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PBDC1蛋白的表达及其多克隆抗体的制备

基础医学与临床 2014年第2期34卷 222-225页

作者：戚武林胡江江曹玲玲赵辅昆张世馥浙江理工大学生命科学学院蛋白质组学与分子酶学研究室浙江杭州310018

目的原核表达、纯化PBDC1蛋白,制备PBDC1多克隆抗体。方法将PBDC1基因克隆到pET-28a(+)质粒中,构建成重组质粒pET-28a(+)-PBDC1。将此重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,IPTG诱导其在宿主菌中大量表达,并进行SDS-PAGE检测。经镍离子亲... 详细信息

目的原核表达、纯化PBDC1蛋白,制备PBDC1多克隆抗体。方法将PBDC1基因克隆到pET-28a(+)质粒中,构建成重组质粒pET-28a(+)-PBDC1。将此重组质粒转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,IPTG诱导其在宿主菌中大量表达,并进行SDS-PAGE检测。经镍离子亲和柱纯化得到PBDC1融合蛋白,并以此免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。结果经质谱鉴定,获得了高纯度的PBDC1蛋白。经Western blot验证,获得了抗PBDC1蛋白的多克隆抗体。结论成功获得抗PBDC1蛋白的多克隆抗体,为研究PBDC1在红系分化中的功能提供了有利工具。

关键词： PBDC1蛋白多克隆抗体

NonO蛋白在丁酸钠诱导小鼠红白血病细胞分化过程中的表达

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解剖学报 2014年第4期45卷 516-520页

作者：桑婷婷胡江江薛建有戚武林赵辅昆张世馥浙江理工大学生命科学学院杭州310018

目的探讨NonO蛋白在丁酸钠诱导小鼠红白血病(MEL)细胞向红细胞系分化过程中的表达变化。方法利用联苯胺染色观察丁酸钠诱导MEL细胞红细胞系分化情况,通过Western blotting、免疫细胞化学检测NonO蛋白在丁酸钠诱导MEL细胞分化的过程中表... 详细信息

目的探讨NonO蛋白在丁酸钠诱导小鼠红白血病(MEL)细胞向红细胞系分化过程中的表达变化。方法利用联苯胺染色观察丁酸钠诱导MEL细胞红细胞系分化情况,通过Western blotting、免疫细胞化学检测NonO蛋白在丁酸钠诱导MEL细胞分化的过程中表达量的变化,PCR技术检测NonO基因在RNA水平上的表达变化,免疫细胞化学技术检测NonO蛋白在MEL细胞中的定位。结果发现NonO在丁酸钠诱导MEL细胞向红细胞系分化过程中在基因水平和蛋白水平上均上调表达,NonO蛋白在MEL细胞中定位于细胞质和细胞核。结论NonO蛋白与丁酸钠诱导MEL细胞分化密切相关。

关键词： NonO蛋白小鼠红白血病细胞丁酸钠红细胞系分化免疫组织化学免疫印迹法

eIF4H低表达对MEL细胞增殖和红系分化的影响

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基础医学与临床 2014年第2期34卷 211-215页

作者：薛建有桑婷婷戚武林曹玲玲毛群铨朱晓芳张世馥浙江理工大学生命科学学院蛋白质组学与分子酶学研究室浙江杭州310018

目的探究eIF4H低表达对MEL细胞增殖和红系分化的影响。方法重组质粒载体eIF4H-shRNA-1或eIF4H-shRNA-2与pCMV-VSVG和pCMV-dR8.2共同转染HEK293T细胞,获得可使eIF4H低表达的慢病毒。慢病毒侵染MEL细胞,获得eIF4H低表达的MEL细胞稳定株,We... 详细信息

目的探究eIF4H低表达对MEL细胞增殖和红系分化的影响。方法重组质粒载体eIF4H-shRNA-1或eIF4H-shRNA-2与pCMV-VSVG和pCMV-dR8.2共同转染HEK293T细胞,获得可使eIF4H低表达的慢病毒。慢病毒侵染MEL细胞,获得eIF4H低表达的MEL细胞稳定株,Western blot检测干扰效果。MTT检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期;联苯胺染色观察红系分化情况。结果与对照组相比较,eIF4H-shRNA-2组细胞eIF4H表达明显下调,细胞增殖能力明显减弱(P<0.01),G1期细胞比例明显增加;经丁酸钠处理后eIF4H-shRNA-2组联苯胺阳性细胞明显增加(P<0.01)。结论成功构建eIF4H低表达MEL稳定株;eIF4H低表达抑制MEL细胞增殖能力;eIF4H低表达不能诱导MEL细胞红系分化,但可促进丁酸钠诱导MEL细胞红系分化。

关键词： eIF4H MEL细胞红系分化

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盐酸苯肼诱发小鼠网织红细胞条件的优化

基础医学与临床 2013年第6期33卷 749-751页

作者：曹玲玲何超薛建有毛群铨施鸣铭戚武林张世馥浙江理工大学生命科学学院蛋白质组学与分子酶学研究室浙江杭州310018

目的利用盐酸苯肼诱发小鼠产生网织红细胞的最佳条件选择。方法每天背部皮下给ICR和BALB/c小鼠注射1%盐酸苯肼100～400μL,连续9 d。每天尾静脉取血,利用煌焦油蓝染色,观察染色后网织红细胞的诱发效率并进行统计学分析。结果注射200μL... 详细信息

目的利用盐酸苯肼诱发小鼠产生网织红细胞的最佳条件选择。方法每天背部皮下给ICR和BALB/c小鼠注射1%盐酸苯肼100～400μL,连续9 d。每天尾静脉取血,利用煌焦油蓝染色,观察染色后网织红细胞的诱发效率并进行统计学分析。结果注射200μL盐酸苯肼的小鼠诱发的网织红细胞状态最好,第4天诱发效率最高,可达83.16%±3.41%;注射300和400μL盐酸苯肼的小鼠诱发的网织红细胞形态不规则,细胞状态较差小鼠很快死亡。结论 ICR小鼠及BALB/c小鼠网织红细胞诱发的最佳条件为:体质量25～35 g的小鼠每天注射200μL 1%盐酸苯肼,连续注射4 d。

关键词：网织红细胞盐酸苯肼诱发条件

RNAi介导的pirin低表达降低了K562细胞的红系分化能力

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基础医学与临床 2013年第7期33卷 888-891页

作者：毛群铨王婕曹玲玲薛建有戚武林朱晓芳张世馥浙江理工大学生命科学学院浙江杭州310018

目的研究pirin低表达对人红白血病细胞系K562红系分化和细胞活力的影响。方法通过短发卡RNA(shRNA)干扰技术,构建pirin低表达细胞稳定株,用Western blot方法对干扰效果进行检测,并用联苯胺染色和MTT法分别检测干扰pirin后对K562细胞的... 详细信息

目的研究pirin低表达对人红白血病细胞系K562红系分化和细胞活力的影响。方法通过短发卡RNA(shRNA)干扰技术,构建pirin低表达细胞稳定株,用Western blot方法对干扰效果进行检测,并用联苯胺染色和MTT法分别检测干扰pirin后对K562细胞的红系分化和增殖的影响。结果转染了pirin-shRNA的细胞其pirin的表达量明显低于对照组(随机干扰组),pirin低表达与对照组相比对细胞增殖无影响,但在诱导剂诱导分化过程中,血红蛋白的合成出现了显著性的降低(P<0.05)。结论 Pirin低表达不影响K562细胞的增殖能力,但能降低其红系分化能力。

关键词： K562细胞慢病毒 pirin 红系分化白血病

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春风染得田畴绿——湘阴县“一支书”风采录

学习导报 2004年第8期 34-36页

作者：戚旭明范武林

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废水中异生物合成有机污染物的遗传控制

环境污染与防治 1995年第2期17卷 31-34页

作者：戚新许武林浙江省工业环保设计研究所杭州310005 浙江医院杭州310013

随着化学工业的迅速发展,种类繁多、数量巨大的人工合成化学物质应运而生.其中80%是有毒或持久性的.这些污染物的处置技术已为工业化国家所重视,包括焚烧、填埋以及改良的生物处理等.其中应用生物技术处理有毒有害有机废水的新策略,国... 详细信息

随着化学工业的迅速发展,种类繁多、数量巨大的人工合成化学物质应运而生.其中80%是有毒或持久性的.这些污染物的处置技术已为工业化国家所重视,包括焚烧、填埋以及改良的生物处理等.其中应用生物技术处理有毒有害有机废水的新策略,国外已进行大量的研究,而利用遗传工程进行有机污染物处理的研究是一项新颖的课题.重组DNA技术已广泛应用于医学、发酵等工业领域。

关键词：废水处理异生物合成有机污染物遗传控制

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电磁射频辐射对人体健康的危害

环境污染与防治 1995年第3期17卷 31-33页

作者：许武林吕航戚新浙江医院杭州310013 浙江大学信电系杭州310027 浙江省工业环保设计研究所杭州310005

电磁辐射可分为电离辐射和非电离辐射两种.凡能引起物质电离的电磁辐射称为电离辐射,包括x射线、γ射线、α粒子、β粒子、中子、质子等.不足以导致组织电离的电磁辐射称为非电离辐射,包括极低频(ELF,3赫～3千赫)、甚低频(VLF,3～30千赫... 详细信息

电磁辐射可分为电离辐射和非电离辐射两种.凡能引起物质电离的电磁辐射称为电离辐射,包括x射线、γ射线、α粒子、β粒子、中子、质子等.不足以导致组织电离的电磁辐射称为非电离辐射,包括极低频(ELF,3赫～3千赫)、甚低频(VLF,3～30千赫)、射频(30千赫～300千兆赫)、红外线、可见光、紫外线及激光等.由于电离辐射的危害作用已比较明确和为众人所知,在此不再赘述.我们主要论述非电离辐射中的射频辐射的生物学效应和对人体健康的危害.

关键词：电磁射频辐射人体健康危害

应用VirB12蛋白建立检测牛布鲁菌血清抗体的方法

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中国兽医学报 2013年第3期33卷 400-403页

作者：王冲孙勇戚帅宋砚泽田武林崔敏薛雨佳张西臣闫广谋吉林大学动物医学学院吉林长春130062

从牛布鲁菌基因组中克隆出VirB12基因,以pET-28α(+)为模板构建VirB12原核表达载体pET-V12,pET-V12在E.coli BL21(DE3)中表达重组VirB12蛋白。经Western-blotting分析,表明重组的VirB12蛋白具有免疫原性。以纯化的VirB12蛋白为抗原,建立了间接ELISA检测牛布鲁菌抗体的方法。经对300份牛血清样品间接ELISA与虎红平板试验(RBPT)检测结果的比较,该方法的敏感性为89%,特异性为98.3%,准确度为92.7%。

关键词：牛布鲁菌 VirB12蛋白原核表达间接ELISA