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CD44v3在透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外粘附和侵袭中的作用

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中国肿瘤临床 2006年第23期33卷 1321-1324页

作者：卓文磊王彦陈正堂敖绪军第三军医大学新桥医院全军肿瘤中心重庆市400037 第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所重庆市400037

目的:研究CD44v3在透明质酸诱导A549细胞体外粘附和侵袭中的作用。方法:设计和构建能产生针对CD44v3的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)的RNA干扰质粒,转染A549细胞,以RT-PCR和Westernblot检测A549细胞转染前后CD44v3表达,以平板粘附... 详细信息

目的:研究CD44v3在透明质酸诱导A549细胞体外粘附和侵袭中的作用。方法:设计和构建能产生针对CD44v3的短发夹RNA(shorthairpinRNA,shRNA)的RNA干扰质粒,转染A549细胞,以RT-PCR和Westernblot检测A549细胞转染前后CD44v3表达,以平板粘附模型和波登氏小室模型检测A549细胞转染前后粘附和侵袭能力。结果:和转染前相比,转染了RNA干扰质粒的A549细胞CD44v3mRNA和蛋白表达以及受透明质酸诱导而粘附于平板和穿过波登氏小室隔膜的细胞数皆明显减少(P<0.01)。结论:CD44v3介导了透明质酸诱导人肺腺癌A549细胞体外粘附和侵袭行为。

关键词： RNA干扰 CD44v3 粘附侵袭 A549细胞

RNA干扰阻滞胸腺素β4表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化的抑制作用

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解放军医学杂志 2008年第9期33卷 1092-1095页

作者：张璟卓文磊王彦敖绪军郑颖第三军医大学新桥医院肾内科、全军肾脏病中心、重庆市肾病研究所重庆400037 第三军医大学新桥医院肿瘤科重庆400037 全军呼吸内科研究所

目的探讨RNA干扰阻滞胸腺素β4表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)的抑制作用。方法构建能表达针对胸腺素β4的小干扰RNA(siRNA)的重组腺病毒载体,以及表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照载体,分别感染人肾... 详细信息

目的探讨RNA干扰阻滞胸腺素β4表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)的抑制作用。方法构建能表达针对胸腺素β4的小干扰RNA(siRNA)的重组腺病毒载体,以及表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照载体,分别感染人肾小管上皮细胞株(HKC),得到胸腺素β4表达受抑制的HKC-siTβ4和胸腺素β4表达未受影响的HKC-siC。根据用TGF-β1处理HKC、HKC-siTβ4和HKC-siC的情况,将培养的细胞分为4组:正常HKC组(C组),TGF-β1处理HKC组(T+C组),TGF-β1处理HKC-siTβ4组(T+siTβ4组)和TGF-β1处理HKC-siC组(T+siC组)。48h后,分别采用RT-PCR和Western blotting检测各组胸腺素β4、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素表达,并分析胸腺素β4和α-SMA表达量的相关性。结果C组胸腺素β4表达弱阳性,α-SMA表达阴性,E-钙黏素表达强阳性;T+C组胸腺素β4和α-SMA表达强阳性,E-钙黏素表达较C组减弱(P0.05)。胸腺素β4和α-SMA表达呈显著正相关。结论RNAi阻滞胸腺素β4表达能有效地抑制TGF-β1诱导EMT,提示胸腺素β4是介导TGF-β1诱导EMT的重要分子。

关键词：胸腺素β1 肾小管上皮细胞成纤维细胞 RNA,小分子干扰

整合素连接激酶在人肾间质纤维化组织中的表达及意义

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第三军医大学学报 2005年第22期27卷 2262-2265页

作者：陈秋张璟敖绪军第三军医大学新桥医院肾内科全军肾脏病中心重庆市肾病研究所重庆400037

目的探讨在慢性肾脏病患者肾间质中ILK的表达和其在肾间质纤维化发生、发展中的意义。方法选择各型慢性肾脏病患者49例,按肾间质病理损伤程度对肾组织标本进行分组:正常对照组4例,轻度损伤组17例,中度损伤组16例,重度损伤组12例。用免... 详细信息

目的探讨在慢性肾脏病患者肾间质中ILK的表达和其在肾间质纤维化发生、发展中的意义。方法选择各型慢性肾脏病患者49例,按肾间质病理损伤程度对肾组织标本进行分组:正常对照组4例,轻度损伤组17例,中度损伤组16例,重度损伤组12例。用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测肾间质的ILK、TGFβ1、E-cad-herin和FN表达面积,并将ILK表达水平与患者血清肌酐(SCr)进行比较。结果肾小管上皮细胞是间质中ILK的主要来源,ILK表达量与肾小管间质病变程度呈正相关(P<0.01)。此外,ILK与TGFβ1和FN的表达量呈正相关(P均<0.01),而与E-cadherin的表达量呈负相关(P<0.01);ILK还与患者SCr升高水平呈正相关(P<0.01)。结论随着慢性肾小管间质病变程度加重,ILK的表达显著增加,因此它在肾间质纤维化形成中起重要作用。ILK作为TGFβ1的下游因子,可能通过促进肾小管上皮细胞的转分化(EMT)和细胞外基质(ECM),如FN等的合成增加,参与肾间质纤维化的发生。

关键词：整合素连接激酶肾小管上皮细胞的转分化肾间质病理损伤

肝细胞生长因子对人肾小管上皮细胞转分化的影响

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解放军医学杂志 2005年第6期30卷 494-497页

作者：敖绪军张璟卓文磊陈秋杨惠标第三军医大学新桥医院肾内科重庆400037

目的　观察肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子β1(TGF β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的影响。方法　将体外培养的HKC分为正常组、TGF β1组、HGF组、TGF β1+HGF组、延迟加入HGF组。应用间接免疫荧光技术观察HKC中αSMA蛋白、... 详细信息

目的　观察肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子β1(TGF β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HKC)转分化的影响。方法　将体外培养的HKC分为正常组、TGF β1组、HGF组、TGF β1+HGF组、延迟加入HGF组。应用间接免疫荧光技术观察HKC中αSMA蛋白、E cadherin的表达。用RT PCR技术检测细胞中αSMA mRNA的表达。结果　免疫荧光技术显示,TGF β1 能诱导HKC表达αSMA蛋白,减少E cadherin表达;同时加入HGF能减少αSMA蛋白表达,而延迟加入HGF能使部分转分化的HKC细胞恢复E cadherin的表达。RT PCR结果显示,正常组无αSMA mRNA表达,TGF β1可诱导HKC表达αSMA mRNA;同时加入HGF后αSMA mRNA基本无表达,而延迟加入HGF后αSMA mRNA表达明显下降。结论　TGF β1可诱导肾小管上皮细胞转分化,而HGF能抑制TGF β1诱导的转分化,延迟加入HGF能使部分发生转分化的肾小管细胞恢复上皮表型。

关键词：肝细胞生长因子转化生长因子β 上皮细胞肌成纤维细胞

双重免疫荧光染色法鉴定肺组织内CCA^+SP-C^+细胞

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肿瘤 2008年第1期28卷 32-35页

作者：钱莘敖绪军安江洪陈正堂第三军医大学附属新桥医院全军肿瘤中心重庆400037

目的:通过双重免疫荧光染色法鉴定不同肺组织内是否存在Clara细胞特异性抗原(Clara cell specific antigen,CCA)和肺泡表面活性蛋白C(surfactant protein C,SP-C)共表达的双阳性细胞(double positive cell,DPCs)CCA+SP-C+细胞,为后续开展肺干细胞的相关研究提供实验基础。方法:取成年鼠(小鼠、大鼠)和新生鼠(小鼠、大鼠)的正常肺组织,人的肺鳞癌、腺癌的癌组织和癌旁组织,冰冻切片,进行双重免疫荧光染色,通过激光扫描共聚焦显微镜观察肺组织内是否存在DPCs。每例标本观察时镜下随机选择4~6个视野,计数100~200个肺细胞,得出每百个细胞内DPCs百分率,采用SPSS 11.0统计软件包对数据进行分析。结果:在成年鼠和新生鼠的正常肺组织中均发现了DPCs的存在,在人的肺腺癌组织中也发现了DPCs,而在鳞癌组织中未见DPCs;在人的癌旁组织DPCs数量明显多于相对应的癌组织(P<0.05)。结论:本研究不仅证实了DPCs细胞存在的广泛性,而且在人的肺腺癌组织中发现了DPCs,同时发现癌旁组织内的DPCs明显多于癌组织,为后续进一步分离、纯化DPCs,研究正常肺干细胞和肺癌干细胞的生物学特性提供了实验基础。

关键词：癌,非小细胞肺荧光抗体技术抗原,表面肺表面活性物质相关蛋白质C 肿瘤干细胞

人胸腺素β_4基因对人肾小管上皮细胞转分化的影响

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重庆医学 2009年第17期38卷 2184-2186,2188页

作者：张璟郑颖敖绪军第三军医大学新桥医院肾内科全军肾脏病中心重庆市肾病研究所重庆400037

目的研究胸腺素β4基因对人肾小管上皮细胞株(HKC)上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)的影响。方法采用RT-PCR和T-A克隆技术,从SW480细胞中扩增胸腺素β4基因全长cDNA,克隆到T载体中,再亚克隆到pIRES2-EGFP质粒载体,得到表达胸腺素β4基因的... 详细信息

目的研究胸腺素β4基因对人肾小管上皮细胞株(HKC)上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)的影响。方法采用RT-PCR和T-A克隆技术,从SW480细胞中扩增胸腺素β4基因全长cDNA,克隆到T载体中,再亚克隆到pIRES2-EGFP质粒载体,得到表达胸腺素β4基因的真核表达载体和阴性对照载体,转染HKC,得到胸腺素β4表达增强的HKC-Tβ4和胸腺素β4表达未受影响的HKC-EGFP。分别采用RT-PCR和Western blot检测HKC、HKC-Tβ4和HKC-EGFP 3组细胞胸腺素β4、α-平滑肌肌动蛋白(-αSMA)和E-钙黏素表达。结果与HKC组及HKC-EGFP组相比,HKC-Tβ4组胸腺素β4和-αSMA表达显著增高,E-钙黏素表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论胸腺素β4基因转染能诱导HKC发生EMT,提示胸腺素β4是诱导EMT的重要分子,可能成为肾纤维化治疗的靶目标。

关键词：胸腺素β4 人肾小管上皮细胞肌成纤维细胞真核表达载体转分化

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微RNA与肺癌

生命的化学 2007年第6期27卷 536-538页

作者：敖绪军陈正堂第三军医大学新桥医院全军肿瘤研究所重庆400037

微RNA(miRNA)是一类约22nt的小分子非编码RNA,在转录后水平调控蛋白质的表达。大部分微RNA在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点上,与肿瘤的发生、发展关系密切。在肺癌组织中,某些微RNA表达水平升高,而某些表达下降,它们充当"癌基因"... 详细信息

微RNA(miRNA)是一类约22nt的小分子非编码RNA,在转录后水平调控蛋白质的表达。大部分微RNA在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点上,与肿瘤的发生、发展关系密切。在肺癌组织中,某些微RNA表达水平升高,而某些表达下降,它们充当"癌基因"或者"抑癌基因"的角色,可能在肺癌的诊断、治疗及预后监测中发挥重要作用。

关键词： miRNA 非编码RNA 肺癌

CXCR4阳性Lewis肺癌细胞具有促发新生血管形成的特征

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重庆医学 2009年第22期38卷 2825-2826,2830,I0003页

作者：辇伟奇陈芳琳敖绪军陈正堂第三军医大学新桥医院全军肿瘤研究所重庆400037 解放军第五三二医院普通外科安徽黄山245041

目的研究CXCR4阳性Lewis肺癌细胞(LLC)在新生血管形成时的始动作用。方法激光共聚焦检测LLC细胞系中CXCR4抗原表达情况,观察小鼠移植瘤组织内CXCR4阳性LLC与新生血管的毗邻关系;以CXCR4作为磁珠分选细胞的表面标志,检测CXCR4阳性和阴性... 详细信息

目的研究CXCR4阳性Lewis肺癌细胞(LLC)在新生血管形成时的始动作用。方法激光共聚焦检测LLC细胞系中CXCR4抗原表达情况,观察小鼠移植瘤组织内CXCR4阳性LLC与新生血管的毗邻关系;以CXCR4作为磁珠分选细胞的表面标志,检测CXCR4阳性和阴性LLC中VEGF、MMP9 mRNA表达情况,同时免疫组化检测两亚群细胞移植瘤中VEGF、MMP9以及CD31表达情况。结果CXCR4阳性LLC多毗邻内皮细胞,周围形成血管样结构;CXCR4阳性LLC的VEGF mR-NA表达(0.439 8±0.059)明显高于CXCR4阴性LLC(0.289 9±0.003 1)(P<0.01);CXCR4阳性LLC的MMP9 mRNA表达(0.622 3±0.013 6)明显高于CXCR4阴性LLC(0.579 2±0.017 4)(P<0.05);CXCR4阳性LLC移植瘤组织MVD(56.87±4.83)明显高于CXCR4阴性LLC移植瘤(43.52±4.91)(P<0.01)。结论LLC中的CXCR4阳性亚群具有更强上调VEGF、MMP9表达的能力,具有促发新生血管形成的特征。

关键词： Lewis肺癌细胞 CXCR4 新生血管形成

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HGF抗肾脏纤维化机制的研究进展

国外医学（生理病理科学与临床分册） 2005年第3期25卷 227-229页

作者：敖绪军张璟第三军医大学附属新桥医院肾内科重庆400037

转化生长因子β1(TGF-β1)是一种重要的促纤维化因子,它主要通过激活Smad通路促进肾脏纤维化的发生和发展。而肝细胞生长因子(HGF)被认为是一种抗纤维化因子,它的抗纤维化作用与消除TGF-β1的作用密不可分,它能以不同的方式阻断TGF-β1... 详细信息

转化生长因子β1(TGF-β1)是一种重要的促纤维化因子,它主要通过激活Smad通路促进肾脏纤维化的发生和发展。而肝细胞生长因子(HGF)被认为是一种抗纤维化因子,它的抗纤维化作用与消除TGF-β1的作用密不可分,它能以不同的方式阻断TGF-β1的信号转导。在系膜细胞中,HGF通过稳定TGIF(TGinteractingfactor,TGIF)蛋白以中断TGF-β1信号的转导;在间质成纤维细胞中,HGF阻止Smad复合物核转移而中断TGF-β1信号转导;在肾小管上皮细胞中,HGF增加另一种转录共抑制因子SnoN的表达。

关键词：肝细胞生长因子转化生长因子β1 信号转导肾疾病纤维变性