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宿主蛋白CaMKⅡ介导猪链球菌溶血素诱导PK-15细胞凋亡机制研究

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宿主蛋白CaMKⅡ介导猪链球菌溶血素诱导PK-15细胞凋亡机制研究

作者：戴世馨四川农业大学

学位级别：硕士

猪链球菌溶血素(Suilysin,Sly)是猪链球菌(Streptococcus suis,***)的主要毒力因子,其在猪链球菌的致病过程中发挥关键作用。前期研究发现钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)是介导重组猪... 详细信息

猪链球菌溶血素(Suilysin,Sly)是猪链球菌(Streptococcus suis,***)的主要毒力因子,其在猪链球菌的致病过程中发挥关键作用。前期研究发现钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca/calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)是介导重组猪链球菌溶血素(Recombinant suilysin,rSly)细胞毒性的关键宿主因子之一,本研究旨在探究CaMKⅡ介导rSly诱导猪肾细胞(Porcine kidney-15,PK-15)凋亡的机制。一、rSly诱导PK-15细胞毒性的模型构建研究一是成功制备并鉴定了可溶性rSly。本研究以猪2型链球菌基因组DNA为模板,扩增出Sly毒力基因(1455 bp),通过构建p Cold I-Sly重组质粒,将其转入大肠杆菌BL21,18℃,180 r/min诱导表达24 h,经SDS-PAGE、Western blotting鉴定及溶血活性测定,制备了55 k Da的具有良好溶血活性的rSly。二是构建了rSly诱导PK-15细胞毒性的模型。将0、0.3、0.6、1.2、2.4和4.8μg/m L的rSly分别染毒PK-15细胞6、12及24 h,通过观察细胞形态、测定细胞存活率和LDH释放率,发现rSly毒性呈明显剂量效应。研究构建的rSly诱导PK-15细胞毒性的模型是:确定rSly对PK-15细胞染毒浓度是0.3和0.6μg/m L;确定rSly对PK-15细胞染毒处理时间为24 h;确定rSly对PK-15细胞染毒测定指标有:(1)细胞生长特点:细胞形态发生拉长、间隙增大;(2)细胞存活率:rSly染毒浓度为0.3和0.6μg/m L的细胞存活率分别为89.06%和53.06%;(3)LDH释放率:rSly染毒浓度为0.3和0.6μg/m L的LDH释放率分别为25.32%、33.61%。二、宿主蛋白CaMKⅡ介导rSly诱导PK-15细胞凋亡研究一是验证了CaMKⅡ介导rSly的细胞毒性作用。首先,用0.3和0.6μg/m L的rSly分别处理PK-15细胞24 h,Western blotting检测到rSly增加了CaMKⅡ磷酸化;其次,细胞形态学观察及细胞活力测定结果均显示,使用KN93抑制CaMKⅡ活性能显著减轻rSly诱导的细胞毒性,提高细胞存活率(P<0.01),说明CaMKⅡ介导了rSly诱导的细胞毒性作用;最后,利用CRISPR/Cas9基因编辑技术分别在PK-15细胞上敲除编码CaMKⅡ四种亚型蛋白的CAMK2A、CAMK2B、CAMK2D、CAMK2G基因,rSly染毒4种基因敲除细胞,发现PK-15、PK-15细胞对rSly毒性的抵抗力增强,细胞存活率增加(P<0.01),揭示CaMKⅡ的α、β两种亚型在rSly诱导的细胞毒性中发挥主要作用。二是发现了CaMKⅡ可介导rSly诱导PK-15细胞凋亡。首先,通过测定凋亡、坏死性凋亡、自噬及焦亡的特征指标,发现rSly引起细胞死亡的主要途径为凋亡;其次,KN93抑制CaMKⅡ活性后,与rSly染毒正常PK-15细胞相比,AO-EB检测显示rSly诱导的细胞凋亡被抑制,且流式细胞术测定的细胞凋亡率降低了2.2倍,揭示CaMKⅡ可促进rSly诱导的PK-15细胞凋亡。三、宿主蛋白CaMKⅡ介导rSly诱导PK-15细胞的凋亡机制研究一是发现CaMKⅡ可介导rSly与细胞膜的结合。间接免疫荧光技术结果显示,抑制CaMKⅡ明显减少了rSly与PK-15细胞膜的结合。二是揭示CaMKⅡ可通过促进活性氧(Reactive oxygen species,ROS)生成从而促进rSly诱导的细胞凋亡。通过测定促凋亡因子ROS含量,结果显示抑制CaMKⅡ可显著减少rSly诱导的ROS生成(P<0.001),并利用ROS清除剂(N-acetyl-L-cysteine,NAC)预处理后显示NAC能够减少PK-15细胞凋亡,凋亡率降低了3.2倍,说明CaMKⅡ可通过促进ROS的生成从而促进rSly诱导的细胞凋亡。综上,本研究发现CaMKⅡ可促进rSly诱导的PK-15细胞凋亡,且CaMKⅡ是通过促进rSly与细胞膜结合以及ROS的生成来促进PK-15细胞的凋亡,这为今后继续深入阐明Sly的毒性机制提供了相应的理论依据。

关键词：猪链球菌溶血素钙/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ 细胞毒性细胞凋亡

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静音水下航行器的水动力特性数值研究

北京大学学报（自然科学版） 2024年第2期60卷 203-209页

作者：戴袁鋆任世成张纪华余超北京大学工学院力学与工程科学系北京100871 北京机电工程研究所北京100074

为了克服传统螺旋桨推进航行器推进效率低、灵活性差和噪声大的缺点,针对一种仿生柔性体推进的水下航行器的水动力特性进行数值研究,分析柔性体波动的振幅和波数对水动力特性的影响、仿生表面对水动力性能的影响以及整体设计对水动力特... 详细信息

为了克服传统螺旋桨推进航行器推进效率低、灵活性差和噪声大的缺点,针对一种仿生柔性体推进的水下航行器的水动力特性进行数值研究,分析柔性体波动的振幅和波数对水动力特性的影响、仿生表面对水动力性能的影响以及整体设计对水动力特性的影响。数值结果表明,增大振幅将显著地增大静水推力,同时增加推进阻力;增加波数则显著地增加推进阻力,并减小静水推力。此外,使用仿生表面和现有的前尖端设计,可以减小推进阻力。研究结果有利于进一步优化航行器,提高航行器推进效率。

关键词：水下航行器仿生推进柔性体水动力特性

种植体周炎探诊深度与影像学骨水平的相关性分析

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中华口腔医学杂志 2024年第5期59卷 472-478页

作者：高旭阳戴世爱冯向辉释栋北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科、国家口腔医学中心、国家口腔疾病临床医学研究中心、口腔生物材料和数字诊疗装备国家工程研究中心、口腔数字医学北京市重点实验室北京100081

目的探讨种植体周炎患者种植体周探诊深度(PPD)与影像学骨水平(rBL)的相关性。方法纳入2019年1月至2022年12月于北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科就诊的种植体周炎患者24例,涉及患病种植体30枚,另从2007年1月至2023年6月在北京大学... 详细信息

目的探讨种植体周炎患者种植体周探诊深度(PPD)与影像学骨水平(rBL)的相关性。方法纳入2019年1月至2022年12月于北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科就诊的种植体周炎患者24例,涉及患病种植体30枚,另从2007年1月至2023年6月在北京大学口腔医学院·口腔医院牙周科有电子检查记录的种植体中使用SPSS26.0软件进行简单随机抽样选取30枚健康种植体作为对照。在保留种植修复体的前提下,使用Williams牙周探针以轻力(约0.2 N)测量PPD(种植体袋底到黏膜边缘的距离),记录各种植体颊侧、舌侧、近中及远中共4个位点的PPD。应用根尖片测量健康种植体近远中影像学骨水平(rBL,种植体颈部参考点与骨缺损最根方位点之间的距离),应用根尖片和锥形束CT分别测量种植体周炎种植体近远中及颊舌侧rBL及骨缺损宽度(DW),并记录骨缺损类型。应用χ2检验、Spearman检验和Logistic回归分析PPD与rBL的相关性及临床探诊诊断与影像学诊断的一致性。结果30枚健康种植体的近中、远中共60个位点和30枚种植体周炎种植体近中、远中、颊侧、舌侧共120个位点,共计180个位点的PPD与rBL显著正相关(r=0.64,P<0.001)。χ2检验显示种植体周炎种植体中,rBL≥1 mm与PD≥6 mm显著相关[优势比(OR)=8.15,P<0.001]。多因素Logistic回归分析显示,在校正种植体颌位和检查位置后,rBL与PPD仍然存在统计学关联,以rBL<1 mm为参照,rBL≥1 mm且<2 mm组、rBL≥2 mm且<3 mm组及rBL≥3 mm组与PPD间的OR值分别为6.23(P=0.014)、2.77(P=0.183)和10.87(P=0.001)。结论种植体周炎种植体的PPD与rBL呈显著正相关,在保留修复体的前提下,PPD可作为辅助判断种植体周骨水平的临床检查指标。

关键词：牙种植骨质吸收口腔种植治疗种植体周炎种植体周探诊深度影像学检查边缘骨吸收

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停水

作文 2024年第17期 22-23页

作者：戴宸馨福建省漳州市长泰区第三实验小学

“宸馨，快醒醒，快醒醒！”老妈急促地喊道。“干吗呀，才七点钟！”我揉了揉惺忪的眼睛，生气地嚷嚷。“停水啦！”“什么？停水？”我的脑子一下子就清醒了许多。要知道，我可是一个名副其实的“小水牛”，一点儿也离不开水！我三下...

“宸馨，快醒醒，快醒醒！”老妈急促地喊道。“干吗呀，才七点钟！”我揉了揉惺忪的眼睛，生气地嚷嚷。“停水啦！”“什么？停水？”我的脑子一下子就清醒了许多。要知道，我可是一个名副其实的“小水牛”，一点儿也离不开水！我三下五除二把衣服穿好，来到卫生间。上完厕所，我习惯性地冲一下厕所，可是，我按了一下，却没有水出来。我拿起牙缸，往里面倒了一点儿昨天剩下的热水，又放了一点儿太阳能水。平时，我一般都是把漱口水倒掉，可是今天，爸爸让我把漱口水倒进水桶里。

关键词：

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复理石隧道防排水施工关键技术和质量控制

公路 2024年第2期69卷 162-165页

作者：戴世伟李雪曹义昌林海中国路桥工程有限责任公司北京市100011 中交一公局集团有限公司北京市100024

防水与排水施工是隧道施工中的重点和难点,对隧道工程的后期使用和质量有较大影响。目前隧道设计采取“防水、排水系统、截流引流、封堵地下水”的原则,以达到隧道防水、排水质量可靠的目标。结合欧洲黑山共和国南北高速公路ZECKA隧道... 详细信息

防水与排水施工是隧道施工中的重点和难点,对隧道工程的后期使用和质量有较大影响。目前隧道设计采取“防水、排水系统、截流引流、封堵地下水”的原则,以达到隧道防水、排水质量可靠的目标。结合欧洲黑山共和国南北高速公路ZECKA隧道施工情况,简述欧洲标准体系下复理石隧道防水及排水工程的施工关键技术和质量控制方法,减少工程中渗水与漏水情况的发生与发展,为同类工程提供借鉴。

关键词：隧道防排水复理石地区质量控制欧洲标准

间歇固结排水条件下上海原状饱和软黏土的动力特性试验

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世界地震工程 2024年第1期40卷 175-184页

作者：戴世安崔振东廖红建西安交通大学城市学院土木建筑工程系陕西西安710018 中国矿业大学力学与土木工程学院江苏徐州221116 西安交通大学人居环境与建筑工程学院陕西西安710049

针对高铁列车荷载引起的地基长期沉降,既有动三轴试验研究往往忽略高铁运营期间存在间歇期、加载方式实际为分阶段加载的情况。基于此,本文通过一系列循环三轴试验研究间歇阶段固结排水条件下上海饱和软黏土在动应力影响下的动力特性,... 详细信息

针对高铁列车荷载引起的地基长期沉降,既有动三轴试验研究往往忽略高铁运营期间存在间歇期、加载方式实际为分阶段加载的情况。基于此,本文通过一系列循环三轴试验研究间歇阶段固结排水条件下上海饱和软黏土在动应力影响下的动力特性,并探讨不同动应力和不同加载方式对土体轴向累积塑性应变的影响。研究结果表明:在不同动应力影响下,间歇期固结排水产生的轴向累积塑性应变增量随间歇阶段的后移始终呈非线性减小的发展趋势;当振次相同并且动应力幅值为10 kPa时,分阶段加载产生的累积塑性应变大约是连续加载的3倍;当振次相同并且动应力幅值为30 kPa时,连续加载产生的超孔压大约是分阶段加载产生的超孔压的5倍。分阶段加载使高铁地基产生更大的沉降,对高铁运营的安全性提出更高的要求。

关键词：高铁荷载原状饱和软黏土分阶段循环加载间歇固结排水动力特性

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贝雷梁设计中的相关问题探讨

公路 2024年第2期69卷 39-44页

作者：戴世伟危志豪中国路桥工程有限责任公司北京市100011 中交一公局集团有限公司北京市100024

贝雷梁是一种装配式横跨结构,具有自身承载能力大、安拆便捷、结构布置灵活、使用成本低等众多优点,现已被广泛运用于现代工程当中。但实际运用过程中,时常被一些常见问题所困扰。为此,针对实际工程应用中一些常见问题,如跨径布置、非... 详细信息

贝雷梁是一种装配式横跨结构,具有自身承载能力大、安拆便捷、结构布置灵活、使用成本低等众多优点,现已被广泛运用于现代工程当中。但实际运用过程中,时常被一些常见问题所困扰。为此,针对实际工程应用中一些常见问题,如跨径布置、非常规支点设置等,采用有限元软件从理论上探讨并分析原因,提出相应处理方案,同时也为后续类似问题的解决提供参考。

关键词：桥梁工程贝雷梁支点设置设计计算常见问题研究

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姑苏的竹

中学生阅读(初中版) 2024年第7期 10-11页

作者：戴晓露王鼎馨

古人有诗云:“可使食无肉,不可使居无竹。”竹,是姑苏这座水乡古城人文历史的重要载体,滋养出吴文化雅不废俗的特点。园中栽竹,文人咏竹,就连人们的日常生活也处处与竹“结缘”。论苏州园林之竹,当从沧浪亭开始。沧浪亭自宋代苏舜钦筑...

古人有诗云:“可使食无肉,不可使居无竹。”竹,是姑苏这座水乡古城人文历史的重要载体,滋养出吴文化雅不废俗的特点。园中栽竹,文人咏竹,就连人们的日常生活也处处与竹“结缘”。论苏州园林之竹,当从沧浪亭开始。沧浪亭自宋代苏舜钦筑园以来便以修竹为盛,是苏州古典园林中栽竹最早、竹的品种最多的一座。苏舜钦所写的《沧浪亭记》中,既有“前竹后水,水之阳又竹,无穷极”之言,亦有“澄川翠干,

关键词：

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RNA结合蛋白的组学解析与功能探索

化学学报 2024年第1期82卷 53-61页

作者：曾如馨陈鹏北京大学化学与分子工程学院化学生物学系、北京大学合成与功能生物分子中心北京100871

转录后调控在生理过程中占据十分重要的地位,其分子机制包含大量的核糖核酸(RNA)与蛋白质之间的相互作用.在RNA的整个生命周期中,RNA结合蛋白(RBPs)是相当关键的参与者和执行者,影响了细胞生理过程的运行及机体稳态的维持.研究RNA结合... 详细信息

转录后调控在生理过程中占据十分重要的地位,其分子机制包含大量的核糖核酸(RNA)与蛋白质之间的相互作用.在RNA的整个生命周期中,RNA结合蛋白(RBPs)是相当关键的参与者和执行者,影响了细胞生理过程的运行及机体稳态的维持.研究RNA结合蛋白质组,可以为发掘生物标志物、寻找疾病治疗的靶标提供重要信息.近年来,捕捉RBPs的手段推陈出新,从只能富集特定RNA的结合蛋白发展至可以实现全局性的RBPs鉴定,并对RBP的性质如空间分布、翻译后修饰所产生的影响进行了探索.聚焦于RBPs的组学解析手段以及功能蛋白质组探索,介绍现有的技术,总结技术特点并分析其所存在的问题,最后展望RBP组学研究技术改进的方向和应用前景.

关键词：核糖核酸(RNA)结合蛋白 RNA结合蛋白质组相分离空间分布翻译后修饰