检索结果-南通市图书馆

人Endostatin基因的克隆及其在hela细胞中的表达

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

人Endostatin基因的克隆及其在hela细胞中的表达

作者：扈廷茂内蒙古大学

学位级别：硕士

人内皮抑素(Endostatin)是第一个进入临床研究的内源性血管生成抑制剂,是胶原蛋白ⅩⅧC末端非胶原区NCl结构域的20KDa的片段。它可以抑制内皮细胞的增殖和转移,从而降低肿瘤内血管生成,阻断营养通路,达到杀死肿瘤细胞的目的。其最大的... 详细信息

人内皮抑素(Endostatin)是第一个进入临床研究的内源性血管生成抑制剂,是胶原蛋白ⅩⅧC末端非胶原区NCl结构域的20KDa的片段。它可以抑制内皮细胞的增殖和转移,从而降低肿瘤内血管生成,阻断营养通路,达到杀死肿瘤细胞的目的。其最大的优点为无毒性和无抗药性。本文利用反转录PCR克隆人Endostatin基因,分别构建到分离表达载体pIRES-EGFP和融合表达载体pEGFP-C中,然后把两个重组表达载体利用脂质体介导法分别转染真核细胞hela,48小时后可在荧光显微镜下观察到被转染细胞发出的绿色荧光,传代10次后,绿色荧光仍持续表达,说明是稳定转染。并且,利用兔抗人Endostatin抗体对已转染的细胞作免疫细胞化学分析,DAB显色后,在显微镜下观察,结果显示,转染的细胞显棕红色,没有转染的细胞不显色。这说明,Endostatin在转染的细胞内稳定遗传与表达。从而为基因药物和基因治疗的研究奠定了基础。

关键词： Endostatin RT-PCR 基因克隆脂质体转染免疫细胞化学

烟焦油对小鼠肺多环芳烃受体和细胞色素P4501A1基因mRNA水平的影响

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

中华劳动卫生职业病杂志 2006年第2期24卷 85-87页

作者：常福厚扈廷茂内蒙古医学院药学院药理学教研室呼和浩特010059 内蒙古大学生命科学学院

目的研究烟焦油对小鼠肺多环芳烃化合物受体(AHR)、细胞色素P4501A1(CYP1A1)基因表达的影响。方法以5.29、10.58、15.87 mg/kg的烟焦油腹腔注射分别染毒小鼠,用提纯RNA试剂盒提取小鼠肺脏的RNA,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测AHR和CY... 详细信息

目的研究烟焦油对小鼠肺多环芳烃化合物受体(AHR)、细胞色素P4501A1(CYP1A1)基因表达的影响。方法以5.29、10.58、15.87 mg/kg的烟焦油腹腔注射分别染毒小鼠,用提纯RNA试剂盒提取小鼠肺脏的RNA,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测AHR和CYP1A1基因的表达,以-βactin作为内对照,分析不同处理剂量和不同处理时间后AHR和CYP1A1基因表达情况。结果以5.29 mg/kg烟焦油染毒小鼠72 h,AHR基因表达量的相对值为0.554±0.023,与吐温-80组(0.484±0.045)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。以10.581、5.87 mg/kg的烟焦油染毒小鼠48和72 h,AHR基因表达量的相对值分别为0.555±0.014、0.606±0.051和0.566±0.014、0.684±0.069,分别与吐温-80组(0.486±0.060、0.484±0.045)比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。CYP1A1基因表达量的相对值分别为1.535±0.021、1.643±0.046和1.624±0.056、1.739±0.038,分别与吐温-80组(1.436±0.016、1.404±0.036)比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论烟焦油在一定的浓度和时间内可使AHR和CYP1A1基因的表达增加,烟焦油对AHR基因表达的调控早于CYP1A1基因。

关键词：焦油细胞色素P4501A1 多环芳烃受体基因表达

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

大鼠胎脑神经干细胞HPRT基因的敲除

Acta Genetica Sinica 2004年第1期31卷 51-56页

作者：李雪玲扈廷茂 John R Morrison 内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021 MonashInstituteofReproductionandDevelopment

根据已知大鼠次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HypoxanthineGuaninePhosphoribosylTransferase ,HPRT)基因的外显子序列 ,从大鼠HPRT基因组DNA序列的细菌人工染色体 (BacterialArtificialChromosome ,BAC)中用酶切和PCR方法分别分离得到用于构建基因敲除载体的 3 0kb的 5′长臂 (LongArm ,LA)和 1 7kb的 3′短臂 (ShortArm ,SA) ,并分别克隆到pSL1180和pCR2 1中。进一步构建大鼠HPRT基因打靶载体———pKO HPRT ,经酶切鉴定后的大鼠HPRT基因敲除载体用NotⅠ酶切使其线性化 ,经溴乙锭、正丁醇、酚、酚 /氯仿提纯后 ,将终浓度调至 1μg μl。在FuGene 6转染试剂的作用下转染培养 2 4h的第二代大鼠胎脑神经干细胞 (RatFetalNeuralStemCells,rFNSCs)。转染后的细胞用 80 μg mlG4 18和 0 2 μmol L的Ganc全培养液筛选 ,2w后将存活细胞进行悬浮培养 ,使细胞形成球形物 ,挑选单个的球形物进行单克隆增殖 ,其中一部分细胞 (约 2～ 3× 10 3)用裂解液处理 ,取上清用于PCR检测 ,大部分细胞 (5× 10 7)用于DNA和RNA的提取 ,进行Southernbolt和RT PCR检测 ,剩余细胞冷冻保存。最后 1次实验共分离培养了 32个rFNSCs单克隆 ,其中 3个单克隆 (9 3% )经PCR、Southernbolt和RT

关键词：大鼠胎脑神经干细胞基因敲除次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因

抑癌蛋白PTEN的原核表达、抑癌活性研究和抗体制备

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

生物工程学报 2006年第1期22卷 58-64页

作者：侯鑫刘俊娥扈廷茂内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021

PTEN是具有蛋白质和酯类双重特异性磷酸酶活性的抑癌蛋白,在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景。鉴于原核表达PTEN蛋白并用于抑癌实验的研究尚未见报道,因此尝试利用大肠杆菌表达有活性的PTEN蛋白,检测其抑癌效果。利用本室克隆的PTEN基因c... 详细信息

PTEN是具有蛋白质和酯类双重特异性磷酸酶活性的抑癌蛋白,在肿瘤治疗中具有广阔的应用前景。鉴于原核表达PTEN蛋白并用于抑癌实验的研究尚未见报道,因此尝试利用大肠杆菌表达有活性的PTEN蛋白,检测其抑癌效果。利用本室克隆的PTEN基因cDNA和原核表达载体pET44a(+)分别构建带6×His和Nus标签的两种诱导型原核融合表达载体pETPTEN和pETNusPTEN,在不同的大肠杆菌表达宿主BL21(DE3)(简写为BL)和Rosettagami(DE3)pLysS(简写为RG)中诱导表达。SDSPAGE和Westernblot检测表明:在可溶性组分和包涵体中均含有目的蛋白,在BL中目的蛋白的表达量较高(18.7%)而在RG中可溶性蛋白的比例较高(6.6%)。经纯化和包涵体蛋白复性处理后,重组融合蛋白经Chariot转运入小鼠实体瘤及人前列腺癌DU145细胞。抑癌实验表明:与对照组相比,重组PTEN蛋白对小鼠实体瘤的生长抑制率为58.76%;对癌细胞DU145的生长抑制率可达46.16%;并可导致明显的G0G1期阻滞,其中在宿主RG中表达的重组蛋白抑癌效果明显高于BL宿主中表达的目的蛋白。证实在原核系统中表达的重组PTEN蛋白具有抑癌活性,同时制备了PTEN的高效价腹水多抗,为深入研究PTEN蛋白在癌症治疗中的应用打下了良好的基础。

关键词： PTEN 原核表达抑癌活性多克隆抗体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

大鼠HPRT基因敲除载体的构建

内蒙古大学学报（自然科学版） 2002年第6期33卷 665-668页

作者：李雪玲扈廷茂内蒙古大学生命科学学院内蒙古呼和浩特010021

根据已知大鼠HPRT基因的外显子序列,从大鼠HPRT基因BAC中用酶切和PCR方法分别分离得到用于构建基因敲除载体的3.0kb和1.7kb的长臂(LongArm,LA)和短臂(ShortArm,SA),并克隆到pSL1180和pKO中.3.0kb长臂片段包含5′端部分序列和exon1部分序... 详细信息

根据已知大鼠HPRT基因的外显子序列,从大鼠HPRT基因BAC中用酶切和PCR方法分别分离得到用于构建基因敲除载体的3.0kb和1.7kb的长臂(LongArm,LA)和短臂(ShortArm,SA),并克隆到pSL1180和pKO中.3.0kb长臂片段包含5′端部分序列和exon1部分序列,1.7kb短臂位于exon6和exon7之间.依次将neor、SA、LA克隆到pBS相应酶切位点,得到pBS-HPRT,再将LA-neor-SA片段由pBS中切出,克隆到pKO的KpnI和NotI位点之间,得到大鼠HPRT基因敲除载体pKO-HPRT.

关键词：大鼠 HPRT基因基因敲除载体构建基因表达分子生物学基因重组

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

在大肠杆菌中表达有活性的人STK11蛋白

微生物学报 2007年第1期47卷 79-82页

作者：侯鑫扈廷茂刘俊娥内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021 中国科学院微生物研究所北京100080

STK11蛋白(serine/threonine kinase11)是近年来发现的具有多种重要功能的蛋白,可参与调控细胞周期、p53介导的细胞凋亡、ras诱导的细胞转化、细胞极化等多种生物学过程。利用大肠杆菌高效表达有活性的人STK11蛋白,可为其结构和功能的... 详细信息

STK11蛋白(serine/threonine kinase11)是近年来发现的具有多种重要功能的蛋白,可参与调控细胞周期、p53介导的细胞凋亡、ras诱导的细胞转化、细胞极化等多种生物学过程。利用大肠杆菌高效表达有活性的人STK11蛋白,可为其结构和功能的深入研究打下良好基础。利用本室克隆的人STK11 cDNA和原核表达载体pET-44a(+)构建带有Nus融合标签的诱导型表达载体pET-Nus-STK11,在不同的大肠杆菌宿主中诱导表达。SDS-PAGE和Western blot检测表明,在BL21(DE3)宿主中表达的融合蛋白主要以包涵体形式存在,占菌体总蛋白的8.9%;在Rosetta-gami(DE3)pLysS宿主中主要表达为可溶性蛋白,占菌体总蛋白的16.7%。而经纯化和包涵体蛋白复性处理后,以Chariot介导重组融合蛋白进入人肝癌细胞SMMC-7721检测其对细胞生长和细胞周期的影响。与对照组相比,BL21(DE3)中表达的Nus-STK11蛋白几乎无抑制活性;而Rosetta-gami(DE3)pLysS中表达的Nus-STK11蛋白可以显著抑制SMMC-7721细胞的生长,抑制率达47.05%,并导致细胞周期的G0/G1期阻滞,证实表达的重组融合蛋白具有明显的生物学活性。上述结果为在大肠杆菌中成功表达有活性的重组STK11蛋白的首次报道。

关键词： STK11蛋白原核表达 Rosetta-gami(DE3)pLysS

人野生型抑癌基因PTEN的逆转录PCR法克隆及序列分析

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

内蒙古大学学报（自然科学版） 2004年第6期35卷 668-672页

作者：刘俊娥侯鑫扈廷茂内蒙古大学生命科学学院呼和浩特010021

以正常人胎盘组织总RNA为模板,通过优化引物和PCR条件,采用逆转录PCR法扩增出人野生型PTEN基因cDNA片段,并克隆到pMD18-T载体,获得重组子pMD-PTEN.序列分析表明,该cDNA长1212bp,与GenBank中PTEN基因序列相比有3个碱基发生了变化,但全部... 详细信息

以正常人胎盘组织总RNA为模板,通过优化引物和PCR条件,采用逆转录PCR法扩增出人野生型PTEN基因cDNA片段,并克隆到pMD18-T载体,获得重组子pMD-PTEN.序列分析表明,该cDNA长1212bp,与GenBank中PTEN基因序列相比有3个碱基发生了变化,但全部为同义突变,证实获得了人野生型抑癌基因PTEN的cDNA克隆,为进一步构建原核表达载体及研究PTEN蛋白的抑癌效果、抑癌机理打下基础.

关键词：逆转录PCR法抑癌基因PTEN PTEN基因野生型克隆人胎盘组织正常人重组子 T载体碱基

合成U3snRNA基因上游启动区构建ACC合成酶反义RNA-核酶嵌合基因的植物表达载体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

内蒙古大学学报（自然科学版） 2002年第1期33卷 73-78页

作者：鲍国强扈廷茂海燕李丽莉内蒙古大学生物系内蒙古呼和浩特010021

利用反义 RNA和核酶进行基因表达调控是当今植物分子生物学的研究热点之一 .但在转基因植物中 ,利用 RNA聚合酶型启动区表达效率不高 .番茄 U3sn RNA基因由 RNA聚合酶来转录 ,具有较高的转录效率 ,为一般转录效率的 1 0 0～ 1 0 0 0... 详细信息

利用反义 RNA和核酶进行基因表达调控是当今植物分子生物学的研究热点之一 .但在转基因植物中 ,利用 RNA聚合酶型启动区表达效率不高 .番茄 U3sn RNA基因由 RNA聚合酶来转录 ,具有较高的转录效率 ,为一般转录效率的 1 0 0～ 1 0 0 0倍 .我们人工合成了番茄 U3sn RNA基因上游启动区 ( 1 5 2 bp) ,构建到番茄 ACC合成酶的反义 RNA-核酶嵌合 DNA序列的上游 ,然后将“启动区 -反义 RNA-核酶嵌合 DNA序列”插入到植物双元表达载体p GA6 4 3中 ,并用三亲融合法导入农杆菌 LBA4 40 4中 ,为研究 U 3sn RNA上游启动区增强反义

关键词：番茄U3snRNA上游启动区反义RNA 核酶植物分子生物学基因表达调控植物表达载体

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

辐射育种

农业科学实验 1977年第8期 25-26页

作者：扈廷茂

作物辐射育种是农业上利用原子能的一个重要方面,是继系统选育和杂交育种之后发展起来的一项育种新技术。它是利用放射性射线,如Χ射线,γ射线,β射线,中子和无线电微波等处理作物,从而引起作物遗传性的改变,产生各种各样变异,经过人工... 详细信息

作物辐射育种是农业上利用原子能的一个重要方面,是继系统选育和杂交育种之后发展起来的一项育种新技术。它是利用放射性射线,如Χ射线,γ射线,β射线,中子和无线电微波等处理作物,从而引起作物遗传性的改变,产生各种各样变异,经过人工选择、培育、产生优良品种的方法。它的优点是:可提高变异频率,有利于改变单一特性,缩短育种年限。辐射处理方法,有外照射和内照射两种。外照射是利用各

关键词：辐射育种外照射单株作物诱变育种第一代第二代辐射处理分孽穗行优良品种良种性状分离内照射株行放射性射线