教育中,还能够有效提高幼师毕业生专业度,提升音乐教育中师资人才配置的合理性。

关键词：具象化乐谱创作儿童音乐教育

含吡唑-4-甲酰胺的嗜球果伞素类化合物的设计、合成及杀虫活性

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农药学学报 2021年第6期23卷 1108-1116页

作者：楼佳明郝树林方佳琪杜晓华浙江工业大学催化加氢中心浙江省绿色农药清洁生产技术研究重点实验室浙江省绿色农药协同创新中心杭州310014

为了发现新的农用高活性化合物,将具有杀螨活性的嗜球果伞素类化合物与具有杀菌活性的吡唑酰胺类化合物的活性亚结构进行拼接,设计并合成了16个新化合物,通过核磁共振氢谱、碳谱及高分辨质谱等手段表征了其结构。生物活性测试结果表明,... 详细信息

为了发现新的农用高活性化合物,将具有杀螨活性的嗜球果伞素类化合物与具有杀菌活性的吡唑酰胺类化合物的活性亚结构进行拼接,设计并合成了16个新化合物,通过核磁共振氢谱、碳谱及高分辨质谱等手段表征了其结构。生物活性测试结果表明,目标化合物虽然没有预期的杀螨和杀菌活性,但是表现出了良好的杀虫活性,其中8个化合物在500 mg/L下对黏虫Mythimna separata的杀虫活性为100%。

关键词：嗜球果伞素吡唑-4-甲酰胺嘧啶硫醚黏虫杀虫活性

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陆地棉YTH基因家族的鉴定与表达特征分析

山西农业大学学报（自然科学版） 2024年第3期44卷 1-13页

作者：钱娇方佳琪李迎迎王丽河南师范大学生命科学学院河南新乡453007

[目的]YT521-B同源(YTH)结构域蛋白可识别结合N6-甲基腺苷(m6A)调控mRNA的代谢过程,在植物生长发育与逆境响应中发挥重要作用。探究棉花YTH家族基因的组织表达模式、响应非生物胁迫和外源激素的表达特征,可为深入研究棉花YTH基因功能提... 详细信息

[目的]YT521-B同源(YTH)结构域蛋白可识别结合N6-甲基腺苷(m6A)调控mRNA的代谢过程,在植物生长发育与逆境响应中发挥重要作用。探究棉花YTH家族基因的组织表达模式、响应非生物胁迫和外源激素的表达特征,可为深入研究棉花YTH基因功能提供理论依据。[方法]采用生物信息学方法对陆地棉YTH基因家族进行全基因组分析,并利用转录组数据和实时荧光定量PCR(qPCR)分析GhYTH基因在逆境胁迫和外源激素处理下的表达特征。[结果]陆地棉中共鉴定获得26个GhYTH基因,在16条染色体上呈现不均一分布,其中22个YTH-DF和4个YTH-DC亚家族成员,GhYTHs具有相似的基序和结构。串联重复和片段复制是驱动陆地棉YTH基因家族扩张的主要方式;陆地棉与拟南芥YTH共线性基因间Ka/Ks<0.5,表明该基因家族在进化过程中受到了较强的纯化选择。转录组结果显示多数GhYTH具有组织表达特异性,GhYTH2/16在各组织中高表达;逆境胁迫可显著增加GhYTH的表达,尤其是GhYTH9/12/14,qPCR结果与转录组结果一致;外源赤霉素、脱落酸和茉莉酸甲酯处理时,GhYTH10/12/14的表达显著增加。[结论]本研究通过陆地棉全基因组分析,获得了5个重要的YTH候选基因GhYTH2/9/10/12/14,它们在棉花生长发育和逆境抵抗中可能发挥着重要的作用,为进一步解析YTH介导的m6A修饰的作用提供了重要的理论依据。

关键词：陆地棉 YTH基因激素胁迫表达

钩端螺旋体脂多糖诱生炎性细胞因子及小鼠感染组织中单核-巨噬细胞浸润

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第11期36卷 817-823页

作者：胡小伟陈旭方佳琪李凯旋赵金方严杰浙江大学医学院病原生物学系杭州310058 浙江中医药大学附属第一医院检验科杭州310006

目的：了解问号钩端螺旋体脂多糖（ L-LPS）诱导人单核细胞或小鼠单核-巨噬细胞产生炎性细胞因子的作用以及问号钩端螺旋体感染后小鼠内脏组织中外周血单核-巨噬细胞浸润情况。方法采用酚水法提取问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株L-LP... 详细信息

目的：了解问号钩端螺旋体脂多糖（ L-LPS）诱导人单核细胞或小鼠单核-巨噬细胞产生炎性细胞因子的作用以及问号钩端螺旋体感染后小鼠内脏组织中外周血单核-巨噬细胞浸润情况。方法采用酚水法提取问号钩端螺旋体黄疸出血群赖型赖株L-LPS并用鲎试验测定其内毒素活性。采用细胞因子抗体芯片，检测L-LPS作用或问号钩端螺旋体赖株感染后人THP-1单核细胞株或小鼠J774A.1单核-巨噬细胞产生细胞因子情况。分别采用HRP标记外周血单核-巨噬细胞特异性CD68抗体免疫组化法和细胞因子抗体芯片，分别检测问号钩端螺旋体赖株感染C3H/HeJ小鼠肺、肝、肾组织中单核-巨噬细胞浸润情况以及血清细胞因子水平。结果 L-LPS凝固鲎试剂活性约为大肠埃希菌脂多糖（E-LPS）的1/5。 L-LPS作用后THP-1或J774A.1细胞分别有29和9种细胞因子水平明显升高（P〈0.05或P〈0.01），其中主要促炎细胞因子为IL-6和TNF-α，同时包含多种单核-巨噬细胞趋化因子表达增强。问号钩端螺旋体感染细胞上清或感染小鼠血清中细胞因子检测结果与L-LPS作用细胞相似。问号钩端螺旋体赖株感染小鼠后，肺、肝、肾组织中出现大量外周血单核-巨噬细胞浸润。结论 L-LPS具有很强的诱导单核-巨噬细胞上调多种促炎细胞因子和单核-巨噬细胞趋化因子表达的作用，单核-巨噬细胞是问号钩端螺旋体感染小鼠内脏组织中浸润的主要炎症细胞。

关键词：问号钩端螺旋体脂多糖炎性细胞因子单核-巨噬细胞浸润

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一个文科生的烦恼

新作文(初中版) 2019年第Z2期 103-104页

作者：方佳琪浙江省衢州市白云学校七(3)班

@作者自画@哈喽,大家好!我叫方佳琪,是来自浙江衢州的一名初一学生。我个子不算高,不过,"浓缩的都是精华"嘛!我是那种"静若处子,动若脱兔"的人,能融入集体一起疯玩,也能一个人抱着一堆书看上一下午。

关键词：文科生数学题

牛血清蛋白与邻苯二酚、间苯三酚相互作用的机理探究

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食品与发酵工业 2020年第11期46卷 61-68页

作者：褚千千艾健方佳琪韩秋煜包斌孙永军上海海洋大学食品学院上海201306 食品科学与工程国家级实验教学示范中心(上海海洋大学) 上海201306 好当家集团有限公司山东荣成264305

为探究酚类化合物与蛋白质的相互作用机理,分别用氧化的邻苯二酚(oxidized o-dihydroxybenzene,OOP)、间苯三酚(oxidized m-trihydroxybenzene,OMP)和未氧化的邻苯二酚(OP)、间苯三酚(m-trihydroxybenzene,MP)和牛血清蛋白(bovine serum protein,BSA)在常温下反应。分析了BSA与OP、MP、OOP、OMP反应前后游离氨基、巯基、非共价相互作用力、表面疏水性的变化;应用傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)、圆二色谱(circular dichroism,CD)、差式扫描量热仪(differential scanning calorimeter,DSC)表征构象的变化。结果显示:BSA与OP、MP相互作用后,游离氨基、巯基含量的变化不显著,但是OOP、OMP可使BSA游离氨基、巯基含量显著降低;OP、MP可与BSA形成氢键,但离子键没有显著变化;OP与BSA反应后,疏水相互作用显著升高,而MP导致疏水相互作用显著降低;OP、MP、OOP、OMP都会使BSA表面疏水性显著降低;FTIR和CD结果显示,OP、MP、OOP、OMP都会导致BSA二级结构的变化,表现为α-螺旋含量降低,β-折叠、β-转角、无规卷曲含量上升;DSC结果表明,OP、MP、OOP、OMP的引入提高了BSA的热变性温度。综上,邻苯二酚、间苯三酚经过氧化后与BSA发生共价相互作用,而未氧化的邻苯二酚、间苯三酚可与BSA发生非共价相互作用,这些相互作用可能改变蛋白质的功能性质,从而影响蛋白质在食品中的应用。

关键词：邻苯二酚间苯三酚蛋白质共价相互作用非共价相互作用

NaCl对可口革囊星虫体壁肌原纤维蛋白理化和凝胶性质的影响

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中国食品学报 2023年第12期23卷 77-86页

作者：方佳琪薛茜王芳陈朝阳蔡荣杰郭凤仙汤璧蔚黄慧福建省海洋藻类活性物质制备与功能开发重点实验室福建泉州362000 泉州师范学院海洋与食品学院福建泉州362000 福建农林大学食品科学学院福州350002 泉州五叔公食品有限责任公司福建泉州362700

通过对可口革囊星虫体壁肌原纤维蛋白(PeMP)的总蛋白溶解性、不同种类蛋白溶解性、紫外吸收光谱、内源荧光光谱、Zeta电位、傅里叶变换红外光谱(FTIR)、巯基含量、表面疏水性、变性温度和凝胶结构的分析,研究NaCl对PeMP的理化和凝胶性... 详细信息

通过对可口革囊星虫体壁肌原纤维蛋白(PeMP)的总蛋白溶解性、不同种类蛋白溶解性、紫外吸收光谱、内源荧光光谱、Zeta电位、傅里叶变换红外光谱(FTIR)、巯基含量、表面疏水性、变性温度和凝胶结构的分析,研究NaCl对PeMP的理化和凝胶性质的影响。结果表明:随着NaCl浓度的增加,PeMP的溶解性增大,PeMP中副肌球蛋白和肌球蛋白含量显著增加。PeMP的紫外吸收光谱及其紫外吸收光谱的相应二阶导数光谱和PeMP的内源荧光光谱的最大吸收波长(λ_(max))均发生红移。PeMP的Zeta电位增大。FTIR分析表明PeMP的二级结构发生转变,β-折叠逐渐增加,而α-螺旋逐渐降低。PeMP的总巯基和非蛋白巯基含量降低,而分型巯基含量升高,表面疏水性增大。PeMP的变性温度降低。PeMP凝胶的蛋白分子间的排列更为紧密。研究结果为改良可口革囊星虫体壁凝胶性质,制备高品质“土笋冻”产品奠定基础。

关键词：可口革囊星虫肌原纤维蛋白理化性质凝胶性质氯化钠

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