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石墨炉原子吸收光谱法测定生熟茶叶中的铅元素含量及其安全评估

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食品安全导刊 2020年第20期 68-71页

作者：魏婧戴利铭西双版纳州食品药品检验所云南景洪666100 云南省热带作物科学研究所云南景洪666100

采用石墨炉原子吸收光谱法测定了勐海和勐腊两个地区的18份生茶及28份熟茶样品中重金属铅的含量,分析不同产地、不同加工方式茶叶的铅含量差异及特征;根据GB 2760-2017及靶标危害系数法评价茶叶的铅暴露风险,为保障消费者安全及茶叶的... 详细信息

采用石墨炉原子吸收光谱法测定了勐海和勐腊两个地区的18份生茶及28份熟茶样品中重金属铅的含量,分析不同产地、不同加工方式茶叶的铅含量差异及特征;根据GB 2760-2017及靶标危害系数法评价茶叶的铅暴露风险,为保障消费者安全及茶叶的加工方式选择提供参考依据。结果显示,生茶的铅含量范围在0.038±0.002至0.255±0.005mg/kg,熟茶的铅含量在0.008±0.001至0.264±0.001 mg/kg,不同地区的茶叶样品铅元素含量存在差异;总体上生茶的铅含量低于熟茶,散装生茶低于饼装生茶,表明茶叶采后加工过程中接触的机械、发酵、渥堆等过程均有可能增加茶叶被重金属污染的风险。勐海及勐腊地区的生、熟茶样品中铅含量均低于GB 2760-2017的限量标准;两个产地生、熟茶的THQ均远低于1,没有明显的铅暴露风险。

关键词：茶叶加工方式铅靶标危害系数安全评估

滇金丝猴粪便微生物GH10家族木聚糖酶基因多样性

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微生物学通报 2016年第1期43卷 44-50页

作者：戴利铭邓梦黄遵锡王余娇李俊俊周峻沛慕跃林许波云南师范大学生命科学学院云南昆明650500 生物能源持续开发利用教育部工程研究中心云南昆明650500 云南省生物质能与环境生物技术重点实验室云南昆明650500 云南师范大学酶工程重点实验室云南昆明650500

【目的】分析滇金丝猴粪便微生物中GH10家族木聚糖酶的基因多样性。【方法】以野生和半圈养滇金丝猴粪便微生物宏基因组DNA为模板,用GH10木聚糖酶简并引物扩增木聚糖酶基因片段,利用p MD19-T载体构建细菌克隆文库并进行分析。【结果】... 详细信息

【目的】分析滇金丝猴粪便微生物中GH10家族木聚糖酶的基因多样性。【方法】以野生和半圈养滇金丝猴粪便微生物宏基因组DNA为模板,用GH10木聚糖酶简并引物扩增木聚糖酶基因片段,利用p MD19-T载体构建细菌克隆文库并进行分析。【结果】从野生和半圈养滇金丝猴粪便微生物克隆文库中分别获得26、28条GH10木聚糖酶基因片段,与Gen Bank中木聚糖酶序列一致性分别介于58%-95%、63%-81%之间。比对分析表明,两种环境中的GH10木聚糖酶均来自厚壁菌门、拟杆菌门和未培养细菌。野生滇金丝猴粪便微生物的GH10木聚糖酶基因来源于Uncultured bacterium和Butyrivibrio、Bacteroides、Ruminococcus、Sphingobacterium、Chryseobacterium、Clostridium、Bacillus 7个属;而半圈养滇金丝猴粪便微生物的GH10木聚糖酶基因来源于Uncultured bacterium和Clostridium、Paludibacter、Sphingobacterium、Ruminococcus、Roseburia、Chryseobacterium 6个属,其中两种环境都存在来源于Ruminococcus、Clostridium、Chryseobacterium、Sphingobacterium的GH10木聚糖酶。【结论】滇金丝猴粪便微生物中含有丰富的GH10木聚糖酶基因,且野生和半圈养两种不同环境中GH10木聚糖酶基因的微生物来源存在一定差异。该研究丰富了动物胃肠道中GH10木聚糖酶基因多样性,并为新型木聚糖酶的开发和滇金丝猴胃肠道微生物资源的利用奠定了基础。

关键词：未培养滇金丝猴粪便微生物木聚糖酶多样性

橡胶狗尾草平脐蠕孢叶斑病病原菌鉴定及生物学特性研究

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植物保护 2023年第2期49卷 227-234,242页

作者：刘一贤施玉萍戴利铭李岚岚蔡志英云南省热带作物科学研究所景洪666100

为明确采自西双版纳景洪地区疑似橡胶麻点病的病原菌,采用组织分离法进行病原菌分离,活体接种法进行致病性测定,通过形态学观察结合rDNA-ITS和GAPDH两个核苷酸片段序列分析,将病原菌确定为狗尾草平脐蠕孢Bipolaris setariae。通过单因... 详细信息

为明确采自西双版纳景洪地区疑似橡胶麻点病的病原菌,采用组织分离法进行病原菌分离,活体接种法进行致病性测定,通过形态学观察结合rDNA-ITS和GAPDH两个核苷酸片段序列分析,将病原菌确定为狗尾草平脐蠕孢Bipolaris setariae。通过单因子变量试验,对病原菌进行生物学特性研究,结果表明:菌丝生长最适温度为30℃,最适pH为7~8,最适培养基为PDA,菌丝致死温度为53℃,10 min。该病原菌能有效利用多种碳源和氮源,碳源以可溶性淀粉利用率最高,最适氮源为蛋白胨。24 h黑暗条件下培养更有利于菌丝生长。分生孢子萌发的最适温度为28~35℃,最适pH为7~8,28℃黑暗培养2 h后萌发率达到最大,为95.5%,分生孢子致死温度为60℃,10 min。

关键词：橡胶树叶斑病狗尾草平脐蠕孢生物学特性

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解淀粉芽孢杆菌生防菌BS-3全基因组测序及生物信息分析

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微生物学通报 2021年第6期48卷 2073-2088页

作者：戴利铭李岚岚刘一贤施玉萍蔡志英云南省热带作物科学研究所云南景洪666100

【背景】解淀粉芽孢杆菌BS-3是从健康橡胶树树根中分离获得的一株对真菌具有较强抗菌活性的内生细菌,有作为生物农药的潜力。【目的】解析菌株BS-3的基因组序列信息,以深入研究该菌株防病促生机制及挖掘次级代谢产物基因资源。【方法】... 详细信息

【背景】解淀粉芽孢杆菌BS-3是从健康橡胶树树根中分离获得的一株对真菌具有较强抗菌活性的内生细菌,有作为生物农药的潜力。【目的】解析菌株BS-3的基因组序列信息,以深入研究该菌株防病促生机制及挖掘次级代谢产物基因资源。【方法】采用第二代BGISEQ与第三代Pac Bio平台相结合的测序技术,对生防菌BS-3进行全基因组测序,并对测序数据进行基因组组装、基因预测与功能注释、共线性分析及次级代谢产物合成基因簇预测等。【结果】BS-3全基因组大小为3 870 130 bp,平均GC含量为46.88%,共编码4 161个基因;含有92个t RNA基因、28个r RNA、10个sRNA;含有122个串联重复序列、98个小卫星DNA、2个微卫星。在COG、GO、KEGG、NR和Swiss-Prot数据库分别注释到基因2 875、2 620、1 885、4 040和3 328个。同时,预测到BS-3中有10个次级代谢产物合成基因簇,编码表面活性素、丰原素、多烯类、儿茶酚型嗜铁素等抑菌物质。基因组测序数据提交至NCBI获得GenBank登录号为CP060384。【结论】为基因组层面上解析菌株BS-3具有良好防病效果的内在原因提供基础数据,为深入了解解淀粉芽孢杆菌次级代谢合成途径提供参考信息,对菌株BS-3后续相关研究具有重要意义。

关键词：解淀粉芽孢杆菌基因组基因注释次级代谢

橡胶树白粉病拮抗放线菌的筛选及田间防效评价

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植物保护 2024年第4期50卷 347-355页

作者：施玉萍刘一贤李岚岚戴利铭蔡志英云南省热带作物科学研究所云南省天然橡胶可持续利用研究重点实验室(筹)天然橡胶良种选育与栽培技术国家地方联合工程研究中心景洪666100

为筛选对橡胶树白粉病菌具有拮抗作用的生防放线菌,本研究从云南省主要植胶区橡胶树根际土壤中分离放线菌,以橡胶树主要病害病原菌为靶标菌,采用平板对峙培养法初步筛选出1株抑菌效果良好的放线菌菌株,命名为DL5C,其对橡胶树尖孢炭疽菌C... 详细信息

为筛选对橡胶树白粉病菌具有拮抗作用的生防放线菌,本研究从云南省主要植胶区橡胶树根际土壤中分离放线菌,以橡胶树主要病害病原菌为靶标菌,采用平板对峙培养法初步筛选出1株抑菌效果良好的放线菌菌株,命名为DL5C,其对橡胶树尖孢炭疽菌Colletotrichum acutatum、胶孢炭疽菌***、橡胶树白根病病菌Rigidoporus lignosus、橡胶树褐根病病菌Phellinus noxius的抑菌率分别为58.35%、60.97%、60.03%、74.00%;DL5C菌株发酵滤液对橡胶树白粉病菌Oidium heveae孢子萌发的抑制率达72.40%;田间试验结果表明,处理7 d后,DL5C菌株发酵液对橡胶树白粉病的相对防效为80.93%。通过菌株形态特征、培养特征、生理生化特性以及16S rRNA基因序列分析,放线菌菌株DL5C被鉴定为不吸水链霉菌Streptomyces ahygroscopicus。

关键词：橡胶树白粉病拮抗放线菌不吸水链霉菌生物防治田间防效

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橡胶褐根病拮抗放线菌17-7的筛选、鉴定及发酵条件优化

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微生物学通报 2020年第1期47卷 118-129页

作者：刘一贤施玉萍戴利铭李岚岚蔡志英云南省热带作物科学研究所

[背景]由有害木层孔菌(Phellinus noxius Corner)侵染引起的橡胶树褐根病是严重危害橡胶树的一类病害,给橡胶产业造成巨大的经济损失。[目的]从橡胶树根际土壤中筛选对橡胶树褐根病菌具有高拮抗活性的放线菌菌株,为该病害生防药剂的研... 详细信息

[背景]由有害木层孔菌(Phellinus noxius Corner)侵染引起的橡胶树褐根病是严重危害橡胶树的一类病害,给橡胶产业造成巨大的经济损失。[目的]从橡胶树根际土壤中筛选对橡胶树褐根病菌具有高拮抗活性的放线菌菌株,为该病害生防药剂的研发提供基础。[方法]采用稀释涂布法分离放线菌,平板对峙法、抑制菌丝生长速率法筛选拮抗菌株,通过培养特征、生理生化特征及16S rRNA基因序列分析确定其分类地位;利用单因子试验和正交试验相结合确定其最优发酵配方及培养条件。[结果]筛选到一株对橡胶褐根病具有较强抑制作用的放线菌菌株17-7,其对橡胶树上的5种病原菌均有较好的抑制作用。菌株17-7与桑树链霉菌(Streptomyces samsunensi)亲缘关系较近,且形态特征、培养特征和生理生化特征基本相符。该菌株最优发酵配方和培养条件分别为:葡萄糖20.0 g/L、大豆粉25.0g/L、KH2PO4 1.0g/L、NaCl 0.5 g/L、CaCO30.5g/L,培养基装瓶量为150 mL/500 mL,起始pH 8.0,摇瓶培养转速为140 r/min,接种量为10%,培养温度为28℃,培养时间为5 d。[结论]菌株17-7被鉴定为桑树链霉菌(Streptomyces samsunensi),其对橡胶褐根病具有较强的拮抗作用。

关键词：橡胶褐根病放线菌筛选鉴定发酵条件

橡胶树炭疽病生防内生菌的分离鉴定及抑菌作用研究

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热带作物学报 2021年第10期42卷 2958-2965页

作者：李岚岚戴利铭蒋桂芝刘一贤施玉萍蔡志英云南省热带作物科学研究所云南景洪666100

目前化学农药的缺点日益突显,研发环保的生防菌剂是当前绿色安全的一种方法,筛选具有抑制橡胶树炭疽病的生防菌株,为研发新型生防菌剂储备资源。本文采用组织培养法分离纯化橡胶树内生菌,平板对峙筛选拮抗菌株;通过菌株培养特征、生理... 详细信息

目前化学农药的缺点日益突显,研发环保的生防菌剂是当前绿色安全的一种方法,筛选具有抑制橡胶树炭疽病的生防菌株,为研发新型生防菌剂储备资源。本文采用组织培养法分离纯化橡胶树内生菌,平板对峙筛选拮抗菌株;通过菌株培养特征、生理生化、根据16S rRNA和gyrA基因序列构建系统发育树确定其分类地位;采用平板对峙法研究内生菌株的抗菌持久性、稳定性、广谱性;采用牛津杯法研究拮抗内生菌对杀菌剂的敏感性。从橡胶树健康的根组织中分离得到4株对橡胶树炭疽病具有抑制作用的细菌(BacRZS3D4-1、BacRZS3D4-2、BacRZS3D4-3、Bac RZS3D4-4),系统发育树分析结果显示这4株细菌与解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)亲缘关系很近,且培养性状和生理生化特征也与解淀粉芽孢杆菌相似。这4株内生菌的抗菌持久性强,抗菌稳定性好;对尖孢炭疽菌(Colletotrichum acutatum)DFMP1E和MLZZP3、小孢拟盘多毛孢(Pestalotiopsis microspora)MF375898均有较强的抑菌能力,对茄类镰刀菌(Fusariumsolani)XJ160901的抑制作用较弱;对多菌灵、异菌脲、百菌清、苯醚甲环唑4种杀菌剂均不敏感,有望开发为生防菌剂。

关键词：橡胶树炭疽病解淀粉芽孢杆菌生防内生菌分离鉴定

生防链霉菌17-7菌株发酵配方优化及发酵滤液稳定性研究

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热带作物学报 2024年第12期45卷 2689-2696页

作者：刘一贤施玉萍李岚岚戴利铭蔡志英云南省天然橡胶可持续利用研究重点实验室/云南省热带作物科学研究所云南景洪666100

为了提升链霉菌17-7菌株的抑菌活性,合理利用菌株的代谢产物,本研究以橡胶树褐根病菌为靶标菌,采用正交试验和单因子试验相结合,在原培养基的基础上对链霉菌17-7菌株的发酵培养基配方进一步优化,获得该菌株最适宜产活性物质的配方为:大... 详细信息

为了提升链霉菌17-7菌株的抑菌活性,合理利用菌株的代谢产物,本研究以橡胶树褐根病菌为靶标菌,采用正交试验和单因子试验相结合,在原培养基的基础上对链霉菌17-7菌株的发酵培养基配方进一步优化,获得该菌株最适宜产活性物质的配方为:大豆粉25 g/L、玉米粉10 g/L、葡萄糖10 g/L、酵母粉2 g/L、K_(2)HPO_(4)1 g/L、NaCl 0.5 g/L、CaCO_(3)0.5 g/L。发酵滤液稀释500倍后对橡胶树褐根病菌的相对抑菌活性为51.37%,较优化前提高了17.66%,并且具有广谱的抑菌活性。在此基础上测定了温度、紫外线辐射、蛋白酶、酸碱度和贮存条件对17-7菌株发酵滤液抗真菌物质稳定性的影响。结果表明:17-7菌株发酵滤液对高温不敏感;紫外线照射1 h后发酵滤液的抑菌活性开始显著下降,长时间紫外照射并不会丧失抑菌活性;17-7菌株发酵滤液还具有较好的酸碱耐受性,pH为3~10时其发酵滤液均能发挥较好的抑菌活性;并且对胰蛋白酶和胃蛋白酶不敏感;菌株发酵滤液在低温(4℃)和室温(25℃)条件下贮存120 d仍能保持较强生物活性。对17-7菌株无菌发酵滤液稳定性和贮存条件的研究可为后续该菌株的开发利用提供理论依据和数据支持。

关键词：链霉菌17-7 发酵配方优化稳定性抑菌活性

倭蜂猴粪便微生物苯酚羟化酶和邻苯二酚1,2-双加氧酶基因多样性研究

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微生物学通报 2015年第11期42卷 2189-2197页

作者：熊彩云许波戴利铭李俊俊唐湘华慕跃林杨云娟周峻沛丁俊美黄遵锡云南师范大学生命科学学院云南昆明650500 生物能源持续开发利用教育部工程研究中心云南昆明650500 云南省生物质能与环境生物技术重点实验室云南昆明650500 云南师范大学酶工程重点实验室云南昆明650500

【目的】分析倭蜂猴粪便微生物中苯酚羟化酶(Phenol hydroxylase,PH)和邻苯二酚1,2-双加氧酶(Catechol 1,2-dioxygenase,C12O)的基因多样性。【方法】利用简并引物,以倭蜂猴粪便微生物宏基因组DNA为模板,通过PCR扩增,分别构建PH和C12O... 详细信息

【目的】分析倭蜂猴粪便微生物中苯酚羟化酶(Phenol hydroxylase,PH)和邻苯二酚1,2-双加氧酶(Catechol 1,2-dioxygenase,C12O)的基因多样性。【方法】利用简并引物,以倭蜂猴粪便微生物宏基因组DNA为模板,通过PCR扩增,分别构建PH和C12O基因克隆文库,并对克隆进行测序分析。【结果】倭蜂猴粪便微生物来源的PH和C12O基因序列经BLAST比对分析,与Gen Bank中相应酶的序列一致性分别介于92%-100%和87%-100%。系统进化树分析表明PH基因序列与Neisseria、Burkholderia、Alcaligenes、Acinetobacter 4个属来源的PH序列相关;C12O基因序列全部与Acinetobacter来源的C12O序列相关。序列比对结果表明PH序列具有Lm PH(Largest subunit of multicomponent PH)中高保守的两个DEXRH结构域;C12O序列具有能被Ag+和Hg2+抑制的位点(半胱氨酸)。【结论】倭蜂猴粪便微生物来源的PH为多组分PH,其降解苯酚的中间产物邻苯二酚可以被C12O通过邻位开环途径裂解。

关键词：倭蜂猴粪便微生物苯酚羟化酶邻苯二酚1 2-双加氧酶多样性