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丁酸钠诱导HeLa细胞凋亡过程中端粒酶活性及端粒长度的变化

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科学通报 2000年第17期45卷 1861-1867页

作者：任建国夏慧莉戴尧仁清华大学生物科学与技术系北京100084

研究了丁酸钠诱导的HeLa细胞凋亡过程中端粒酶活性和端粒长度的变化. 丁酸钠处理 48 h后, HeLa细胞表现出明显的凋亡特征: 染色质凝集, 形成凋亡小体, DNA在核小体间断裂并降解产生梯状电泳图谱. 凋亡细胞中端粒酶活性无显著改变, 端粒... 详细信息

研究了丁酸钠诱导的HeLa细胞凋亡过程中端粒酶活性和端粒长度的变化. 丁酸钠处理 48 h后, HeLa细胞表现出明显的凋亡特征: 染色质凝集, 形成凋亡小体, DNA在核小体间断裂并降解产生梯状电泳图谱. 凋亡细胞中端粒酶活性无显著改变, 端粒长度却急剧缩短; 抑制端粒酶活性后, 细胞对凋亡刺激的易感性增强, 端粒的降解加快. 以上结果表明, 丁酸钠诱导的细胞凋亡与端粒长度密切相关, 但不影响端粒酶的活性. 端粒酶则可以通过保护端粒来增加细胞对凋亡刺激的耐受性.

关键词： HeLa细胞细胞凋亡端粒酶活性丁酸钠端粒长度

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利用核磁共振技术检测植物细胞凋亡

Acta Botanica Sinica 2004年第6期46卷 711-718页

作者：张贵友朱瑞宇徐烨闫永彬戴尧仁清华大学生物科学与技术系北京100084 《植物学报》通讯作者

在细胞凋亡的研究中，通常以检测细胞核和细胞器的形态改变或生物化学特性变化为指标进行分析。已有的实验表明：动物细胞在凋亡过程中，细胞膜的脂质双分子层发生了一系列生物物理和生物化学改变，如膜电位的改变、磷脂酰丝氨酸由细胞... 详细信息

在细胞凋亡的研究中，通常以检测细胞核和细胞器的形态改变或生物化学特性变化为指标进行分析。已有的实验表明：动物细胞在凋亡过程中，细胞膜的脂质双分子层发生了一系列生物物理和生物化学改变，如膜电位的改变、磷脂酰丝氨酸由细胞膜内侧向外翻转、细胞膜微粘度的改变等，这些变化会导致细胞中亚甲基信号强度的增加。我们利用质子核磁共振光谱分析(1H-NMR)方法，首次发现用物理和化学方法诱导的烟草(Nicotiana tabacuum L．cv．BY-2)和胡萝卜(Daucus carota L．)细胞在凋亡过程中伴随有亚甲基信号强度的明显增加。在用烟酰胺处理的烟草细胞中，亚甲基信号强度的增加与DNA Ladder几乎同时出现，随诱导时间的延长，亚甲基信号强度也逐渐增大，在24h亚甲基信号强度增加约2倍。而这种特征在坏死的细胞中并不存在。说明亚甲基信号强度的增加是动、植物细胞凋亡过程中所具有的共同特征，1H-NMR技术提供了一种精确可靠的分析植物细胞凋亡的手段，同时由于它所具有的非侵害性的特点，可能在揭示细胞凋亡机制的研究中具有一定的意义。

关键词：细胞凋亡植物细胞质子核磁共振(1H-NMR) 膜脂

羟自由基诱导的烟草原生质体的凋亡:流式细胞法的新证据(英文)

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Acta Botanica Sinica 2003年第8期45卷 944-948页

作者：雷晓勇廖旭东张贵友戴尧仁清华大学生物科学与技术系北京100084 中国科学院动物研究所北京100080

用1.0mmol/L FeSO_4/0.5mmol/L H_2O_2处理烟草(Nicotiana tabacum L.,cultivar BY-2)原生质体,发现羟自由基能够诱导烟草原生质体的凋亡。具体表现为细胞核皱缩、DNA Ladder、TUNEL阳性反应等典型的凋亡特征。在动物细胞凋亡过程中,线... 详细信息

用1.0mmol/L FeSO_4/0.5mmol/L H_2O_2处理烟草(Nicotiana tabacum L.,cultivar BY-2)原生质体,发现羟自由基能够诱导烟草原生质体的凋亡。具体表现为细胞核皱缩、DNA Ladder、TUNEL阳性反应等典型的凋亡特征。在动物细胞凋亡过程中,线粒体起着非常重要的作用,其中膜电位(ΔΨ_m)的变化以及由其引起的位于线粒体膜上的通透性孔(PTP)的开放与Cyt c的释放有关。另外,在动物凋亡细胞中,磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)会从细胞膜内侧向外翻转。为了判断植物细胞凋亡过程中膜电位的变化情况以及PS的外翻程度,我们采用了流式细胞法。结果表明,随着处理时间的延长,烟草原生质体线粒体的膜电位逐渐降低;膜内PS大量外翻。说明由羟自由基和烟草原生质体组成的凋亡体系是一种可靠的凋亡组合,可以用来对植物细胞凋亡机理做进一步研究。

关键词：羟自由基烟草原生质体流式细胞法细胞调亡程序性细胞死亡

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VK3诱导的植物细胞凋亡及其机理

科学通报 1999年第19期44卷 2075-2080页

作者：孙英丽周军戴尧仁翟中和北京大学生命科学学院北京100871 清华大学生物科学与技术系北京100084

VK3 可诱导烟草细胞的凋亡 ,表现为 :染色体凝集 ,凋亡小体形成 ,DNA末端断裂、降解形成梯状电泳 .此过程伴随特异核酸酶的激活 ,其活性依赖于Ca2 +,Mg2 +,可被Zn2 +和EDTA(Ethylenediaminetetraacetic)抑制 .DNA降解可被DEVD(Ac_Asp_Gl... 详细信息

VK3 可诱导烟草细胞的凋亡 ,表现为 :染色体凝集 ,凋亡小体形成 ,DNA末端断裂、降解形成梯状电泳 .此过程伴随特异核酸酶的激活 ,其活性依赖于Ca2 +,Mg2 +,可被Zn2 +和EDTA(Ethylenediaminetetraacetic)抑制 .DNA降解可被DEVD(Ac_Asp_Glu_Val_Asp_aldehyde)抑制 .核纤层蛋白降解为 35ku片段 ,DEVD ,PMSF(Phenylmethylsufosyl)及CH可抑制这种降解 .以上结果证明 ,VK3

关键词： VK3 DNA降解烟草细胞蛋白酶植物细胞凋亡

极谱法测定植物中聚(ADP-核糖基)聚合酶活性

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科学通报 1999年第15期44卷 1620-1624页

作者：田瑞华陈德朴戴尧仁清华大学生物科学与技术系北京100084 清华大学化学系北京100084

建立了一种简便、灵敏、可信的PARP活性测定的非同位素方法 ,即用线性扫描极谱法测出植物中PARP酶促反应产物烟酰胺 (NIC)的含量 ,从而测定PARP的活性 .NIC的检测限达0 .0 3μmol/L ,线性关系范围为 0 .0 6～ 5 μmol/L ,相关系数r =0 .... 详细信息

建立了一种简便、灵敏、可信的PARP活性测定的非同位素方法 ,即用线性扫描极谱法测出植物中PARP酶促反应产物烟酰胺 (NIC)的含量 ,从而测定PARP的活性 .NIC的检测限达0 .0 3μmol/L ,线性关系范围为 0 .0 6～ 5 μmol/L ,相关系数r =0 .999.NIC的回收率约达92 %～98% ,相对标准偏差小于 6 .6 % .结果表明 ,酶促反应混合物经过预处理后 ,产物NIC的测定不受干扰 .

关键词：植物 PARP 极谱法测定酶促反应活性

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彗星电泳法在植物原生质体凋亡检测中的应用

Acta Botanica Sinica 1998年第10期40卷 928-932页

作者：姜晓芳朱海珍周军陈浩明戴尧仁清华大学生物科学与技术系

应用中性法彗星电泳检测烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）原生质体的凋亡。结果表明，彗星发生的百分率（彗星率）和发生核质固缩及“核着边”（凋亡形态学标志）的细胞的百分率之间存在明确的相关性。利用标准的细胞凋亡... 详细信息

应用中性法彗星电泳检测烟草（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬ．）原生质体的凋亡。结果表明，彗星发生的百分率（彗星率）和发生核质固缩及“核着边”（凋亡形态学标志）的细胞的百分率之间存在明确的相关性。利用标准的细胞凋亡检测手段，包括ＤＮＡｌａｄｄｅｒｉｎｇ及核糖核酸末端转移酶介导的ｂｉｏｔｉｎｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ），都证明这种彗星电泳法可以用来比较精确地检测植物原生质体的凋亡。

关键词：中性法彗星电泳细胞凋亡 DNA断裂烟草原生质体

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植物中的褪黑激素及其功能

中草药 2003年第1期34卷 87-89页

作者：张贵友刘伟华戴尧仁清华大学生物科学与技术系北京100084

褪黑激素是普遍存在于动物体内的吲哚类激素 ,具有多种复杂的生物学功能。近年来人们发现植物中也含有褪黑激素并已经在多种植物中特别是食用和药用植物中检测出来。在植物中广泛进行褪黑激素的研究将对人类的营养、医药和农业提供非常... 详细信息

褪黑激素是普遍存在于动物体内的吲哚类激素 ,具有多种复杂的生物学功能。近年来人们发现植物中也含有褪黑激素并已经在多种植物中特别是食用和药用植物中检测出来。在植物中广泛进行褪黑激素的研究将对人类的营养、医药和农业提供非常有益的信息。

关键词：褪黑激素植物自由基合成含量

HPLC法测定黄芩叶、花、种子中褪黑激素的含量

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植物学通报 2003年第1期20卷 75-79页

作者：刘伟华张贵友戴尧仁清华大学生物科学与技术系北京100084

应用高效液相色谱荧光检测系统测定了昼夜两个时间点黄芩鲜叶中褪黑激素的浓度差别 ,同时也检测了花、种子中褪黑激素的含量。结果表明 ,夜间和白天采集的新鲜叶片昼夜含量不同 ,分别为 1 .65 0 3ng/g和 0 .5 1 63ng/g。在花和种子中... 详细信息

应用高效液相色谱荧光检测系统测定了昼夜两个时间点黄芩鲜叶中褪黑激素的浓度差别 ,同时也检测了花、种子中褪黑激素的含量。结果表明 ,夜间和白天采集的新鲜叶片昼夜含量不同 ,分别为 1 .65 0 3ng/g和 0 .5 1 63ng/g。在花和种子中也检测到褪黑激素。尽管目前对褪黑激素在植物中的作用尚不完全清楚 ,但是有关植物中褪黑激素含量的研究将对营养、医药和农业等提供有益的信息。

关键词： HPLC法测定黄芩鲜叶花种子褪黑激素含量

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苹果果肉中抗氰氧化酶(AOX)的分离鉴定

植物学通报 2002年第6期19卷 739-742页

作者：雷晓勇黄蕾田梅生胡小松戴尧仁清华大学生物科学与技术系北京100084 中国农业大学食品学院北京100094 新西兰园艺与食品研究所

水果果肉的组织特征决定了从果肉中抽提线粒体的方法与其它组织有所不同。采用平面细孔瓜果刨破碎果肉、差速离心、密度梯度纯化等方法能够得到活性较高的线粒体。Brother氧电极能够判断线粒体膜是否完整。利用PAGE凝胶电泳、WesternBlo... 详细信息

水果果肉的组织特征决定了从果肉中抽提线粒体的方法与其它组织有所不同。采用平面细孔瓜果刨破碎果肉、差速离心、密度梯度纯化等方法能够得到活性较高的线粒体。Brother氧电极能够判断线粒体膜是否完整。利用PAGE凝胶电泳、WesternBlot(AOX单克隆抗体 )等分析手段 ,对‘RoyalGala’苹果中AOX进行了分离和鉴定。结果表明 :‘RoyalGala’苹果果肉线粒体中AOX单体的分子量约在 35～ 37kD之间 ,二聚体约为 90kD左右。这与其它已分离鉴定的产热植物或烟草等线粒体中AOX蛋白的分子量基本一致。

关键词：苹果果肉抗氰氧化酶分离鉴定线粒体单克隆抗体植物线粒体抗氰呼吸