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3个罗非鱼种群对4种病原菌的抗病力差异比较

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南方农业学报 2020年第3期51卷 695-701页

作者：敖秋桅朱佳杰广西水产科学研究院/广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室南宁530021

【目的】比较吉富罗非鱼F5代(以下简称吉富F5代)、吉富罗非鱼F0代(以下简称吉富F0代)及奥尼罗非鱼对4种病原菌的抗病力差异,为罗非鱼苗种推广养殖提供参考依据。【方法】检测吉富F5代无乳链球菌(Ia和Ib血清型)、海豚链球菌和嗜水气单胞... 详细信息

【目的】比较吉富罗非鱼F5代(以下简称吉富F5代)、吉富罗非鱼F0代(以下简称吉富F0代)及奥尼罗非鱼对4种病原菌的抗病力差异,为罗非鱼苗种推广养殖提供参考依据。【方法】检测吉富F5代无乳链球菌(Ia和Ib血清型)、海豚链球菌和嗜水气单胞菌对吉富F5代的半致死浓度(LC50),并对3个罗非鱼种群进行人工腹腔注射感染4种病原菌,根据感染后的累计死亡率评估其抗病力差异。【结果】无乳链球菌Ia血清型对吉富F5代的LC50为2.14×10^5 CFU/mL,无链球菌Ib血清型对吉富F5代的LC50为2.14×10^6 CFU/mL,海豚链球菌对吉富F5代的LC50为2.14×10^7 CFU/mL,嗜水气单胞菌对吉富F5代的LC50为5.62×10^7 CFU/mL。3个罗非鱼种群感染病原菌后连续观察168 h发现,感染无乳链球菌Ia血清型菌株(HN016)的累计死亡率排序为吉富F0代>吉富F5代>奥尼罗非鱼;感染无乳链球菌Ib血清型菌株(GX26)的累计死亡率排序为吉富F0代>吉富F5代>奥尼罗非鱼;感染海豚链球菌菌株(GX05)的累计死亡率排序为吉富F0代>奥尼罗非鱼>吉富F5代;感染嗜水气单胞菌菌株(GX03)的累计死亡率排序为吉富F0代>吉富F5代>奥尼罗非鱼。方差分析结果显示,吉富F5代感染HN016、GX26、GX05和GX03后的累计死亡率均显著低于吉富F0代(P0.05)。【结论】经过连续5代选育后,吉富罗非鱼对无乳链球菌(Ia和Ib血清型)、海豚链球菌及嗜水气单胞菌的抗感染能力均得到显著提高,并已接近奥尼罗非鱼的抗病水平。

关键词：罗非鱼抗病性无乳链球菌海豚链球菌嗜水气单胞菌

不同罗非鱼品系感染无乳链球菌后对血液和肝胰腺生化指标的影响

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渔业科学进展 2020年第4期41卷 167-173页

作者：敖秋桅罗永巨吕敏朱佳杰广西壮族自治区水产科学研究院广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室南宁530021

为探究无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)感染后对罗非鱼的血液和肝胰腺生化指标的影响,本研究以吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)抗病选育系F5代、奥尼罗非鱼(Oreochromis aureus×O. niloticus)、吉富罗非鱼"百桂"品系为对象,通... 详细信息

为探究无乳链球菌(Streptococcusagalactiae)感染后对罗非鱼的血液和肝胰腺生化指标的影响,本研究以吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)抗病选育系F5代、奥尼罗非鱼(Oreochromis aureus×O. niloticus)、吉富罗非鱼"百桂"品系为对象,通过人工腹腔注射感染无乳链球菌,检测感染后不同时期肝胰腺和血液中的酸性磷酸酶(ACP)、碱性磷酸酶(AKP)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)和溶菌酶(LZM)活性的变化。结果显示,奥尼罗非鱼、吉富罗非鱼抗病选育系F5代和吉富罗非鱼"百桂"品系的平均死亡率分别为55.4%、60.5%和78.6%,表明奥尼罗非鱼抗感染能力最强;3个品系感染无乳链球菌后,肝胰腺组织中的ACP、AKP、SOD和T-AOC酶活力均呈先升高后下降的趋势,其中,在感染后24 h,奥尼罗非鱼的AKP和CAT酶活力显著高于吉富罗非鱼抗病选育系F5代和吉富罗非鱼"百桂"品系;而感染后24 h,血清中ACP、AKP、LZM、CAT和T-AOC酶均显著升高,而SOD酶则下降,其中,奥尼罗非鱼的ACP、AKP、CAT和T-AOC酶活性明显高于吉富罗非鱼抗病选育系F5代和吉富罗非鱼"百桂"品系。综合比较6种酶在感染后不同时期的活性变化及3个品系的感染存活率,筛选出AKP和CAT作为评估罗非鱼抗无乳链球菌感染能力强弱的指标。

关键词：罗非鱼无乳链球菌免疫酶

吉富罗非鱼感染无乳链球菌后肝脏组织多肽差异表达研究

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华北农学报 2016年第S1期31卷 485-489页

作者：朱佳杰付强敖秋桅陈明谭芸李莉萍蒋和生甘西广西水产科学研究院广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室广西南宁530021 广西大学广西南宁530004

为研究吉富罗非鱼感染无乳链球菌后肝脏组织多肽表达变化,采用串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF/TOF)扫描了吉富罗非鱼感染无乳链球菌24 h后与未感染的罗非鱼肝脏组织的多肽质谱峰值差异,并对表达差异的多肽峰值进行蛋白质质谱鉴定和功能... 详细信息

为研究吉富罗非鱼感染无乳链球菌后肝脏组织多肽表达变化,采用串联飞行时间质谱仪(MALDI-TOF/TOF)扫描了吉富罗非鱼感染无乳链球菌24 h后与未感染的罗非鱼肝脏组织的多肽质谱峰值差异,并对表达差异的多肽峰值进行蛋白质质谱鉴定和功能分类。结果显示:对照组检测到信噪比(s/n)大于50的质谱峰为44个,试验组为52个,发现6个质谱峰(m/z 1 082,1 161,1 196,1 459,1 740,1 877)在感染24 h后与未感染鱼之间的表达差异明显,其中质荷比(m/z)1 196在试验组表达下降,而质荷比(m/z)1 161和1 459则是上升。共鉴定得到19种多肽,其中14个表达上调,4个下调,1个无明显变化。经生物信息学分析,鉴定得到的多肽分别参与了三羧酸循环、DNA拼接和细胞防御3条信号调控通路。选择其中的ATP合成酶6(ATP6)和beta-羟基丁酸脱氢酶(Bhd1)基因进行qRT-PCR验证,发现ATP6基因在感染24 h后的转录水平显著升高,而Bhd1基因的转录水平则是显著降低,与多肽组相对定量的结果相符。研究结果为无乳链球菌病的早期诊断提供了新的参考依据。

关键词：吉富罗非鱼无乳链球菌多肽差异表达

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罗非鱼高密度遗传图谱构建及抗病QTL定位

南方农业学报 2024年

作者：陈燕芸李光略敖秋桅谭芸陈峰吴雪萍朱佳杰广西民族大学海洋与生物技术学院广西水产科学研究院

【目的】通过构建罗非鱼抗病遗传连锁图谱，挖掘出与抗病性状相关的QTL位点和候选基因，为开展分子标记辅助加快罗非鱼抗病新品种选育提供理论指导。【方法】以前期开展罗非鱼“壮罗1号”新品种选育过程中选获的抗病个体与易感病个体杂... 详细信息

【目的】通过构建罗非鱼抗病遗传连锁图谱，挖掘出与抗病性状相关的QTL位点和候选基因，为开展分子标记辅助加快罗非鱼抗病新品种选育提供理论指导。【方法】以前期开展罗非鱼“壮罗1号”新品种选育过程中选获的抗病个体与易感病个体杂交得到的F1代全同胞家系150个个体为作图群体，基于GWAS技术进行基因组重测序，利用GATK软件进行全基因组单核苷酸多态性（SNP）标记的挖掘，对过滤筛选到的高质量SNP标记利用Lepmap3软件构建高密度遗传连锁图谱，采用MapQTL 6.0的复合区间作图法对抗病性状相关QTL进行定位，然后利用定位区间所对应的物理位置，参考罗非鱼的基因组找到对应区间，并结合基因功能注释筛选抗病候选基因。【结果】该图谱的全长为1521.56 cM，共划分为22个连锁群，上图Bin标记有3029个，标记间平均距离为0.50 cM。结合抗病性状的表型数据，在图谱连锁群LG9上定位得到1个与无乳链球菌病抗性相关QTL，其置信区间为0.67～6.67 cM，对区间内的基因进行功能注释，筛选出5个免疫相关基因，分别为分离缺陷基因3（PARD3）、微管相关蛋白4（MAP4）、黏着斑蛋白基因（Svil）、Kruppel样因子（KLF6）及骨形态发生蛋白6（bmp6）。【结论】基于重测序技术绘制了罗非鱼抗病性状遗传连锁图谱，定位到抗病相关QTL 1个和抗病候选基因5个，为后续实施罗非鱼抗病性状分子标记辅助育种及抗病功能基因研究提供了技术支持。

关键词：罗非鱼抗病性遗传图谱 QTL 免疫相关基因

吉富罗非鱼感染无乳链球菌后体内病原菌定量分析

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基因组学与应用生物学 2015年第11期34卷 2415-2420页

作者：敖秋桅刘溪付强谭芸周宇甘西朱佳杰广西壮族自治区水产科学研究院/广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室南宁530021 广西大学南宁530004

为研究无乳链球菌感染吉富罗非鱼后病原菌在体内的动态分布规律,本研究采用q RT-PCR方法,以人工感染无乳链球菌的吉富罗非鱼抗病家系组和易感家系组为测试对象,检测了感染后不同时间段两组的肝脏、脾脏、前肾及脑组织的无乳链球菌含量... 详细信息

为研究无乳链球菌感染吉富罗非鱼后病原菌在体内的动态分布规律,本研究采用q RT-PCR方法,以人工感染无乳链球菌的吉富罗非鱼抗病家系组和易感家系组为测试对象,检测了感染后不同时间段两组的肝脏、脾脏、前肾及脑组织的无乳链球菌含量。结果表明:(1)抗病组和易感组出现死亡时间均主要集中在12~96 h,死亡率分别为25%和61.9%;(2)感染后3 h抗病组和易感组的肝脏、脾脏、前肾及脑组织的无乳链球菌数量逐渐增加,其中脑组织达到高峰值分别为感染后72 h和18 h,无乳链球菌含量分别为(11 366.86±739.04)copies/μL和(16 371.59±655.65)copies/μL,96 h后两组体内的无乳链球菌浓度逐渐减少,感染后144 h停止死亡,感染后30 d存活的个体中4个组织的无乳链球菌浓度逐渐下降至感染初期水平。本研究结果为罗非鱼无乳链球菌病的药物防治及抗病育种提供了技术依据。

关键词：吉富罗非鱼无乳链球菌 qRT-PCR

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吉富罗非鱼选育系生长性能的评估

西南农业学报 2016年第11期29卷 2758-2762页

作者：罗伟甘西敖秋桅谭芸李莉萍罗永巨蒋和生朱佳杰广西壮族自治区水产科学研究院广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室广西南宁530021 广西大学广西南宁530004

为评估吉富罗非鱼抗病选育系P4代的生长性能,对P4代34个家系的体质量、体长、体高、体宽进行测定和比较分析。结果显示,各个家系的生长速度存在较大的差异,其中14号家系的生长速度最快,34号家系最慢,两个家系间的平均收获体质量相差1.26... 详细信息

为评估吉富罗非鱼抗病选育系P4代的生长性能,对P4代34个家系的体质量、体长、体高、体宽进行测定和比较分析。结果显示,各个家系的生长速度存在较大的差异,其中14号家系的生长速度最快,34号家系最慢,两个家系间的平均收获体质量相差1.26倍;体长、体高、体宽与体质量之间的Pearson相关系数均达到了极显著水平(P<0.01),其中体质量与体长的Pearson相关系数最高达到0.979,其次是体高和体宽分别为0.967和0.952;单因素(one-way ANOVA)和元方差(MANOVA)统计发现体质量、体质量绝对增长率及体长在不同家系间存在着极显著的差异(P<0.01);各家系的体质量育种值存在较大的变异,其中以1号家系和36号家系的体质量育种值最高,均为15.76。研究结果为筛选出生长性能优秀的吉富罗非鱼家系提供了依据。

关键词：吉富罗非鱼生长性能家系选育

吉富罗非鱼组蛋白酶B基因克隆及无乳链球菌感染后的表达分析

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南方农业学报 2022年第8期53卷 2294-2301页

作者：朱佳杰敖秋桅谭芸罗永巨蒋和生广西水产科学研究院广西南宁530021 广西民族大学广西南宁530006 广西大学广西南宁530004

【目的】探究组蛋白酶B基因(CtsB)在吉富罗非鱼感染无乳链球菌前后的表达差异,为深入研究罗非鱼抗无乳链球菌感染的免疫应答机制及后续通过SNP分子标记/基因组编辑技术快速获得吉富罗非鱼抗病新品种提供科学依据。【方法】通过RACE克隆... 详细信息

【目的】探究组蛋白酶B基因(CtsB)在吉富罗非鱼感染无乳链球菌前后的表达差异,为深入研究罗非鱼抗无乳链球菌感染的免疫应答机制及后续通过SNP分子标记/基因组编辑技术快速获得吉富罗非鱼抗病新品种提供科学依据。【方法】通过RACE克隆罗非鱼CtsB基因cDNA全长序列,使用SMART、Splign、MEGA v6.0、BoxShade及MegAlign等在线软件进行生物信息学及系统进化分析,并以实时荧光定量PCR检测吉富罗非鱼CtsB基因组织表达谱及无乳链球菌感染后CtsB基因的表达变化规律。【结果】吉富罗非鱼CtsB基因cDNA序列全长1746 bp,包括161 bp的5’端非编码区(5’-UTR)、592 bp的3’端非编码区(3’-UTR)及993 bp的开放阅读框(ORF),共编码331个氨基酸残基。基于CtsB氨基酸序列相似性构建的系统发育进化树显示,吉富罗非鱼与奥利亚罗非鱼的亲缘关系最近,而与鲤鱼、大菱鲆、牙鲆、半滑舌鳎等物种相距较远。CtsB基因在吉富罗非鱼的肝脏、脾脏、鳃、前肾、脑、肠道、皮肤和肌肉等组织中均有表达,且以鳃组织中的相对表达量最高,是其他器官组织的2.0~3.0倍。吉富罗非鱼抗病家系和易感家系感染无乳链球菌后,CtsB基因在脾脏和肾脏中的相对表达量均显著上调(P<0.05),并于感染后50 h达峰值,且抗病家系的上调表达幅度大于易感家系。【结论】CtsB基因在鱼类的进化过程中具有高度保守性,但在不同物种中的表达模式存在明显差异。CtsB基因是吉富罗非鱼的重要免疫因子,在抵御无乳链球菌入侵过程中发挥着重要的免疫作用,可作为罗非鱼抗病育种的SNP分子标记给予开发利用。

关键词：吉富罗非鱼无乳链球菌组蛋白酶B基因(CtsB) 表达规律免疫因子

无乳链球菌感染吉富罗非鱼后体内病原菌的动态分布

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南方农业学报 2015年第9期46卷 1715-1719页

作者：刘溪敖秋桅谭芸周宇甘西朱佳杰广西水产科学研究院/广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室南宁530021 广西大学动物科学技术学院南宁530005

【目的】研究吉富罗非鱼感染无乳链球菌后其体内主要器官组织中病原菌的分布及消除规律,为罗非鱼无乳链球菌病的诊断和药物防治提供科学依据。【方法】对吉富罗非鱼进行人工腹腔注射无乳链球菌（HN016菌株）,分别在感染后3、6、12、18... 详细信息

【目的】研究吉富罗非鱼感染无乳链球菌后其体内主要器官组织中病原菌的分布及消除规律,为罗非鱼无乳链球菌病的诊断和药物防治提供科学依据。【方法】对吉富罗非鱼进行人工腹腔注射无乳链球菌（HN016菌株）,分别在感染后3、6、12、18、24、48、72、96、120、144、168 h和10、15、20、30 d,随机选取未死亡罗非鱼取样（脑组织、肝脏、前肾和脾脏）划线接种于鸡血培养基上,28℃培养12 h后统计菌落数量。【结果】人工注射感染HN016菌株3 h后,吉富罗非鱼未出现发病症状,但在其脑组织、肝脏、前肾和脾脏均可分离出病原菌;感染18 h后进入发病高峰期,从其肝脏、脾脏分离出的菌落数量明显多于脑组织和前肾,之后各组织的病原菌落数量持续增长并在48～72 h间趋于稳定;感染72 h后各组织分离出的菌落数量逐渐减少;感染10 d后从存活吉富罗非鱼的脑组织已分离不到病原菌,感染20 d后存活鱼体的脑组织、肝脏、前肾和脾脏均未分离出无乳链球菌。【结论】吉富罗非鱼感染无乳链球菌（HN016菌株）的发病死亡高峰期在感染后48～72 h,而无乳链球菌在吉富罗非鱼体内的代谢周期为20 d,因此养殖生产中应注意发病高峰期间的水体消毒及减少饵料投喂。

关键词：吉富罗非鱼无乳链球菌动态分布消除规律平板活菌计数法

无乳链球菌感染吉富品系尼罗罗非鱼的病理学研究

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南方农业学报 2018年第2期49卷 375-382页

作者：罗伟甘西朱佳杰敖秋桅谭芸陈明罗永巨广西水产科学研究院/广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室南宁530021

【目的】确定无乳链球菌侵染吉富品系尼罗罗非鱼的途径及靶器官,为罗非鱼抗病育种及无乳链球菌病疫苗的研发提供理论依据。【方法】分别采用腹腔注射、经口灌胃及体外浸泡3种方式对吉富品系尼罗罗非鱼进行无乳链球菌感染,然后采集感染... 详细信息

【目的】确定无乳链球菌侵染吉富品系尼罗罗非鱼的途径及靶器官,为罗非鱼抗病育种及无乳链球菌病疫苗的研发提供理论依据。【方法】分别采用腹腔注射、经口灌胃及体外浸泡3种方式对吉富品系尼罗罗非鱼进行无乳链球菌感染,然后采集感染罗非鱼的鳃、脾脏、肝脏和小肠组织进行病理形态学观察,并利用家兔抗无乳链球菌血清进行免疫组织化学定位,明确不同感染途径下无乳链球菌在鱼体内各组织中的分布规律及其浸染的靶器官。【结果】3种人工感染方式均能促使吉富品系尼罗罗非鱼感染无乳链球菌,其中,腹腔注射和经口灌胃在感染2 h后即出现病理变化,而体外浸泡感染方式出现病理变化的时间约在感染5 h后,且病变程度较腹腔注射和经口灌胃的感染方式轻。免疫组织化学定位发现,腹腔注射组吉富品系尼罗罗非鱼的病原菌信号出现顺序为脾脏→肝脏和鳃→小肠,经口灌胃组的病原菌信号出现顺序为小肠→鳃和脾脏→肝脏,体外浸泡组的病原菌信号出现顺序为鳃→脾脏→肝脏和小肠。【结论】采用腹腔注射、经口灌胃及体外浸泡3种方式均能促使吉富品系尼罗罗非鱼感染无乳链球菌,其对应的病原菌信号分别优先在脾脏、肠道和鳃组织出现。因此,自然养殖条件下防止养殖水体和食源被无乳链球菌污染是防控罗非鱼无乳链球菌病暴发的有效措施。

关键词：吉富品系尼罗罗非鱼无乳链球菌致病途径靶器官免疫组织化学