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H5N1亚型禽流感病毒非结构蛋白单克隆抗体的制备及其表位研究

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H5N1亚型禽流感病毒非结构蛋白单克隆抗体的制备及其表位研究

作者：文雪霞中国农业科学院

学位级别：硕士

禽流感(Avian influenza, AI)是由正粘病毒科流感病毒属A型AI病毒(Avian influenza virus,AIV)所引起的一种禽类传染病。近年来，以H5N1亚型为代表的AI的流行使得养禽业遭受严重损失，同时对人类健康和世界公共卫生安全构成重大威胁。... 详细信息

禽流感(Avian influenza, AI)是由正粘病毒科流感病毒属A型AI病毒(Avian influenza virus,AIV)所引起的一种禽类传染病。近年来，以H5N1亚型为代表的AI的流行使得养禽业遭受严重损失，同时对人类健康和世界公共卫生安全构成重大威胁。疫苗免疫接种是预防AI有效措施。然而疫苗的大范围使用，免疫鸡群血清学阳性率极高，与病毒感染途径引起的血清学阳性相混淆。这两种途径发生的血清学改变，通过现有的血清学检测技术均不能鉴别，给AI的监控工作带来一定困扰，因此，很多研究开始关注AI感染和免疫的鉴别(Differentiation of infected and vaccinatedanimals, DIVA)方法研究。目前对流感病毒感染和免疫的鉴别研究主要集中在非结构蛋白(NS1)上，其中针对NS1的单克隆抗体(MAb)是必不可少的重要基础，因此，开展了本项研究工作。本研究通过原核表达获得了NS1蛋白，浓缩纯化后，免疫BALB/c小鼠，利用常规的MAb制备技术，将免疫小鼠脾细胞和SP2/0融合，经3次克隆后，共制备2株能稳定分泌抗NS1特异性抗体的杂交瘤细胞株D9和D7。Western blot鉴定表明，这2株MAbs均能够识别NS1重组蛋白。另外，还构建了pCAGGs-NS1重组质粒转染SF9细胞后，以间接免疫荧光(IFA)的方法鉴定了2株MAbs能与瞬时表达的NS1蛋白特异性结合，从两方面验证了MAb的特异性。利用噬菌体7肽库对纯化后腹水D9进行表位筛选，经过三轮淘选，获得24个阳性克隆，测序后得到15个多肽序列，其共有序列为WNLNT--VS，与本研究所用毒株的NS1蛋白编码的氨基酸(amino acid,AA)序列比对发现其与AA182A190基本匹配，提示182WNDNTVRVS190为NS1蛋白的一个线性表位。合成多肽WNDNTVRVS，利用ELISA验证了该段多肽与D9有特异性结合。同样，利用噬菌体展示肽库筛选纯化后腹水D7，测序后得到19个多肽序列，其共有序列为NFFTQAL，但在本研究所用毒株的NS1蛋白编码的AA序列上未发现其同源序列。进一步利用多肽芯片技术对D7进行抗原表位的鉴定，发现29DAPF32为D7针对的抗原表位。利用点印记验证了DAPF与D7的特异性结合，并将NS1蛋白上多肽DAPF缺失，IFA鉴定D7与表达NS1(-DAPF)蛋白的细胞结合明显减弱，进一步验证了D7与NS1蛋白上多肽DAPF的结合。本研究制备了2株MAbs D9和D7，分别鉴定了其针对的抗原表位182WNDNTVRVS190和29DAPF32。该结果为进一步研究NS1蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。

关键词：禽流感非结构蛋白单克隆抗体噬菌体展示多肽芯片

CRISPR-Cas技术在病毒性传染病诊断中的应用

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动物医学进展 2022年第7期43卷 107-112页

作者：战佳兴文雪霞张莹沈阳农业大学动物科学与医学学院/东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110161

病毒性传染病尤其是新发和再发病毒性传染病一直是人类和动物健康的重大威胁,而开发准确、快速、便捷的诊断方法有利于病毒性传染病的有效防控。CRISPR-Cas系统是当前应用广泛的基因编辑技术。近年来,有些类型CRISPR-Cas系统已在传染性... 详细信息

病毒性传染病尤其是新发和再发病毒性传染病一直是人类和动物健康的重大威胁,而开发准确、快速、便捷的诊断方法有利于病毒性传染病的有效防控。CRISPR-Cas系统是当前应用广泛的基因编辑技术。近年来,有些类型CRISPR-Cas系统已在传染性病原微生物的分子诊断方面展现出巨大潜力,其与核酸扩增、荧光标记等技术结合建立的检测方法准确、灵敏度高、操作简便,不需要很复杂的设备,适宜用于疫病的现场快速诊断。论文综述了CRISPR-Cas系统Ⅱ型CRISPR-Cas9、Ⅴ型CRISPR-Cas12和Ⅵ型CRISPR-Cas13技术的作用机制及其在病毒性传染病诊断中的应用,以期为病毒性传染病的诊断和防控提供参考。

关键词： CRISPR-Cas技术病毒性传染病分子诊断

急性一氧化碳中毒患者急救护理流程优化对其并发症发生率及痊愈率的影响

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实用临床护理学电子杂志 2018年第19期3卷 51-52页

作者：文雪霞广西桂林市人民医院急诊科

目的探究急性一氧化碳中毒患者急救护理流程优化对其并发症发生率及痊愈率的影响。方法选取2014年11月;017年11月人民医院急性一氧化碳中毒患者120例作为研究对象,2014年11月;015年12月收治的实施常规急诊抢救护理流程的患者40例作为对... 详细信息

目的探究急性一氧化碳中毒患者急救护理流程优化对其并发症发生率及痊愈率的影响。方法选取2014年11月;017年11月人民医院急性一氧化碳中毒患者120例作为研究对象,2014年11月;015年12月收治的实施常规急诊抢救护理流程的患者40例作为对照组,2016年1月;017年11月收治的实施实施优化急诊抢救护理流程的患者80例作为观察组,对比观察两组患者并发症发生情况和患者的痊愈情况。结果观察组并发症发生率明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;观察组抢救痊愈率明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论急性一氧化碳中毒患者优化急救护理流程,可以有效提高患者的痊愈率,减少并发症,提高抢救质量。

关键词：急性一氧化碳中毒急救护理流程优化效果

cGAS-STING信号通路在先天性免疫中的作用研究进展

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动物医学进展 2022年第4期43卷 87-92页

作者：于思慧单朝萌文雪霞张莹沈阳农业大学动物科学与医学学院/东北畜禽疫病研究教育部重点实验室辽宁沈阳110161

先天性免疫是动物抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。当病原微生物入侵时,机体可通过模式识别受体识别病原体相关分子模式,启动抵抗外源微生物感染的免疫反应。环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)是一种DNA感受器,可感知外源DNA并激活cGAS-... 详细信息

先天性免疫是动物抵抗外界病原微生物入侵的第一道防线。当病原微生物入侵时,机体可通过模式识别受体识别病原体相关分子模式,启动抵抗外源微生物感染的免疫反应。环磷酸鸟苷-腺苷合成酶(cGAS)是一种DNA感受器,可感知外源DNA并激活cGAS-STING信号通路。而cGAS-STING信号通路的激活可诱导产生干扰素,这是先天性免疫反应至关重要的组成部分。论文综述了cGAS-STING信号通路介导先天性免疫的分子机制及病毒通过该信号通路调控机体先天性免疫的策略,以期为研究cGAS-STING信号通路及其与病毒间的相互作用提供参考。

关键词： cGAS-STING信号通路先天性免疫病毒感染

探究式教学法在“畜牧微生物学”实验课中的应用及思考

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微生物学通报 2024年第4期51卷 1101-1108页

作者：陈晓月刘金玲张欢文雪霞韩杰重要家畜疫病研究教育部重点实验室农业农村部反刍动物重大疫病防控重点实验室(东部)沈阳农业大学动物科学与医学学院辽宁沈阳110161

畜牧微生物学是一门理论和实践并重的课程,强调学生实践能力的培养。传统的教学法不能满足培养创新人才的需求。为提高教学效果,提升学生运用微生物知识分析和解决实际问题的能力,将探究式教学法引入实验教学中。通过制定不同类型的探... 详细信息

畜牧微生物学是一门理论和实践并重的课程,强调学生实践能力的培养。传统的教学法不能满足培养创新人才的需求。为提高教学效果,提升学生运用微生物知识分析和解决实际问题的能力,将探究式教学法引入实验教学中。通过制定不同类型的探究任务替代传统实验内容,调动学生参与探究过程,并配套评价体系,实现学生独立完成探究任务的目的。经过四轮教学摸索,初步形成了“基本技能培训—任务制定—项目实施—任务评价”四环节的实验课教学模式。该模式更能激发学生的创新动力,提高学生的科研素质和综合能力。

关键词：畜牧微生物学探究式教学法创新动力

内蒙古地区自然发酵乳中乳酸菌的分离鉴定及优良菌株筛选

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食品与发酵工业 2024年

作者：雷雪艳赵丽霞李瑜刘文俊内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室农业农村部奶制品加工重点实验室内蒙古自治区乳品生物技术与工程重点实验室

鲜乳及其发酵乳是牧民日常饮食中主要的营养物来源之一，其中含有丰富的乳酸菌资源。为了从纯培养角度了解不同乳源中乳酸菌的菌群结构并获取其中宝贵的乳酸菌菌种，该研究采用纯培养技术从内蒙古牧区21份样品中分离得到411株乳酸菌，包... 详细信息

鲜乳及其发酵乳是牧民日常饮食中主要的营养物来源之一，其中含有丰富的乳酸菌资源。为了从纯培养角度了解不同乳源中乳酸菌的菌群结构并获取其中宝贵的乳酸菌菌种，该研究采用纯培养技术从内蒙古牧区21份样品中分离得到411株乳酸菌，包括10个属，21个种。其中乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）分离株的数量最多，其次为瑞士乳杆菌（Lactobacillus helveticus）和马乳酒样乳杆菌（Lactobacillus kefiranofaciens）。优势菌群分析发现不同乳源的菌群结构差异较大，酸马乳的菌群多样性最丰富，马乳酒样乳杆菌是其优势菌种之一。根据酸马乳低pH值、低酒精含量的特点，从93株马乳酒样乳杆菌中筛选出4株在低pH值（pH 3.0）和6%（体积分数）乙醇环境下耐受性较好的菌株，然后进一步研究其人工胃肠液耐受性、乙醇耐受性和对3种食品中常见致病菌的抑菌能力。最终筛选出2株马乳酒样乳杆菌分别为：IMAU12331与IMAU12208，具有较好的耐受性和抑菌特性，可作为潜在益生菌开发利用，具有较高的潜在应用价值。

关键词：乳酸菌分离鉴定菌株筛选耐受性抑菌特性

考虑综合效用和主观认知的配电网模块化储能优化配置

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电网技术 2022年第6期46卷 2074-2083页

作者：刘文霞张舒婷高雪倩王丽娜新能源电力系统国家重点实验室(华北电力大学) 北京市昌平区102206

为提高电网公司配置储能的综合效用和电网的韧性,该文提出一种考虑主观认知偏好的模块化移动电池储能优化配置方法。首先,提出了储能在正常、故障和极端场景下的运行方式及协调方法,并通过分析可获得的收益类型提取出与储能配置相关的5... 详细信息

为提高电网公司配置储能的综合效用和电网的韧性,该文提出一种考虑主观认知偏好的模块化移动电池储能优化配置方法。首先,提出了储能在正常、故障和极端场景下的运行方式及协调方法,并通过分析可获得的收益类型提取出与储能配置相关的5种属性。其次,基于前景理论分别建立配电网降损、可靠性提升、延缓电网扩建、极端场景下减少停电损失以及配置成本属性的前景模型,并考虑极端场景的不确定性,以综合前景值最大为目标建立储能的优化配置模型。其中,延缓电网扩建属性的前景值采用可信容量进行核算。最后,采用差分进化算法求解所提非线性优化模型。实际算例表明,模块化移动储能的灵活应用可提高储能的综合效益,决策认知参数可使配置结果更趋向于决策者的主观偏好。研究结果可为城市配网配置储能提供参考。

关键词：模块化储能优化配置极端场景前景理论可信容量

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从当工人说起

成才与就业 2015年第8期 44-46页

作者：徐松鹤孟优悠文雪霞上海电子信息职业技术学院不详

回顾我的青春岁月,求学之路相对平坦,不过中学毕业后当工人的经历为我的人生发展奠定了基础。我的故事,就从这段经历说起吧——工厂：技术革新,带来职业启蒙我与同期校长不同,我的第一份职业是工人。中学毕业时,正是＂文革＂时期,没有... 详细信息

回顾我的青春岁月,求学之路相对平坦,不过中学毕业后当工人的经历为我的人生发展奠定了基础。我的故事,就从这段经历说起吧——工厂：技术革新,带来职业启蒙我与同期校长不同,我的第一份职业是工人。中学毕业时,正是＂文革＂时期,没有大学可以考,但我有幸进入上海仪表电讯工业局所属企业工作,跟着工人师傅学手艺、学技术。我看到他们对每个零件的加工都很认真。

关键词：求学之路工业局我的故事劳动光荣生活智慧告诉我就这样机械化加工产品生产文训

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从两次失败说起

成才与就业 2015年第10期 44-46页

作者：刘道平孟优悠文雪霞

＂做人要厚道,做事要实在,待人要真诚,对己要严格＂,这是我一直以来秉持并践行的行为准则,源自成长过程中的心得体会。如果要说点什么给读者朋友以借鉴和鼓励,可能不少人会用成功经历,不过我想换一个角度,就从失败经历说起吧!俗语云＂... 详细信息

＂做人要厚道,做事要实在,待人要真诚,对己要严格＂,这是我一直以来秉持并践行的行为准则,源自成长过程中的心得体会。如果要说点什么给读者朋友以借鉴和鼓励,可能不少人会用成功经历,不过我想换一个角度,就从失败经历说起吧!俗语云＂失败乃成功之母＂,从失败中不断反省、总结经验、取得进步,也是一种收获。

关键词：失败经历上海理工大学专业知识《第五项修炼》我在动力工程攻关项目心向往之评职称替代技术