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Notch信号在盐酸法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元分化过程中的作用

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中国应用生理学杂志 2010年第4期26卷 428-432页

作者：赵二义王留东文全庆关文娟景黎君彭涛文国强贾延劼海南省人民医院神经内科海口570311 郑州大学第一附属医院神经内科河南郑州450052

目的:探讨Notch信号通路在盐酸法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化中的作用。方法:实验分为未转染组、转染组(转染Rn-Notch1-siRNA)、阳性对照组(转染Rn-MAPK-1 Control siRNA)及阴性对照组(转染Negative Control siR... 详细信息

目的:探讨Notch信号通路在盐酸法舒地尔诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元分化中的作用。方法:实验分为未转染组、转染组(转染Rn-Notch1-siRNA)、阳性对照组(转染Rn-MAPK-1 Control siRNA)及阴性对照组(转染Negative Control siRNA)等4组。采用盐酸法舒地尔诱导大鼠MSCs分化为神经元。倒置荧光显微镜下观察MSCs转染后荧光表达情况;RT-PCR检测Notch1、Hes1和MAPK1 mRNA的表达变化;免疫细胞化学法检测Notch1、神经元烯醇化酶(NSE)、神经微丝蛋白亚单位(NF-M)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化;MTT方法检测细胞存活率。结果:①siRNA转染72h,MSCs荧光表达最强,转染率可达91.3%±4.2%;同时,转染组MSCs的Notch1和Hes1 mRNA转录下降(P<0.05);MTT提示转染组细胞存活率也显著减少(P<0.05)。②盐酸法舒地尔可以诱导MSCs向神经元分化,其中以转染组诱导效果最佳,NSE、NF-M的表达率显著的高于其它各组(P<0.05)。结论:盐酸法舒地尔在诱导大鼠MSCs向神经元分化过程中,可能存在Notch信号通路与RhoA/Rho激酶通路信号的协同作用,共同促进MSCs向神经元分化。

关键词： Notch Rho 盐酸法舒地尔骨髓间充质干细胞神经元

盐酸法舒地尔对体外培养大鼠神经干细胞分化的影响

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山东医药 2010年第9期50卷 28-29页

作者：沈雷张博爱贾延劼石进峰关文娟赵二义文全庆郑州大学第一附属医院河南省高等学校临床医学重点学科开放实验室郑州450052

目的观察盐酸法舒地尔对体外培养神经干细胞(NSCs)分化的影响。方法体外分离培养NSCs,通过不同浓度的盐酸法舒地尔干预后,采用免疫细胞化学及流式细胞技术检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果分离培养的... 详细信息

目的观察盐酸法舒地尔对体外培养神经干细胞(NSCs)分化的影响。方法体外分离培养NSCs,通过不同浓度的盐酸法舒地尔干预后,采用免疫细胞化学及流式细胞技术检测神经元特异性烯醇化酶(NSE)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果分离培养的NSCs具有自我复制、增殖能力,可以表达Nestin;诱导分化后的细胞可以表达NSE和GFAP。免疫细胞化学染色提示,盐酸法舒地尔干预组NSE阳性细胞显著高于对照组(P0.05)。流式细胞仪检测结果显示,盐酸法舒地尔干预组NSE阳性细胞比例明显增加,与对照组相比有统计学差异(P<0.05)。结论盐酸法舒地尔可以促进NSCs向神经细胞方向分化。

关键词：盐酸法舒地尔神经干细胞神经元分化

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织小RNA表达的变化

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中国当代儿科杂志 2010年第5期12卷 373-376页

作者：彭涛贾延劼文全庆关文娟赵二义张博爱郑州大学第一附属医院神经内科河南郑州450052

目的观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)皮层小RNA(microRNA,miRNA)差异表达,以研究其在HIBD的病理生理中的作用。方法建立新生大鼠HIBD模型14 d后,取皮层脑组织,miRNA表达谱芯片检测miRNA差异表达。实时定量PCR检测miR-126、-26a、-67... 详细信息

目的观察新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)皮层小RNA(microRNA,miRNA)差异表达,以研究其在HIBD的病理生理中的作用。方法建立新生大鼠HIBD模型14 d后,取皮层脑组织,miRNA表达谱芯片检测miRNA差异表达。实时定量PCR检测miR-126、-26a、-674-5p、-21、-25、-290和miR-124、-125b-5p、-9a等9个miRNA。结果 miRNA表达谱芯片结果提示,与对照组比较,HIBD大鼠皮层脑组织中27个已知miRNA表达上调2倍以上;60个表达下调2倍以上。实时定量PCR检测所选择的9个miRNA结果与miRNA芯片结果具有同样趋势。结论 HIBD模型大鼠miRNA表达有明显差异,这些改变可能在HIBD的病理生理中起着重要作用。

关键词：小RNA 缺氧缺血性脑损伤新生大鼠

盐酸法舒地尔体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性

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郑州大学学报（医学版） 2010年第4期45卷 559-562页

作者：彭涛滕军放关文娟文全庆张博爱贾延劼郑州大学第一附属医院神经内科郑州450052

目的:探讨Rho/Rho激酶(ROCK)抑制剂盐酸法舒地尔体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的可行性。方法:全骨髓培养法分离培养大鼠骨髓MSCs,用200μmol/L盐酸法舒地尔诱导分化。倒置显微镜观察诱导不同时间细胞的形态学... 详细信息

目的:探讨Rho/Rho激酶(ROCK)抑制剂盐酸法舒地尔体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)向神经元样细胞分化的可行性。方法:全骨髓培养法分离培养大鼠骨髓MSCs,用200μmol/L盐酸法舒地尔诱导分化。倒置显微镜观察诱导不同时间细胞的形态学变化;AO-EB染色法鉴定诱导后细胞存活率;免疫荧光法鉴定诱导后神经元特异性烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF200)与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,判断其分化情况。结果:盐酸法舒地尔诱导30、60、90、120及180min后细胞存活率分别为(96.7±2.2)%、(95.3±1.9)%、(93.8±1.8)%、(92.5±2.1)%及(90.1±1.3)%,其中以盐酸法舒地尔诱导120min后,形态变化最为理想。盐酸法舒地尔诱导60、90、120及180min后,NSE阳性表达率分别为(66.5±1.9)%、(88.1±3.2)%、(93.6±1.9)%和(93.5±5.4)%,NF200阳性表达率分别为(70.1±2.9)%、(89.5±1.3)%、(98.1±1.6)%和(98.3±1.9)%,而GFAP阳性表达率均小于5%。结论:盐酸法舒地尔可在体外快速、高效地诱导大鼠MSCs向神经元样细胞分化。

关键词：盐酸法舒地尔骨髓间充质干细胞分化神经元大鼠

EphA4在海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡中的表达及天麻素的影响

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中国病理生理杂志 2009年第10期25卷 1917-1921页

作者：赵燕玲张博爱贾延劼籍炀飞孙桂芳文全庆郑州大学第一附属医院神经内科河南郑州450052

目的:探讨EphA4在海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡过程中的表达变化,及天麻素对EphA4表达的影响。方法:提取新生大鼠大脑皮层神经元体外培养,7d后随机分为对照组、海人酸模型组、海人酸+天麻素干预组;采用倒置相差显微镜观察神经元形... 详细信息

目的:探讨EphA4在海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡过程中的表达变化,及天麻素对EphA4表达的影响。方法:提取新生大鼠大脑皮层神经元体外培养,7d后随机分为对照组、海人酸模型组、海人酸+天麻素干预组;采用倒置相差显微镜观察神经元形态学变化,Hoechst33258荧光染色、AO/EB荧光染色、LDH活性测定检测神经元凋亡和坏死情况,CY3荧光染色检测EphA4表达变化。结果:海人酸模型组较对照组神经元凋亡率显著升高(P<0.01),EphA4表达显著增高(P<0.01);海人酸+天麻素干预组较海人酸模型组神经元凋亡率显著下降,EphA4表达上调显著受抑。结论:海人酸诱导大鼠大脑皮层神经元凋亡过程中EphA4表达增高,天麻素在这一过程中抑制EphA4表达,对神经元具有一定保护作用。

关键词： EphA4 海人酸神经元细胞凋亡天麻素

DSCAM在大鼠骨髓间质干细胞分化为神经细胞中的表达变化

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中国当代儿科杂志 2009年第6期11卷 486-489页

作者：王明闯贾延劼文全庆关文娟赵二义王留东张博爱郑州大学第一附属医院神经内科河南郑州450052

目的研究唐氏综合征细胞粘附分子(DSCAM)在大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经细胞中的作用。方法在建立黄芩苷诱导大鼠MSCs分化为神经细胞的基础上,采用免疫细胞化学法、Western blot法等检测DSCAM的表达变化;同时采用RNA干扰技术,观... 详细信息

目的研究唐氏综合征细胞粘附分子(DSCAM)在大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经细胞中的作用。方法在建立黄芩苷诱导大鼠MSCs分化为神经细胞的基础上,采用免疫细胞化学法、Western blot法等检测DSCAM的表达变化;同时采用RNA干扰技术,观察DSCAM-siRNA转染MSCs后诱导分化情况。结果诱导前大鼠MSCs不表达DSCAM;预诱导液诱导24h,MSCs开始少量表达DSCAM(1.71±0.67)%;黄芩甙诱导6h,部分表达DSCAM(15.79±4.24)%;诱导后3d,DSCAM表达最高(53.16±5.94)%;诱导后6d,DSCAM表达明显下降(28.99±6.72)%。DSCAM-siRNA转染MSCs,DSCAM表达显著下降。而且,诱导前MSCs不表达神经细胞特异性标记蛋白β-ⅡI-tubulin;诱导6h,β-ⅡI-tubulin表达为(1.40±0.79)%,诱导3d达到(41.59±3.17)%,诱导6d为(59.11±4.76)%。但是,DSCAM-siRNA转染MSCs,诱导3d,6d,β-ⅡI-tubulin蛋白的表达显著下降,分别为(28.57±2.91)%和(43.90±12.31)%。结论DSCAM可能在MSCs分化为神经细胞中起到重要的作用。

关键词：唐氏综合征细胞粘附分子骨髓间质干细胞神经细胞 RNA干扰大鼠

P2Y_1受体介导Aβ_(25-35)所致大鼠星形胶质细胞活化

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中国病理生理杂志 2011年第1期27卷 67-71页

作者：常利张博爱贾延劼付振强沈雷石进峰文全庆赵二义郑州大学第一附属医院神经内科河南郑州450052

目的:观察嘌呤受体P2Y1在Aβ25-35所致的大鼠星形胶质细胞活化中所起的作用。方法:体外分离培养大鼠星形胶质细胞,按空白对照、Aβ25-35和P2Y1受体阻断剂MRS2179+Aβ25-35和MRS2179分组干预后,通过免疫细胞化学、免疫荧光法和Western bl... 详细信息

目的:观察嘌呤受体P2Y1在Aβ25-35所致的大鼠星形胶质细胞活化中所起的作用。方法:体外分离培养大鼠星形胶质细胞,按空白对照、Aβ25-35和P2Y1受体阻断剂MRS2179+Aβ25-35和MRS2179分组干预后,通过免疫细胞化学、免疫荧光法和Western blotting方法观察GFAP和P2Y1表达的变化。结果:各组细胞数量无明显变化。与对照组相比,Aβ25-35组GFAP荧光强度明显增加;MRS2179+Aβ25-35和MRS2179组均降低,两组间无明显差异。Western blotting显示GFAP在各组间表达与免疫荧光法有相似趋势;与对照组相比,P2Y1表达在Aβ25-35组明显增多(P0.05)。结论:Aβ25-35通过P2Y1受体活化激活星形胶质细胞。

关键词：受体,P2Y1 淀粉样β蛋白星形细胞

天麻素对海人酸干预的大鼠神经干细胞分化的影响

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郑州大学学报（医学版） 2009年第3期44卷 509-512页

作者：孙桂芳张博爱贾延劼文全庆籍炀飞赵燕玲李京红郑州大学第一附属医院神经内科郑州450052

目的:研究天麻素对海人酸干预的神经干细胞分化的影响及其机制。方法:体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,通过免疫组织化学法和免疫荧光法进行鉴定。将神经干细胞分为3组:第1组不加药为空白对照组,第2组加入不同浓度梯度的海人酸,... 详细信息

目的:研究天麻素对海人酸干预的神经干细胞分化的影响及其机制。方法:体外分离并培养新生Wistar大鼠神经干细胞,通过免疫组织化学法和免疫荧光法进行鉴定。将神经干细胞分为3组:第1组不加药为空白对照组,第2组加入不同浓度梯度的海人酸,第3组加入天麻素和不同浓度梯度海人酸,计算分化后神经元和胶质细胞比例。结果:培养的细胞具有自我更新和向神经元、少突胶质细胞和星形胶质细胞分化的潜能,是神经干细胞。海人酸可以有效诱导神经干细胞向胶质细胞分化,天麻素可在一定程度上阻断海人酸的作用,诱导神经干细胞向神经元分化。结论:天麻素可减少海人酸兴奋性的影响,诱导神经干细胞向神经元分化。

关键词：神经干细胞分化天麻素海人酸 Wistar大鼠

Caveolin-1在大鼠骨髓间质干细胞分化为神经细胞中的作用

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中国病理生理杂志 2010年第7期26卷 1385-1389页

作者：王留东赵二义文全庆关文娟鲁晶晶彭涛张博爱贾延劼郑州大学第一附属医院神经内科河南郑州450052

目的:探讨caveolin-1在骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经细胞中的作用。方法:实验分为未转染组、转染组(转染Rn-caveolin-1-siRNA)、阳性对照组(转染Rn-MAPK-1control siRNA)及阴性对照组(转染negative control siRNA)4组。采用β-巯基... 详细信息

目的:探讨caveolin-1在骨髓间质干细胞(MSCs)分化为神经细胞中的作用。方法:实验分为未转染组、转染组(转染Rn-caveolin-1-siRNA)、阳性对照组(转染Rn-MAPK-1control siRNA)及阴性对照组(转染negative control siRNA)4组。采用β-巯基乙醇诱导大鼠MSCs分化为神经细胞。倒置荧光显微镜下观察MSCs转染后荧光表达情况;RT-PCR检测caveolin-1和促分裂原活化蛋白激酶1(MAPK1)mRNA的表达变化;免疫细胞化学法检测caveolin-1、神经元烯醇化酶(NSE)、神经微丝亚单位(NF-M)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达变化;MTT方法检测细胞存活率。结果:(1)siRNA转染72h,MSCs荧光表达最强,转染率可达(81.5±2.8)%;而且转染组MSCs的caveolin-1mRNA转录下降(P0.05)。(2)β-巯基乙醇可以诱导MSCs向神经细胞分化,其中以转染组诱导效果最佳,NSE、NF-M的表达率显著高于其它各组(P<0.01)。(3)随诱导时间延长,各组caveolin-1表达持续增加,诱导6d达到峰值,与诱导前、诱导6h相比有显著差异(P<0.05)。此外,转染组与其它各组同时点的caveolin-1表达均显著降低(P<0.01)。结论:以caveolin-1为标记蛋白的脂筏在MSCs诱导分化为神经细胞中可能起到重要的调控作用。

关键词：骨髓间质干细胞神经元 Caveolin-1 RNA干扰脂质筏