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A组人轮状病毒VP3基因的原核表达及鉴定

中国生物制品学杂志 2012年第2期25卷 152-156页

作者：张顺潘小霞袁静文喻玲陈元鼎中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118

目的克隆并原核表达A组人轮状病毒(Rotavirus,RV)TB-Chen株结构蛋白VP3基因,并进行分子系统进化和基因分型。方法采用PCR法扩增A组人轮状病毒TB-Chen株VP3编码基因,克隆至pETL载体上,构建重组原核表达质粒pET-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3)... 详细信息

目的克隆并原核表达A组人轮状病毒(Rotavirus,RV)TB-Chen株结构蛋白VP3基因,并进行分子系统进化和基因分型。方法采用PCR法扩增A组人轮状病毒TB-Chen株VP3编码基因,克隆至pETL载体上,构建重组原核表达质粒pET-VP3,转化大肠杆菌BL21(DE3),并进行表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE及Western blot鉴定后,对VP3基因进行分子系统进化及基因型分析。结果重组表达质粒pET-VP3经双酶切及测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为98 000,以包涵体形式存在;重组VP3蛋白可被抗SA11株全病毒豚鼠免疫血清识别;迄今发现的A组RV VP3可分为7个基因型,TB-Chen株和SA11株VP3基因分别属于M2型和M5型。结论成功原核表达了A组人RV TB-Chen株VP3蛋白,为进一步研究VP3的结构功能及开发新型RV疫苗、诊断试剂和治疗药物奠定了基础。

关键词：轮状病毒属 VP3基因原核细胞基因表达基因分型

痘苗病毒/T7 RNA聚合酶辅助的原核基因在真核细胞中的表达(英文)

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中国生物工程杂志 2011年第5期31卷 48-54页

作者：潘小霞张顺文喻玲袁静陈元鼎中国医学科学院&北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

痘苗病毒/T7RNA聚合酶这一瞬时表达系统由于具有很多优于其他表达系统的特点而被广泛地应用于表达外源蛋白。TB-Chen株轮状病毒的VP6 DNA编码片段插入到原核质粒pETL的噬菌体T7启动子和终止子之间,获得重组表达质粒pET-VP6。构建好的重... 详细信息

痘苗病毒/T7RNA聚合酶这一瞬时表达系统由于具有很多优于其他表达系统的特点而被广泛地应用于表达外源蛋白。TB-Chen株轮状病毒的VP6 DNA编码片段插入到原核质粒pETL的噬菌体T7启动子和终止子之间,获得重组表达质粒pET-VP6。构建好的重组表达质粒pET-VP6通过脂质体转染到真核细胞MA104中,用携带噬菌体T7RNA聚合酶基因的重组痘苗病毒vTF7-3再感染,可在细胞检测到目的蛋白VP6的表达。研究结果还显示,痘苗病毒vTF7-3感染后,细胞病变较快,严重影响了蛋白的表达量。结果提示,如果能降低痘苗病毒vTF7-3的致细胞病变作用而不影响其在细胞中合成T7 RNA聚合酶的能力,蛋白可能会得到高效表达。为进一步研究VP6基因的特性及更好地应用痘苗病毒/T7 RNA聚合酶这一瞬时表达系统提供理论基础。

关键词：轮状病毒VP6 原核质粒表达真核细胞重组痘苗病毒vTF7-3 T7 RNA聚合酶

重组轮状病毒抗原表位亚单位疫苗的小鼠保护性

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中国医学科学院学报 2005年第2期27卷 216-222页

作者：刘晓李嘉琦熊新宇陈瑜娜彭梅代青文喻玲陈元鼎中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所中心实验室昆明650118

目的评价重组表达的轮状病毒(R V)抗原表位疫苗的小鼠体内保护效果及安全性。方法在以FlockH ouse virus病毒外壳蛋白为载体的外源抗原表位呈递系统(FH V-R NA2系统)中构建和重组表达R V V p4蛋白上第223～262位抗原表位(R EA BC)在原... 详细信息

目的评价重组表达的轮状病毒(R V)抗原表位疫苗的小鼠体内保护效果及安全性。方法在以FlockH ouse virus病毒外壳蛋白为载体的外源抗原表位呈递系统(FH V-R NA2系统)中构建和重组表达R V V p4蛋白上第223～262位抗原表位(R EA BC)在原核系统犤;质粒pET,大肠杆菌BL21(D E3)犦中表达的REABC免疫小鼠用细胞培养适应的参照RV W a(G1PA型)和SA11(G3P2型)经口腔灌胃攻击,对R V攻击后的免疫小鼠和对照小鼠的感染症状、排毒情况、血清抗体中和病毒感染性效价进行测定和分析。结果R EA BC可诱导免疫小鼠产生较强的抗-W a和抗-SA11株血清中和抗体和特异的免疫记忆反应,有效保护免疫小鼠对W a和SA11的攻击(不腹泻),减少病毒在体内复制水平和排毒时间,与对照组相比差异具有显著性(P<0.001)。结论重组表达RV抗原表位REABC对小鼠具有较好的免疫保护效果和安全性。

关键词：轮状病毒重组抗原表位亚单位疫苗免疫保护性

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Ⅱ型脊灰病毒抗原表位嵌合蛋白的免疫学研究

中国生物工程杂志 2016年第8期36卷 1-8页

作者：王晶夏文跃潘小霞赵冰心滕玉梅李传印杨筱舟文喻玲陈元鼎中国医学科学研究院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南民族大学化学与生物技术学院民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室昆明650118

目的:评价以轮状病毒(RV)重组VP6蛋白为载体插入Ⅱ型脊髓灰质炎病毒(PV2)VP1蛋白上的1个抗原表位构建而成的嵌合蛋白的体外免疫学性质。方法:采用分子克隆和基因重组技术将PV2抗原表位插入到RV载体蛋白上,在大肠杆菌中表达并用SDS-PAGE... 详细信息

目的:评价以轮状病毒(RV)重组VP6蛋白为载体插入Ⅱ型脊髓灰质炎病毒(PV2)VP1蛋白上的1个抗原表位构建而成的嵌合蛋白的体外免疫学性质。方法:采用分子克隆和基因重组技术将PV2抗原表位插入到RV载体蛋白上,在大肠杆菌中表达并用SDS-PAGE确认表达产物,再通过动物免疫、Western blot、免疫荧光和病毒血清抗体中和试验分析嵌合蛋白的免疫学性质。结果:成功构建了以VP6为载体的PV2抗原表位嵌合蛋白6F/PV2N1,并且在E.coli系统中高效表达,嵌合蛋白免疫的豚鼠血清抗体对RV和PV2具备较好的中和活性。结论:以RV VP6为载体构建的嵌合蛋白具有较好的免疫原性,免疫豚鼠产生血清抗体可中和RV和PV2在体外细胞上的感染;进一步为研发RV/PV2嵌合疫苗提供了较好的基础。

关键词：轮状病毒脊灰病毒抗原表位嵌合蛋白免疫原性

A组人轮状病毒NSP2基因的克隆、表达及免疫学性质研究(英文)

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中国生物工程杂志 2009年第2期29卷 17-23页

作者：范耀春文喻玲尹兴晓李传印陈元鼎中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所昆明650118

轮状病毒非结构蛋白NSP2在病毒基因组复制过程中起重要作用。在原核系统中重组表达了来自中国的第一株全基因组被克隆和研究了的轮状病毒NSP2,并进一步对其免疫学性质进行了研究。结果显示,在大肠杆菌中能够高效表达重组NSP2蛋白,而且... 详细信息

轮状病毒非结构蛋白NSP2在病毒基因组复制过程中起重要作用。在原核系统中重组表达了来自中国的第一株全基因组被克隆和研究了的轮状病毒NSP2,并进一步对其免疫学性质进行了研究。结果显示,在大肠杆菌中能够高效表达重组NSP2蛋白,而且该蛋白能够诱发豚鼠产生特异性抗体。Western blot和免疫荧光检测表明所得抗体不仅能与该重组NSP2蛋白发生特异性反应,而且可以与轮状病毒SA11株或Wa株感染的MA104细胞中表达的NSP2发生反应。以上这些结果为进一步研究该重组NSP2蛋白的结构。

关键词：轮状病毒 NSP2 重组表达免疫学性质

轮状病毒VP4抗原表位在VP6载体蛋白同一位点表达比较研究

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中国生物工程杂志 2015年第8期35卷 9-15页

作者：夏文跃王晶赵冰心潘小霞文喻玲陈元鼎中国医学科学研究院&北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室昆明650118 云南民族大学化学与生物技术学院民族药资源化学国家民委-教育部重点实验室昆明650118

目的:评价轮状病毒(RV)VP4两个抗原表位插入VP6载体蛋白同一位点所表达的重组嵌合蛋白免疫学性质及在研制嵌合蛋白疫苗中的意义。方法:采用分子克隆和基因重组技术将RV VP4的两个抗原表位插入到VP6载体蛋白同一位点上,构建重组抗原表达... 详细信息

目的:评价轮状病毒(RV)VP4两个抗原表位插入VP6载体蛋白同一位点所表达的重组嵌合蛋白免疫学性质及在研制嵌合蛋白疫苗中的意义。方法:采用分子克隆和基因重组技术将RV VP4的两个抗原表位插入到VP6载体蛋白同一位点上,构建重组抗原表达质粒,表达携带不同抗原表位的重组嵌合蛋白,用Western blot和中和试验分析重组嵌合蛋白的抗原反应性和免疫原性。结果:成功构建了两个嵌合蛋白表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达;表达的嵌合蛋白可与相应抗体特异性反应;可诱导豚鼠产生特异性血清抗体;抗嵌合蛋白血清抗体可特异性识别载体蛋白VP6F,Wa株病毒的VP6和VP4蛋白,可中和Wa株病毒在MA104细胞上的感染性;结果表明,所构建和表达的两个以VP6为载体的VP4抗原表位嵌合蛋白具有较高抗原反应性和免疫原性;嵌合蛋白携带的VP4抗原表位具有增强载体蛋白免疫原性作用;为研制新型RV重组蛋白疫苗的奠定了较好的基础。

关键词：轮状病毒抗原表位重组嵌合蛋白载体重组嵌合蛋白免疫原性

轮状病毒结构蛋白VP6的原核表达及其作为检测抗原在病毒检测中的应用

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中国生物制品学杂志 2012年第6期25卷 730-733页

作者：袁静潘小霞滕玉梅姬秋彦文喻玲陈元鼎中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研究与开发重点实验室昆明650118

目的原核表达轮状病毒(Rotavirus,RV)结构蛋白VP6,并初步应用于以VP6为检测抗原检测RV血清抗体的ELISA方法,用于不同型RV免疫后抗体水平的检测。方法提取TB-Chen株RV基因组RNA,采用RT-PCR法扩增VP6基因,插入表达载体pETL中,构建重组表... 详细信息

目的原核表达轮状病毒(Rotavirus,RV)结构蛋白VP6,并初步应用于以VP6为检测抗原检测RV血清抗体的ELISA方法,用于不同型RV免疫后抗体水平的检测。方法提取TB-Chen株RV基因组RNA,采用RT-PCR法扩增VP6基因,插入表达载体pETL中,构建重组表达质粒pET-VP6,转化E.coli BL21(DE3),表达rVP6。表达的rVP6经纯化后,与TB-Chen株(G2P[4]型)、Wa株(G1P[8]型)和SA11株(G3P[2]型)RV分别免疫豚鼠,制备血清抗体,以SA11株血清抗体,经Western blot鉴定纯化的rVP6,以纯化的rVP6为检测抗原,采用ELISA法检测不同型RV免疫血清抗体。结果重组表达质粒pET-VP6经双酶切和测序鉴定证明构建正确;表达的rVP6相对分子质量约为45 000,表达量占菌体总蛋白的34.7%;纯化的rVP6纯度达90%以上,蛋白浓度为8.304μg/μl,可与豚鼠抗RV SA11株血清抗体发生特异性反应;以纯化的rVP6为检测抗原,可检测TB-Chen、Wa、SA11株和抗rVP6的豚鼠免疫血清抗体。结论成功地在大肠杆菌中表达了rVP6,以具有共同组/亚组抗原特异性的rVP6作为检测抗原,可检测同一组/亚组内不同型的RV血清抗体,为研制以VP6为检测抗原检测RV感染的ELISA试剂盒奠定了基础。

关键词：轮状病毒属病毒结构蛋白质类 VP6 酶联免疫吸附测定

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树鼩EB病毒有关补体结合抗体的研究

中国医学科学院学报 1982年第5期4卷 313-315页

作者：吴小闲唐恩华谢广珍文喻玲刘名英朱宝友梁梧生代长柏肖慧芳代宗祥中国医学科学院医学生物学研究所中国医学科学院医学生物学研究所昆明

EB病毒的有关补体结合抗体(简称补结抗体)分布于各种灵长类。有人用间接免疫荧光法也检出黑猩猩和旧大陆猴的EB病毒壳抗原(EB-VCA)抗体,新大陆猴和原猴类则无此抗体。EB病毒有关抗体的来源和本质还不清楚。本文观察原猴类中树鼩的血清E... 详细信息

EB病毒的有关补体结合抗体(简称补结抗体)分布于各种灵长类。有人用间接免疫荧光法也检出黑猩猩和旧大陆猴的EB病毒壳抗原(EB-VCA)抗体,新大陆猴和原猴类则无此抗体。EB病毒有关抗体的来源和本质还不清楚。本文观察原猴类中树鼩的血清EB病毒有关补结抗体动态,初步探讨它的特异性及与树鼩自身疱疹病毒感染间的关系。材料和方法 (一)血清来源采自云南中部的树鼩(Tupaiabelangeri chinensis)。从1:5稀释度开始试验。 (二)补结试验方法含EB病毒的B95-8细胞株(本院肿瘤所提供)和不含EB病毒的BJAB细胞株(本院病毒所提供)的粗制抗原用常规传代细胞制备,PBS洗涤并配成约10~7细胞/毫升,用液氮冻融或

关键词：细胞株抗原简称中和抗体 EB

用免疫荧光单克隆抗体对脊髓灰质炎病毒抗原表位的分析

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病毒学杂志 1989年第2期2卷 135-142页

作者：唐恩华庄俊英王立言刘名英文喻玲阮永良谢天宏郭仁中国医学科学院医学生物学研究所

用间接免疫荧光与中和试验筛选出来的抗脊髓灰质炎2型与3型不同毒株的12个单克隆抗体,其中3个仅有免疫荧光活性,9个具有中和与免疫荧光活性。用免疫荧光活性的单克隆抗体进行试验,发现它们在识别特异性抗原表位方面与中和性单克隆抗体相... 详细信息

用间接免疫荧光与中和试验筛选出来的抗脊髓灰质炎2型与3型不同毒株的12个单克隆抗体,其中3个仅有免疫荧光活性,9个具有中和与免疫荧光活性。用免疫荧光活性的单克隆抗体进行试验,发现它们在识别特异性抗原表位方面与中和性单克隆抗体相似,显示出株特异的、几个毒株共同特异的或型特异的抗原表位。根据表位分布关系及特征,可以用来鉴别型内毒株的特征、毒株的抗原分析、抗原变异的研究以及疫苗相关病例的鉴别。所得结果与中和性单克抗隆抗体及T1-寡核苷酸指纹图谱分析一致。而免疫荧光单克隆抗体识别抗原表位的活性范围比中和性单克隆抗体更广。另外还发现某些兼有荧光与中和两活性的同一个单克隆抗体,用不同方法(IF与NT)进行试验时,与相同毒株出现不同表位反应,这点是值得引起注意需待进一步证实的重要问题。

关键词：脊髓灰质炎抗原表位单克隆抗体